Color y calidad aparente del pasto

El análisis de varianza mostró que los efectos simples y de interacción, del estrés salino y los reguladores del crecimiento vegetal (RCV), fueron significativos en el color y la calidad aparente del pasto en todos los momentos de medición (Cuadro 1). Bajo la influencia tanto de la salinidad como de los RCV, la calidad aparente se perdió con el tiempo (Cuadro 2). La comparación de medias reveló que la calidad aparente alcanzó su máximo en las semanas dos y siete, bajo la interacción del tratamiento de salinidad control (es decir, sin salinidad) con todos los niveles de tratamiento de los RCV, y su mínimo fue con la salinidad de 6 dS·m^-1 y sin aplicación de RCV.

El efecto negativo de la salinidad sobre la calidad del pasto se mostró a través de la pérdida del contenido de clorofila en hojas, como se ha informado en otras investigaciones (^{Borowski, 2018}; ^{Uddin & Juraimi, 2013}). El efecto positivo del uso simultáneo de P4 y AS fue evidente en todas las semanas. Cuando estos reguladores de crecimiento se aplicaron simultáneamente, la calidad aparente del pasto se redujo con una pendiente más sutil (Cuadro 2). El aumento del color y verdor de las hojas puede atribuirse al incremento de densidad de células mesofílicas de las hojas y al mayor contenido de clorofila derivado de la aplicación de AS + P4. En otro estudio, la aplicación de AS alivió parcialmente los efectos negativos de la salinidad sobre la calidad aparente del pasto (^{Kurepin et al., 2017}).

Se ha informado que la aplicación exógena de AS puede influir en un conjunto de procesos diferentes en las plantas, como la fotosíntesis y la tasa de crecimiento; además, puede mejorar la absorción de nutrientes bajo condiciones de salinidad, y esto puede incrementar el crecimiento (^{Arghavani, Savadkoohi, & Mortazavi, 2017}). Por otro lado, ^{Beiraghdar, Yazdanpoor, Naderi, y Zakerin (2014)} mencionan que es posible que el AS aumente el contenido de clorofila en las hojas que están en el inicio de la senescencia.

Pérdida de electrolitos

La PE fue influenciada significativamente por los efectos tanto simples como de interacción de la salinidad y los RCV (Cuadro 3). De acuerdo con los resultados de la comparación de medias, la mayor PE se observó en el tratamiento con 6 dS·m^-1 de salinidad y 3 mM de AS, mientras que la menor PE se obtuvo con el tratamiento de salinidad control y 10 mg·L^-1 de P4, así como con el tratamiento de salinidad control y la combinación de ambos RCV (Figura 1). Estos resultados coinciden con los reportados por ^{Lu et al. (2017)} y ^{Zhang, Wu, Ervin, Shang, y Harich (2018)} en pastos y otras especies vegetales. En condiciones de estrés salino, la síntesis de radicales libres de oxígeno, que provoca la peroxidación de los ácidos grasos de la membrana y la sustitución del Na⁺ por Ca²⁺ en la membrana celular, incrementa la permeabilidad de la membrana y reduce su estabilidad, por lo que aumenta la PE. Es probable que el AS y la P4, que actúan como moléculas de señalización, mejoren la capacidad defensiva antioxidante de las plantas contra los daños de las EOR, lo que incrementa la estabilidad de la membrana y reduce la PE (^{Ahemad & Kibert, 2014}). El leve o nulo efecto de los RCV sobre la PE bajo 6 dS·m^-1 de salinidad puede atribuirse a que la tasa de pérdida fue demasiado alta.

Figura 1 Comparación de medias del efecto de la interacción de la salinidad y los reguladores del crecimiento vegetal sobre la pérdida de electrolitos. P4 = progesterona; AS = ácido salicílico. ^zMedias con la misma letra entre tratamientos de salinidad no difieren estadísticamente (Fisher, P ≤ 0.05). 

Carotenoides foliares

El análisis de varianza reveló que el efecto simple de la salinidad y su interacción con los RCV indujo diferencias significativas en el contenido de carotenoides foliares (Cuadro 3). Los datos de la comparación de medias de la interacción salinidad × RCV indicaron que el tratamiento con 6 dS·m^-1 de salinidad y sin RCV causó el menor contenido de carotenoides foliares, y el tratamiento sin salinidad y con AS + P4 presentó el mayor contenido de carotenoides foliares. La aplicación de AS y P4 en pastos expuestos a salinidad incrementó significativamente el contenido de carotenoides en comparación con las plantas no tratadas con estos reguladores (Figura 2). ^{Taibi et al. (2016)} mencionan que la salinidad reduce el contenido de carotenoides en 20 %. Asimismo, ^{Idrees, Khan, Aftab, Naeem, y Hashmi (2010)} señalan que la aplicación de reguladores de crecimiento incrementa los pigmentos de las plantas, tanto bajo condiciones estresantes como normales. De acuerdo con ^{Chaparzadeh y Hosseinzad-Behboud (2015)}, la aplicación de AS bajo estrés por salinidad incrementa los carotenoides foliares.

