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INTRODUCCIÓN
Oaxaca ocupa el sexto lugar en el censo nacional ganadero con 1,741,741 bovinos, aunque la producción de carne y leche de esta especie se encuentra en la posición 12 y el 17 respectivamente (SIAP, 2018). Este estado se caracteriza por un clima tropical húmedo, donde predominan hatos doble propósito, tipo lechería familiar de 30 animales; pastoreados en especies nativas de temporal. En esta región de México, existen enfermedades de impacto reproductivo que ponen en riesgo la producción de becerros. Estos problemas sanitarios incrementan el costo de producción por concepto de tratamientos, baja tasa de parición y menor volumen de leche por pérdidas de gestación. En México, más del 70% de los abortos se considerados de origen desconocido, aunado a estos problemas se suman los de salud, que comprometen la productividad eficiente de los animales (Escamilla et al., 2007). Dentro de las enfermedades más importantes están aquellas que afectan la reproducción, poniendo en riesgo la disponibilidad de becerros; además aumentan el costo de la producción por concepto de tratamientos (Rojo et al., 2009). Los agentes infecciosos asociados con desórdenes reproductivos en rumiantes, incluyen agentes virales abortivos, como Diarrea Viral Bovina (DVB) (Brodersen, 2014; Larghi, 2018) y Rinotraqueitis Infecciosa Bovina (IBR) (Baillargeon et al., 2017; Valas et al., 2019) de origen bacteriano a Brucella abortus (Zakia et al., 2016; Poester et al., 2013) y Leptospira (Martins y Lilenbaum., 2017; Lilenbaum y Martins., 2014). Por lo tanto, el objetivo del estudio fue determinar la frecuencia de anticuerpos contra brucelosis, leptospirosis, DVB e IBR en hatos bovinos doble propósito criados en diferentes regiones del estado de Oaxaca, México.
MATERIAL Y MÉTODOS
Ubicación geográfica y animales de estudio
El estudio se realizó en catorce municipios ubicados en la Sierra Norte, Itsmo y Costa, ubicados en el estado de Oaxaca (Cuadro 1). Se utilizaron 2,691 hembras bovinas de diferentes razas entre vaquillas con edad reproductiva (1.5 -3 años) y adultas (De 3 a 12 años). Estos animales representan 217 hatos bovinos de doble propósito, tipo lechería familiar. Los hatos muestreados no tenían antecedentes de vacunación contra brucelosis (BRU), diarrea viral bovina (DVB), rinotraqueitis infecciosa bovina (IBR) y leptospirosis (LEP).
Cuadro 1 Frecuencia de enfermedades a nivel hato e individual calculada en cuatro regiones del estado de Oaxaca
| HATOS | INDIVIDUAL | |||||||||
| Enfermedad | Región | n | (+) | PAH | n | (+) | PIA | Pre | IC95% | |
| Serra Norte | 120 | 0 | 0.0% | 1031 | 0 | 0.0% | -0.09 | (-10.9.-7.4%) | ||
| Brucelosis (Rivanol) | Itsmo | 57 | 2 | 3.5% | 964 | 1 | 0.10% | -9.07% | (-10.9.-7.3%) | |
| Costa | 40 | 3 | 7.5% | 696 | 3 | 0.43% | -8.8% | (-10.9.-6.72%) | ||
| Oaxaca | 217 | 5 | 2.3% | 2691 | 4 | 0.15% | -9.1% | (-10.1.-7.9%) | ||
| Sierra Norte | 120 | 91 | 75.8% | 1031 | 783 | 75.9% | 76.5% | (73.9, 79.1%) | ||
| Leptospirosis | Itsmo | 57 | 57 | 100% | 964 | 628 | 65.1% | 65.1% | (62.0, 68.1%) | |
| Costa | 40 | 40 | 100% | 696 | 323 | 46.4% | 45.3% | (41.5, 48.9%) | ||
| Oaxaca | 217 | 188 | 86.6% | 2691 | 1734 | 64.4% | 64.3% | (62.5, 66.1%) | ||
