Aislamiento del patógeno y condiciones de crecimiento

En 2019, se recolectaron tallos y hojas de plantas de jitomate en invernaderos de las variedades Benedetti (19° 52’ 11.2” N 98° 02’ 10.7” W), Reserva (19° 52’ 12.9” N 98° 02’ 12.8” W) y Pai Pai (19° 52’ 17.4” N 98° 02’ 15.3” W) con síntomas de marchitez en la localidad de Chignahuapan, Puebla. Las muestras de tejido (0.5 cm) se desinfestaron con hipoclorito de sodio al 1% y se lavaron tres veces con agua destilada estéril; después se colocaron en tubos con 3 mL de solución salina (0.85%) estéril durante 1 h. 20 µL de esta suspensión se sembró en medio de cultivo agar nutritivo (AN) (Sigma-Aldrich) y se incubó a 28 °C por 48 h. Las bacterias purificadas se identificaron morfológicamente de acuerdo a Cmm (^{EPPO, 2016}). Las bacterias se preservaron en cultivo criogénico a -80 °C en medio Luria Bertani (Merck) y 40% de glicerol.

Agresividad de Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis

Los aislamientos de Cmm (CP_Cmm-1 a CP_Cmm-12) se inocularon individualmente en tres plántulas de jitomate var. Reserva en invernadero en estado fenológico de cuatro hojas verdaderas; la inoculación se realizó mediante el corte de la hoja apical con tijeras embebidas (^{Thyr, 1968}) en una suspensión celular con 3 x 10⁸ UFC mL^-1 basado en el patrón de turbidez de la escala de McFarland (^{McFarland, 1907}). La aparición de síntomas de marchitez en las plantas inoculadas se registró durante 13 días y se seleccionó el aislamiento más agresivo (cepa CP_Cmm-1 en este estudio) basado en el periodo de incubación (PI) el cual se consideró como el tiempo (días) transcurrido entre la inoculación y la aparición de síntomas de marchitez en las plantas inoculadas. Las plantas testigo se inocularon con agua destilada estéril. Del tejido interno del tallo de las plantas con síntomas de marchitez se reaislaron bacterias con las mismas características fenotípicas de la cepa inoculada y se identificó como Cmm por PCR.

Caracterización e identificación de Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis

El aislamiento CP_Cmm-1 se caracterizó de acuerdo a los protocolos descritos por ^{Schaad et al. (2001}). Además, se utilizaron los sistemas API20 E (Biomerieux, Durhan, NC, U.S.A.) y el kit comercial DAS-ELISA (Double Antibody Sandwich Enzyme Linked Immunosorbent Assay) (Agdia^® Inc, SRA 44000/0096) con anticuerpos específicos para Cmm. Así mismo, se infiltró una suspensión con 3 x 10⁸ UFC mL^-1 de la cepa CP_Cmm-1 en el envés de hojas de tabaco (Nicotiana tabacum) y maravilla (Mirabilis jalapa).

Para la identificación por PCR, el ADN de la cepa CP_Cmm-1 se obtuvo de colonias individuales con 72 h de crecimiento a 28 °C en medio AN con el kit PureLink Genomic DNA Kits (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, U.S.A.) siguiendo el protocolo del fabricante. Por PCR se amplificó el plásmido pCM2 que alberga el fragmento específico del gen pat-1 (serina proteasa) de 614 pb de Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis con los iniciadores CMM5F-5´GCGAATAAGCCCATATCAA 3´ y CMM6R-5´ CGTCAGGAGGTCGCTAATA 3´ y condiciones de PCR descritos por ^{Dreier et al. (1997}). La PCR se realizó en un termociclador (C1000 Touch TM Thermal Cycler) y los fragmentos amplificados se secuenciaron en el Instituto de Biotecnología de la UNAM (IBT). Las secuencias se compararon en el banco de genes (Gen Bank) del Centro Internacional para la Información en Biotecnología (NCBI-National Center of Biotechnology Information), empleando el algoritmo Blastx (^{Altschul et al., 1990}) del Centro Nacional de Información Biotecnológica (NCBI) (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Blast).