Figura 2 Comparación de medias del efecto de la interacción de la salinidad y los reguladores del crecimiento vegetal sobre los carotenoides foliares. P4 = progesterona; AS = ácido salicílico. ^zMedias con la misma letra entre tratamientos de salinidad no difieren estadísticamente (Fisher, P ≤ 0.05). 

Clorofila total

El contenido total de clorofila fue influenciado significativamente por los efectos simples y de interacción de la salinidad y de los RCV (Cuadro 3). La comparación de medias reveló que el contenido total de clorofila más alto y más bajo se observó en las plantas tratadas con 2 dS·m^-1 de salinidad y 10 mg·L^-1 de P4, y en aquellas tratadas con 6 dS·m^-1 de salinidad y sin reguladores de crecimiento, respectivamente (Figura 3), aunque no difirieron significativamente de otros tratamientos. En general, el estrés salino redujo el contenido total de clorofila. La pérdida de pigmentos fotosintéticos en plantas con estrés por salinidad podría estar asociada, principalmente, con la degradación de la estructura del cloroplasto y del sistema de fotosíntesis, la foto-oxidación de las clorofilas y su reacción con radicales de oxígeno, la destrucción de precursores de la síntesis de clorofila, la inhibición de la biosíntesis de nuevas clorofilas, la activación de enzimas oxidantes de la clorofila (como la clorofilasa) y los trastornos hormonales (^{Grzeszczuk, Salachna, & Meller, 2018}; ^{Stepien & Klobus, 2006}; ^{Taiz & Zeiger, 2009}). No obstante, la acumulación de Na⁺ y Cl^- en las hojas bajo estrés salino tiene algún impacto negativo en el contenido de clorofila (^{Stepien & Klobus, 2006}). ^{Arghavani et al. (2017)} mencionan que la aplicación de AS mejora el contenido total de clorofila bajo salinidad, y este efecto fue más evidente con 80 mM de salinidad.

Figura 3 Comparación de medias del efecto de la interacción de la salinidad y los reguladores del crecimiento vegetal sobre la clorofila total. P4 = progesterona; AS = ácido salicílico. ^zMedias con la misma letra entre tratamientos de salinidad no difieren estadísticamente (Fisher, P ≤ 0.05). 

Prolina

El análisis de varianza mostró un efecto altamente significativo entre los tratamientos simples y de interacción de la salinidad y los RCV sobre el contenido de prolina (Cuadro 3). La comparación de medias sugirió que la salinidad a 6 dS·m^-1 y AS + P4 resultó en el contenido más alto de prolina, mientras que el nulo estrés por salinidad (testigo) y la aplicación de AS + P4 resultó en el contenido más bajo (Figura 4). El contenido de prolina foliar incrementó con el nivel de salinidad; sin embargo, existieron diferencias leves entre los diferentes niveles de RCV. El incremento en el nivel de prolina bajo estrés por salinidad está relacionado con que la prolina es un osmolito compatible que elimina el oxígeno libre sintetizado durante el estrés ambiental y protege las macromoléculas (^{Rahdari, Tavakoli, & Hosseini, 2012}). Los resultados del presente trabajo mostraron que con altos niveles de salinidad, la aplicación simultánea de AS y P4 fue la más efectiva en el contenido de prolina, lo cual coincide con otras investigaciones (^{Abdul-Qados, 2015}; ^{Agamy, Hafez, & Taha, 2013}). El impacto de los RCV sobre la acumulación de prolina puede aumentar el metabolismo de la prolina. Se ha observado que bajo condiciones de salinidad existe un aumento en la actividad de las enzimas biosintéticas de prolina, pirrolina5-carboxilato reductasa y gamma-glutamil quinasa, lo que resulta en un alto contenido de prolina (^{Misra, Misra, & Singh, 2010}).

Figura 4 Comparación de medias del efecto de la interacción de la salinidad y los reguladores del crecimiento vegetal sobre la prolina. P4 = progesterona; AS = ácido salicílico. ^zMedias con la misma letra entre tratamientos de salinidad no difieren estadísticamente (Fisher, P ≤ 0.05). 