| Sierra Norte | 120 | 50 | 41.7% | 1031 | 420 | 40.7% | 46.4% | (43.4, 49.5%) | ||
| IBR | Itsmo | 57 | 54 | 94.7% | 964 | 262 | 27.2% | 30.6% | (27.7, 33.5%) | |
| Costa | 40 | 38 | 95.0% | 696 | 268 | 38.5% | 43.8% | (40.1, 47.5%) | ||
| Oaxaca | 217 | 142 | 65.4% | 2691 | 950 | 35.3% | 40.1% | (38.2, 41.9%) | ||
| Sierra Norte | 120 | 48 | 40.0% | 1031 | 430 | 41.7% | 40.8% | (37.8, 43.8%) | ||
| DVB | Itsmo | 57 | 38 | 66.7% | 964 | 307 | 31.8% | 30.3% | (27.4, 33.2%) | |
| Costa | 40 | 37 | 92.5% | 696 | 194 | 27.9% | 26.0% | (22.7, 29.3%) | ||
| Oaxaca | 217 | 123 | 56.7% | 2691 | 931 | 34.6% | 33.2% | (31.4, 35.0%) | ||
Para el cálculo de la Pre (prevalencia real) se consideró una N= 1,766,208 animales para el estado de Oaxaca (SIAP, 2018), una sensibilidad y especificidad por prueba de 83% y 93% para brucelosis (Rivanol); 98.2% y 96.4% para leptospirosis (MAT); 86.59% y 99.10% para IBR (ELISA); 96.94% y 97.84% para DVB (ELISA)
Diseño de estudio y muestreo
El diseño del estudio fue observacional descriptivo, tipo transversal. Se realizó un muestreo no probabilístico (por conveniencia), en hatos de productores cooperantes. En cada bovino muestreado se colectaron 10 ml de sangre (tubo desechable sin anticuagulante), mediante venopunción de la vena coccígea; utilizando equipo de extracción Vacutainer®. Las muestras fueron identificadas y colocadas en reposo durante 20 min aproximadamente a temperatura ambiente para el desprendimiento del coágulo, y después conservadas a 5°C para su transporte al laboratorio de enfermedades de los pequeños rumiantes, INIFAP, Palo Alto. Las muestras de sangre fueron centrifugadas a 20 x g por 10 min para la obtención de suero y almacenadas a -5°C hasta los análisis serológicos.
Pruebas serológicas
Para el diagnóstico de brucelosis, se utilizó la prueba de tarjeta al 8% (Aba test, PRONABIVE, México); las muestras positivas fueron confirmadas con la prueba de rivanol (Aba test PRONABIVE, México), considerando una muestra positiva, cuando los títulos eran ≥ 1:50 (NORMA Oficial Mexicana NOM-041-ZOO-1995).
El diagnóstico de leptospirosis se llevó a cabo empleando la prueba de aglutinación microscópica (MAT), utilizando seis serovariedades y tres cepas de referencia: Sejroe (serovariedad Wolffi), Sejroe (serovariedad Hardjo) y Tarassovi (serovariedad Tarassovi); así como tres de aislamiento nacional: Icterohaemorrhagiae (serovariedad Icterohaemorrhagiae), Sejroe (Hardjo prajitno) y Canicola (serovariedad Portland vere); considerando una muestra positiva cuando los títulos eran ≥ 1:100 (OIE, 2004).
Para la detección y cuantificación de anticuerpos contra DVB, se utilizó una prueba comercial: CIVTEST® BOVIS BVD/BD P80 de Laboratorios Hipra, S.A., siguiendo las instrucciones del fabricante, incluidos los procedimientos para la determinación del índice relativo (determinado a partir de la densidad óptica (OD) de las muestras y controles. Es un ELISA de bloqueo que detecta anticuerpos frente a una proteína específica (p80) presente en todas las cepas del vDBV.
Las placas se leyeron con un lector de ELISA, con una longitud de onda de 450 nm. Los resultados se expresaron en porcentaje de inhibición, de acuerdo a la siguiente fórmula: %IN= (media DO de control negativo-DO muestra/media DO de control negativo) *100.