Inoculación de Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis en variedades de jitomate

Este estudio se realizó como un factorial en un diseño bloques completos al azar con cuatro repeticiones; el primer factor utilizó 10 variedades de jitomate: 1) Benedetti, 2) Reserva, 3) Malvia, 4) USATX12227, 5) Sahel, 6) Pai-Pai, 7) Súper óptimo, 8) Nápoles 9) Sv4401 y 10) Tobalá. Después de la germinación de la semilla; las plántulas se trasplantaron en bolsas de plástico negro (2 kg), con una mezcla de peat moss, tierra vega y tepezil (2:1:1) y se mantuvieron en invernadero con una humedad relativa >70 y temperatura entre 30 y 33 °C. Las plantas se regaron diariamente y se fertilizaron dos veces por semana con la formulación nutritiva Steiner (^{Steiner, 1984}).

La cepa CP_Cmm-1 se inoculó en la hoja apical de cada variedad de jitomate (n=10) mediante el corte con tijeras embebidas en una suspensión celular (^{Thyr, 1968}) ajustada con 3x10⁸ UFC mL^-1 utilizando la escala de McFarland y confirmado por recuento en placa en medio AN después de 72 h a 28 ^oC (^{Klement et al., 1990}). El segundo factor contempló dos etapas de desarrollo fenológico en tratamientos independientes, al desarrollo de 1) cinco hojas verdaderas, 2) 10 hojas verdaderas. Cada variedad se inoculó en 10 plantas (repeticiones). La inoculación de todas las variedades fue simultánea y se realizó en un periodo de 60 min. Las plantas testigo se inocularon con agua destilada estéril. La aparición de síntomas se registró diariamente durante 30 días después de la inoculación (ddi); para evaluar la severidad, se diseñó una escala visual arbitraria de 0 a 4 donde 0= planta sana, 1= marchitez de hojas, 2= epinastia, clorosis de hojas, 3= colonización vascular de tallo y 4=cancro en tallo y colonización interna del fruto. La variable analizada fue el tiempo (número de días en llegar al grado 4 de severidad) con la interacción de los factores: variedad de jitomate-etapa fenológica- desarrollo de síntomas. Los datos se analizaron con el programa estadístico R versión 4.0.5 (^{Avello y Seisdedo, 2017}). Del tejido interno del tallo de cada variedad se reaisló la bacteria inoculada y se identificó por PCR.

Sensibilidad in vitro a bactericidas

Se evaluaron ocho bactericidas comerciales a la concentración recomendada en etiqueta, en stock de 25 mL de agua: 1) Sulfato de estreptomicina + Oxitetraciclina + Sulfato tribásico de cobre monohidratado, 1.5 g (Cuprimicin 500) (Ingeniería Industrial); 2) Estreptomicina + Oxitetraciclina, 0.2 g (Bactrol 2x) (Ingeniería industrial); 3) Clorhidrato de oxitetraciclina, 0.5 g (Cuprimicin Agrícola 5%) (Ingeniería Industrial); 4) Estreptomicina + Oxitetraciclina, 1 g (Bactiomicin Agrícola) (AgriBest); 5) Cuaternario de Amonio, 3.5 mL (Quatz IV) (Alterna Agro); 6) Kasugamicina, 0.17 mL (Kasumin) (Gowan Mexicana); 7) Sulfato de estreptomicina, 0.2 g (Cuprimicin 17) (Ingeniería Industrial); 8) Sulfato de Gentamicina + Clorhidrato de Oxitetraciclina, 1.5 g (Final Bacter) (FormulAbagro de México).

La sensibilidad in vitro contra la cepa CP_Cmm-1 se realizó por el método descrito por ^{Jung et al. (2014}) modificado: El inóculo de Clavibacter se obtuvo de un cultivo puro de 48 h a 28 ^oC en medio agar nutritivo; de aquí, se preparó una suspensión acuosa con 1 x 10⁸ UFC mL^-1. La sensibilidad se evaluó en microplacas de poliestireno (Thermo Scientific™) con 96 pocillos; a cada pocillo con 80 µL de medio caldo nutritivo se le agregó 10 µL de inóculo de Clavibacter y 10 µL de la solución bactericida; el testigo consistió de la inoculación de Clavibacter en caldo nutritivo sin bactericida. Las microplacas se incubaron a 28 ^oC y se registró la absorbancia a una densidad óptica (DO) de 600 nm a las 0, 12, 24, 48, 60, 72 y 84 h de crecimiento en un lector Multiskan Ascent V1.24 354-01843 Version-1.9.1. La sensibilidad a los bactericidas por Cmm se determinó por el menor valor de DO en el co-cultivo del patógeno con el bactericida con respecto al testigo. Se realizó un diseño factorial con medidas repetidas utilizando un modelo mixto donde los bloques y unidades experimentales son aleatorios, el modelo se ajustó con una función de correlación sin estructura entre tiempos, se contempló la heterogeneidad de varianza entre tratamientos en el modelo; todos los tratamientos se evaluaron por triplicado. Los datos de la interacción de Cmm con el bactericida se analizaron con el programa estadístico InfoStat versión 1.5 (^{Grupo Infostat 2003}).