Malondialdehido

De acuerdo con los resultados del análisis de varianza, el efecto simple de la salinidad y los RCV, así como su interacción, tuvieron un efecto significativo sobre el MDA (Cuadro 3). El mayor MDA se obtuvo con 6 dS·m^-1 de salinidad y sin aplicación de RCV, y el menor MDA, con la nula salinidad (testigo) y la aplicación simultánea de AS y P4. Los diferentes niveles de estrés salino aumentaron el MDA entre un 12 y 50 % (Figura 5). ^{Li et al. (2014)} reportaron un aumento de entre 13 y 45 % en el MDA con el incremento en la salinidad. Asimismo, los resultados mostraron que los RCV redujeron el MDA de pastos expuestos a salinidad (Figura 5); es decir, los RCV aliviaron el daño causado por la salinidad en las células, lo cual puede deberse a la reducción de los efectos destructivos de los radicales libres por parte del AS. Estos resultados son consistentes con los reportados por ^{Wang, Yang, Zhang, y Li (2009)}. En todos los niveles de estrés salino, el contenido de MDA fue menor con 10 mM de P4 que con 1 mM de P4, lo cual indica el efecto deseable de la P4 en la reducción de los efectos destructivos del estrés salino (Figura 5). Al parecer, la P4 obstaculiza la oxidación de la grasa al eliminar los radicales libres, lo que inhibe el incremento del MDA. ^{Erdal et al. (2012)} mostraron que la aplicación de P4 en condiciones de salinidad redujo el contenido de MDA en semillas de frijol.

Figura 5 Comparación de medias del efecto de la interacción de la salinidad y los reguladores del crecimiento vegetal sobre el malondialdehido. P4 = progesterona; AS = ácido salicílico. ^zMedias con la misma letra entre tratamientos de salinidad no difieren estadísticamente (Fisher, P ≤ 0.05). 

Superóxido dismutasa

El análisis de varianza mostró que los efectos simples y de interacción, de la salinidad y los RCV, fueron significativos en la actividad de la SOD (Cuadro 3). La mayor actividad de la SOD (15.14 mg·g^-1 de proteína en base seca) se obtuvo en plantas expuestas a 4 dS·m^-1 de salinidad y 1 mg·L^-1 de P4, mientras que la menor actividad se observó con la exposición a 4 dS·m^-1 de salinidad y 3 mM de AS (Figura 6). Los aniones superóxido sintetizados por las plantas bajo salinidad aumentan la respiración celular y la producción de iones destructivos en la mitocondria. En estas condiciones, la enzima SOD, como una enzima de destrucción de iones superóxido, presenta un incremento (^{Fikret, Manar, Şebnem, Şebnem, Şebnem, & Ozlem, 2013}). En el presente trabajo se observó que la aplicación foliar de AS y P4 incrementó la actividad de la SOD, lo cual resulta en una mayor desintoxicación de superóxidos y alivia los daños en las plantas. Al parecer, la P4 y el AS están involucrados en la reducción de los efectos destructivos de la salinidad, de modo que mejoran la resistencia a la salinidad al aumentar la actividad enzimática. ^{Shahmoradi y Naderi (2018)} informaron que la aplicación de AS moderó los efectos negativos de la salinidad al reducir el estrés oxidativo que se genera mediante el incremento de la actividad de las enzimas antioxidantes. ^{Erdal y Dumlupinar (2010)} reportaron que la aplicación de P4 resultó en una alta actividad de la SOD en chícharos.

Figura 6 Comparación de medias del efecto de la interacción de la salinidad y los reguladores del crecimiento vegetal sobre la superóxido dismutasa. P4 = progesterona; AS = ácido salicílico. ^zMedias con la misma letra entre tratamientos de salinidad no difieren estadísticamente (Fisher, P ≤ 0.05). 

Ascorbato peroxidasa

Los efectos simples y de interacción, de la salinidad y los RCV, fueron significativos en la APX (Cuadro 3). La APX más alta se obtuvo con el uso simultáneo de AS y P4 más 6 dS·m^-1 de salinidad, mientras que la actividad más baja se presentó con el tratamiento control y 1 mg de P4 (Figura 7). El AS y la P4 estimulan, directa o indirectamente, la síntesis de enzimas antioxidantes como la peroxidasa, lo que contribuye a la eliminación de las EOR sintetizadas durante el estrés. Lo anterior debido a que dichas enzimas pueden actuar como sustrato del donador de electrones para la peroxidasa y desempeñar un papel en la mitigación del estrés (^{Erdal & Dumlupinar, 2010}; ^{Shahmoradi & Naderi, 2018}). Es evidente, a partir de estos resultados, que el estrés salino conduce al estrés oxidativo, el cual es responsable del incremento de la actividad de las enzimas antioxidantes. Estas enzimas desintoxicantes mitigan el estrés y eliminan las cantidades excesivas de H₂O₂. Asimismo, al estimular las enzimas antioxidantes en condiciones de estrés, el AS crea un sistema de alivio del estrés en las plantas (^{Morsi, Abdelmigid, & Aljoudi, 2018}). El estrés salino provocó el aumento de la actividad de la APX, lo cual coincide con lo reportado por ^{Ma, Zheng, Zhang, Hu, y Qian (2017)}, quienes obtuvieron un incremento de entre 8 y 50 % en la actividad de la APX bajo salinidad.

Figura 7 Comparación de medias del efecto de la interacción de la salinidad y los reguladores del crecimiento vegetal sobre la ascorbato peroxidasa. P4 = progesterona; AS = ácido salicílico. ^zMedias con la misma letra entre tratamientos de salinidad no difieren estadísticamente (Fisher, P ≤ 0.05).