Un porcentaje de inhibición menor a 50% es seronegativo.
Un porcentaje de inhibición igual o superior a 50% es seropositivo. Para el diagnóstico de IBR se usó una prueba comercial, CIVTEST® BOVIS IBR de Laboratorios Hipra, S.A., siguiendo las instrucciones del fabricante, incluidos los procedimientos para la determinación del índice relativo (determinado a partir de la densidad óptica (OD) de las muestras y controles. La prueba se basa en un ELISA indirecto, que detecta anticuerpos específicos contra el virus de la IBR. Las placas se leyeron con un lector de ELISA, con una longitud de onda de 450 nm. Los resultados se expresan en índice relativo x 100 de acuerdo a la siguiente fórmula:
IRPC= (DO muestra-media DO control negativo/media DO control positivo-media DO control negativo) *100
Un Índice relativo por cien (IRPC) menor o igual a 9 es un resultado negativo.
Un IRPC mayor de 9.0 e inferior a 15.0 es un resultado sospechoso. Un IRPC mayor a 15 es un resultado positivo.
Análisis estadístico
Se construyeron tablas de contingencia para calcular la frecuencia de animales seropositivos por enfermedad y región. A partir del número de muestras positivas a cada una de las pruebas serológicas se estimó la frecuencia aparente a nivel hato (pAH) e individual aparente (pIA). Con el valor de la sensibilidad y especificidad de cada prueba utilizada, el número de animales seropositivos dentro de cada enfermedad, el tamaño de población de bovinos en el estado de Oaxaca (N), tamaño de muestra (n) por región y total de animales muestreados, se calculó la prevalencia real (pre) y respectivos intervalos de confianza (IC95%), para cada enfermedad dentro de cada región (Noordhuizen et al., 1997). Para el cálculo de los datos se procesaron en el programa WinEpi (Working in Epidemiology, http://www.winepi.net/) de acuerdo a la siguiente fórmula: 𝑃𝑟𝑒= Prevalencia Ind Aparente -(1-Esp)/1-[(1-Esp)+(1-Sens)]
Debido a que el muestreo no fue proporcional al tamaño del hato, la prevalencia (p) y respectivo error estándar (E.E.p) fue corregido para el tamaño de hato mediante esta fórmula: 𝑝 = ∑𝑁𝑖𝑝𝑖/𝑁 y E.E.p= √𝐷 ∗ 𝐸. 𝐸.s, donde Ni es el tamaño del hato; pi la prevalencia del hato, 𝑁 = ∑𝑁𝑖 es el número total de bovinos en los hatos muestreados; D= el efecto del diseño (D= 1.96) (Bennett et al., 1991; Otte y Gumm, 1997); E.E.s el error estándar para un muestreo simple aleatorio (√𝑝𝑞/𝑛); n es el número total de animales muestreados (n= 2691). D fue calculado como 𝐷= 1+(𝑘, 1)re; siendo k el número de animales del hato y re la correlación dentro del hato, estimada a partir los componentes de un análisis de varianza de una vía que incluyó el efecto aleatorio del hato. El error estándar aproximado de re y D se obtuvo de
acuerdo a (Solis et al., 2003).
RESULTADOS
Brucelosis
En el cuadro 1, se presenta la frecuencia de brucelosis. Se observó una pAH= 2.3% hatos positivos a brucelosis con la prueba de rivanol, lo que corresponde a una pre= 9.1% (IC95 -10.1, -7.9%). Lo anterior equivale a un total de cuatro animales positivos, siendo la región Costa donde se observó mayor frecuencia de animales y la Sierra Norte donde no hubo reactores.
Leptospirosis
El 86.6% de los hatos muestreados tuvo al menos un animal positivo a leptospirosis, para alguna de las seis serovariedades que fueron incluidas en este estudio (cuadro 1), equivalente a una pre= 64.3% (IC95 62.5, 66.1%) en los animales muestreados. Las regiones Itsmo y Costa, tuvieron una pAH del 100%; sin embargo, la región Sierra Norte fue la pre más alta (76.5%). Las serovariedades que tuvieron mayor frecuencia fueron Hardjo prajitno (49.09%) e Icterohaemorrhagiae (34.89%); ambas de aislamiento nacional (cuadro 2).