Caracterización e identificación de Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis

Los 12 aislamientos de Cmm inoculados en jitomate var. Reserva causaron marchitez; sin embargo, el periodo de incubación (PI) fue diferente entre los aislamientos. Los síntomas de marchitez en las plántulas inoculadas se observaron en un rango entre 5 y 12 ddi. El aislamiento CP_Cmm-1 de Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (aislado de la var. Reserva) mostró mayor agresividad causando marchitez a los 5 ddi (PI) por lo que se seleccionó para este estudio. En las plantas testigo no se observó el desarrollo de ningún síntoma. Estos resultados coinciden con lo reportado por ^{Tancos et al. (2013}) quienes demostraron diferencias en la virulencia entre cepas de Cmm. Otros estudios identificaron haplotipos de Cmm con mayor virulencia y agresividad en algunas zonas productoras de jitomate que en otras y sugieren la existencia de tipos de secuencia que se adaptan a determinada región, genotipo de jitomate, condiciones de clima y sistema de producción (^{Croce et al., 2016}; ^{Martínez-Castro et al., 2018}; ^{Thapa et al., 2017}). Esta diversidad puede ser consecuencia de la introducción de nuevas cepas de Cmm de diferente origen principalmente por la importación de semilla (^{Yuqing et al., 2018}). La caracterización fenotípica de la cepa CP_Cmm-1 mostró el crecimiento de colonias amarillo-naranja en medio YDC, Gram positivas, no mótiles, metabolismo oxidativo de glucosa, oxidasa negativa, produjeron ácido a partir de manosa, pero no de manitol, ribosa, sorbitol e inulina, hidroliza esculina pero no caseína, utilizan como fuente de carbono acetato y succinato de sodio; estas características se reportaron previamente para Clavibacter michiganensis subsp. michiganesis (^{EPPO, 2016}; ^{Schaad et al., 2001}).

El fenotipo de la cepa CP_Cmm-1 coincidió 97% con el sistema API20 E, y fue positivo por serología con el sistema DAS-ELISA. Por PCR se amplificó el fragmento del gen pat-1 (serina proteasa) de 614 pb del plásmido pCM2 de Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis con los iniciadores CMM5F y CMM6R. El gen pat-1 (serina proteasa) confiere patogenicidad en Cmm y es un importante determinante de virulencia para la producción de polisacáridos extracelulares, celulasas, glucanasas y otras enzimas, que inducen enfermedad en jitomate por la degradación de la pared celular en los vasos del xilema, causando el síntoma de marchitez (^{Eichenlaub y Gatermann, 2011}; ^{Wassermann et al., 2020}). La comparación de la secuencia en el GenBank del producto amplificado de PCR de la cepa Cp_Cmm-1, mostró 96.6% de identidad con C. michiganensis subsp. michiganensis NCPPB 382 plásmido pCM2 (accesión AM711866.1). La infiltración de la cepa CP_Cmm-1 en el envés de hojas de tabaco y maravilla indujo una reacción de hipersensibilidad lo cual coincide con lo reportado por ^{Alarcón et al. (1998}) y ^{Lu et al. (2015}), quienes demostraron la inducción de hipersensibilidad en estas mismas especies de plantas por la expresión de la proteína ChpG con cepas de Cmm virulento. Los resultados de la identificación de la cepa CP_Cmm-1 cumplen con el protocolo oficial para la caracterización e identificación de Cmm en muestras sintomáticas de jitomate, el cual sugiere la combinación de pruebas bioquímicas, serológicas, moleculares y patogenicidad de acuerdo con ^{EPPO (2016)}.

Respuesta de jitomate a Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis

La respuesta de las 10 variedades de jitomate inoculadas con la cepa Cp_Cmm-1 fue diferente. La técnica de inoculación mediante el corte del peciolo con tijeras embebidas en el inóculo se considera rápida y adecuada para la evaluación de tolerancia a la infección sistémica por Cmm (^{van Steekelenburg, 1985}). Los síntomas y la severidad de la enfermedad fueron diferente a través del tiempo y dependiente de la etapa fenológica (edad de la planta y número de hojas). En todas las variedades, excepto una, la aparición de síntomas fue con mayor rapidez y severidad en las plantas inoculadas con cinco que con 10 hojas verdaderas. Lo anterior sugiere que las características genéticas y la etapa fenológica de cada variedad son factores importantes para la expresión de virulencia por Cmm; estos resultados sugieren que a menor desarrollo de la planta la susceptibilidad y severidad por la infección de este patógeno es mayor.

Los síntomas en ambas etapas fenológicas (cinco y 10 hojas) durante y al final de la evaluación (30 ddi) incluyeron todos los grados de severidad (marchitez de hojas, clorosis, infección vascular, cancro en tallo y colonización del fruto) en todas las variedades. Sin embargo, los resultados del análisis estadístico con la interacción de los factores: variedad de jitomate-etapa fenológica- desarrollo de síntomas, indicaron que la variedad Sahel fue diferente significativamente del resto (*= p≤0.05) con el mayor promedio de días (13.7 y 14.5 ) para la aparición y desarrollo de todos los síntomas tanto en la etapa de cinco como 10 hojas verdaderas respectivamente. Así mismo, esta variedad mostró la menor severidad de síntomas, lo que sugiere mayor tolerancia a la infección por Cmm en ambas etapas fenológicas que el resto de las variedades. En contraste, las variedades Sv4401, Nápoles y Súper óptimo fueron altamente susceptibles en la etapa de cinco hojas. Entre estas, la variedad Sv4401 mostró la mayor susceptibilidad y severidad entre todas las variedades en las dos etapas fenológicas (cinco y 10 hojas), con el menor promedio (5.5 y 9 días) respectivamente para la aparición y desarrollo de los síntomas (Cuadro 1); además, las plantas de esta variedad mostraron un porte de menor altura, abundante exudado bacteriano en peciolos, tallos con cancro severo, y extensiva colonización interna del fruto.

Estos resultados son similares a otras investigaciones; ^{Stüwe y Tiederman et al. (2013}), en ensayos de invernadero identificó genotipos de jitomate que mostraron mayor severidad de síntomas causados por Cmm en contraste con otros bajo las mismas condiciones experimentales de inoculación. Así mismo, los resultados de nuestro estudio evidencian la dificultad de encontrar variedades de jitomate tolerantes a la infección causado por Cmm; en un estudio en China, cinco de 25 genotipos de jitomate se catalogaron como moderadamente resistentes y ninguno con alta resistencia o resistencia completa a la infección por Cmm (^{Yuqing et al., 2018}); en tanto ^{Kabas et al. (2018}) de 78 genotipos clasificó 55% como muy susceptibles, 39% susceptibles, 4% moderadamente resistentes y únicamente 2% como tolerantes a la infección por Cmm.

Diversos factores explican la severidad de los síntomas causados por la infección de Cmm entre diferentes genotipos de jitomate; uno de ellos es la edad de la planta; ^{Nandi et al. (2018}) y ^{Sharabani et al. (2013b)} mostraron que algunas variedades de jitomate que se infectan en etapas de desarrollo tardías, pueden ser asintomáticas o desarrollar marchitez lenta; sin embargo, en infecciones tempranas, la bacteria se multiplica en los vasos del xilema y forma biopelículas (^{Lelis et al., 2014}) que le permite colonizar con altas densidades y causar una infección sistémica que origina síntomas severos de marchitez, cancro en tallo, discoloración vascular e infección del fruto (^{Bae et al., 2015}; ^{Chalupowicz et al., 2012}; ^{Tancos et al., 2013}); en este estudio, estos mismos síntomas se observaron en las variedades más susceptibles con la inoculación de la cepa CP_Cmm-1 (Figura 1).