Cuadro 2 Frecuencia de animales seropositivos a cada una de las serovariedades de Leptospira identificadas por región
| Serovariedad | Región | |||
|---|---|---|---|---|
| Sierra Norte | Costa | Itsmo | Total | |
| Canicols* | 2.03%(21/1031) | 32.76% (228/696) | 6.95% (67/964) | 12.00% (316/2691) |
| Hardjo | 25.80% (266/1031) | 19.68% (137/696) | 35.17% (339/964) | 27.60% (742/2691) |
| Hardjo prajitno* | 53.34% (550/1031) | 37.64% (262/696) | 52.80% (509/964) | 49.00% (1321/2691) |
| Icterohaemorrhagiae* | 57.13% (589/1031) | 35.78% (249/696) | 10.48% (101/964) | 34.90% (939/2691) |
| Tarassovi | 4.07% (42/1031) | 6.18% (43/696) | 7.26% (70/964) | 5.80% (155/2691) |
| Wolffi | 33.66% (347/1031) | 3.16% (22/696) | 7.57% (73/964) | 16.00% (442/2691) |
*Cepas nacionales
Rinotraqueitis infecciosa bovina
Se observó una pAH= 65.4% en los hatos muestreados en el estado de Oaxaca, y una pre= 40.1% (IC95 38.2, 41.9%) de animales con anticuerpos contra IBR; aunque la pAH fue mayor en la región Costa (95%) y la pre fue más alta en la Sierra Norte (46.4%).
Diarrea viral bovina
El 56.7% de los hatos tuvo anticuerpos contra DVB, con una pre= 33.2% (IC95 31.4, 35.0%) en los bovinos muestreados. Un mayor porcentaje de hatos afectados fueron ubicados en la Costa (92.5%); sin embargo, fue la región de la Sierra Norte donde se detectó la mayor pre (40.8%; IC95 37.8, 43.8%) de anticuerpos contra DVB.
DISCUSIÓN
A pesar de la importancia económica que representan los bovinos para el estado de Oaxaca y el impacto que tienen las enfermedades reproductivas, la frecuencia de estas enfermedades era desconocida. Sin embargo, se han realizado varios trabajos en otras regiones del país sobre la frecuencia de las cuatro enfermedades estudiadas (Rosete et al., 2018; Segura et al., 2010; Segura et al., 2003)
En este trabajo se encontró evidencia serológica, aunque con una frecuencia baja de la presencia de Brucella, en estas regiones de Oaxaca. Los resultados son similares a los que reporta el Servicio Nacional de Sanidad, Inocuidad y Calidad Agroalimentaria (SENASICA, 2014), de 0.09% para brucelosis bovina en dicho estado. En contraste, la prevalencia que reportan algunos autores en hatos lecheros de tipo intensivo, ubicados en zonas endémicas de esta enfermedad, son mucho más altos, influenciadas por el hacinamiento, falta de áreas exclusivas de parto, entre otras que favorecen la transmisión de la bacteria (Milián et al., 2016).
Los resultados de este trabajo demuestran una frecuencia serológica elevada de leptospirosis, DVB e IBR; que puede ser debido a la compra e introducción de bovinos provenientes de hatos infectados, la falta de barreras físicas, el contacto de los bovinos con otras producciones o no realizar cuarentena ni vacunación para evitar la aparición de manifestaciones clínicas de la enfermedad (Miyama et al., 2017;Milián et al., 2016; Gates et al., 2013; Lilenbaum y Martins., 2014 ; Muylkens et al., 2007 ; Nandi et al., 2009). Además, las condiciones de humedad que prevalecen en estas zonas favorecen la supervivencia de Leptospira fuera de los huéspedes, ocasionando que otros animales adquieran la infección. Con las pruebas serológicas no es posible determinar si la presencia de anticuerpos se debe a una infección reciente o de hace tiempo; lo que se puede concluir es que la gran mayoría de los animales están expuestos o viven en condiciones que permiten las infecciones con estos agentes, ya que en la mayoría de los hatos hubo por lo menos un animal seropositivo. En los estudios que se realizan en bovinos es la serovariedad Hardjo, la que mayor frecuencia tiene, debido a que los bovinos son reservorios de esta serovariedad y la transmisión entre ellos se facilita por contacto directo y no depende de factores medioambientales (Carmona et al., 2011; Olmo, 2019) . Segura et al., 2003 reportan una seroprevalencia de 62.8% en Yucatán; las serovariedades Hardjo y Tarassovi tuvieron la mayor seroprevalencia 54.1% y 53.3% respectivamente. Los resultados obtenidos en estos estudios coinciden con los obtenidos en el presente, siendo las serovariedades Hardjo, Wolffi e Icterohaemorrhagiae las diagnosticadas con mayor frecuencia (Carmona et al., 2011; Escamilla et al., 2007).
Los resultados de IBR son similares a los reportados, en estados de la zona sur del país; Solís et al., 2003 obtuvieron una seroprevalencia del 54.4% en el estado de Yucatán; Milián et al., 2016 reportan una seroprevalencia entre el 57-83% en ganado lechero en México. En estudios realizados al centro del país, las prevalencias reportadas difieren de nuestros resultados. Ojeda et al., 2016 en un estudio que realizaron para estimar la prevalencia de IBR en diferentes municipios del estado de México, reportaron 18% de animales seropositivos, lo cual coincide con Magaña et al., 2005 quienes reportan una tasa del 22% en bovinos de traspatio en Michoacán.
La frecuencia de la enfermedad varía en cada región, por lo que no se puede atribuir que el contacto estrecho sea el único factor que determine la alta prevalencia de la enfermedad, ya que se han reportado altas prevalencias de DVB e IBR en hatos lecheros y de doble propósito, donde los animales están en pastoreo (Milián et al., 2016). La frecuencia de DVB en el país también presenta resultados variables. En este estudio se obtuvo una frecuencia de 35.3%, Moles et al., 2002 reportaron 72.3% para DVB en bovinos de la zona centro de México, encontrando también presencia de anticuerpos contra IBR y leptospirosis; Romero et al., 2013 con 76.5% en Veracruz; Segura et al., 2016 con 47.8% en Tamaulipas; Escamilla et al., 2007 con 70% en Querétaro; Meléndez et al., 2010 con 32.8% en Aguascalientes; Segura et al., 2010 con 16.4% en Michoacán, Milián et al., 2016 reporta una prevalencia del 79% en diferentes sistemas de producción en varios estados de la república mexicana. Rosete et al., 2018 en un estudio realizado en Veracruz, Puebla y Tabasco; reportan que el 100 % de los hatos presentaron anticuerpos contra DVB, por lo que sugieren que el virus de la DVB está ampliamente distribuido en los tres estados.
En base a los resultados de este estudio se evidenció serológicamente la presencia de anticuerpos contra IBR, DVB y seis serovariedades de Leptospira en la población de estudio. En la región Sierra Norte se detectó el mayor porcentaje de animales con anticuerpos contra leptospirosis, diarrea viral bovina y rinotraqueitis infecciosa bovina; pero fue la región de la Costa donde se detectó mayor distribución de las cuatro enfermedades del estudio. Se debe realizar el aislamiento e identificación de los agentes causantes para que se implementen estrategias de prevención y control recomendables en cada caso.
CONCLUSIONES
El estudio determinó la presencia de anticuerpos contra leptospirosis (86.6%), IBR (65.4%), DVB (56.7%) y brucelosis (2.3%) en hatos bovinos de doble propósito, ubicados en diferentes municipios del Estado de Oaxaca, México. El nivel de distribución, frecuencia e impacto reproductivo y económico de estas enfermedades sugiere la implementación de medidas sanitarias que permitan prevenirlas y controlarlas.