Infección sistémica en variedades de jitomate

La infección sistémica por Cmm produce los síntomas de marchitez y clorosis de hojas, daño en el xilema, cancro en tallo e infección del fruto. En esta investigación, las 10 variedades inoculadas con la cepa Cp_Cmm-1 desarrollaron todos estos síntomas excepto la variedad Sahel. La diferencia en la severidad de los síntomas fue evidente entre la variedad con mayor tolerancia y las de mayor susceptibilidad (Figura 1). El desarrollo del síndrome está relacionado con la infección de cepas altamente virulentas de Cmm (^{Chalupowicz et al., 2017}), lo que sugiere que la cepa Cp_Cmm-1, utilizada en este estudio, podría encontrarse en este grupo.

La infección sistémica, marchitez y clorosis de hojas, cancro en tallo e infección del fruto fue más severa en las variedades susceptibles Súper óptimo, USATX12227 y Sv4401; en contraste con la variedad con mayor tolerancia (Sahel) en la cual todos los síntomas fueron notoriamente menos severos y no hubo infección de frutos en ambas etapas fenológicas. En las variedades susceptibles, el xilema del tallo mostró síntomas desde decoloración de tejidos vasculares entre amarillo, café claro y café obscuro hasta la degradación de la médula del tallo (Figura 1).

Figura 1 Severidad de síntomas desarrollados a los 30 ddi con Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (cepa CP_Cmm-1) en variedades de jitomate con mayor tolerancia y susceptibilidad: A) testigo, B y C) clorosis y marchitez en hojas, D) infección sistémica en el xilema del tallo, E) cancro en tallo y F) colonización interna de fruto. 

Los mecanismos moleculares relacionados con la respuesta de la planta de jitomate a la infección por Cmm son complejos y muchos aspectos actualmente no están completamente dilucidados. ^{Stüwe y Tiedemann et al. (2013}) observaron mayor oclusión de los vasos del xilema y menos tílides en variedades de jitomate susceptibles a Cmm. Así mismo, ^{Eichenlaub y Gatermann (2011}) demostraron que en el periodo de incubación y severidad de la enfermedad influyó la temperatura, variedad, edad de la planta y concentración del inóculo. La infección sistémica por Cmm se relacionó con alta densidad de población (>10⁸ UFC g^-1 tejido) en la planta infectada (^{Gartemann et al., 2003}), producción de las enzimas pectato liasa, celulasas y xilanasa que degradan las células del xilema y originan el cancro en tallo (^{Chalupowicz et al., 2012}; ^{Gartemann et al., 2008}); inducción por la planta de proteínas relacionadas a la patogénesis (PR) (^{Savidor et al., 2012}), así como la concentración de amonio y ácidos carboxílicos en el fluido del xilema en ciertas variedades de jitomate (^{Bialczyk et al., 2004}; ^{Yadeta et al., 2013}), respuesta de la planta a concentraciones de etileno inducido por la infección de Cmm (^{Balaji et al., 2008}) y a las concentraciones del compuesto antimicrobiano α-toamtina producido por la planta que afecta el crecimiento de Cmm (^{Eichenlaub y Gatermann, 2011}).

Estudios previos con jitomate silvestre sugirieron que la morfología vascular es un factor importante en la tolerancia a Cmm (^{Coaker et al., 2004}). Muchos de los factores anteriores podrían explicar la mayor tolerancia de la variedad Sahel identificada en esta investigación, la cual destacó por la menor severidad de infección vascular, cancro en tallo y sin infección aparente en fruto. Por lo anterior, investigaciones futuras podrían profundizar en la interacción de esta variedad con Cmm y las bases genéticas de la tolerancia observada en este estudio.

Infección en fruto en variedades de jitomate

Al realizar un corte transversal del fruto, se observaron diferencias en la agresividad y severidad de la colonización e infección interna del fruto entre la variedad con mayor tolerancia (Sahel) en donde los síntomas de marchitez y cancro fueron menos severos y sin colonización interna del fruto; en contraste, en las variedades susceptibles (Súper óptimo, Nápoles y Sv4401) se observó mayor severidad de los síntomas de marchitez, daño en el xilema, cancro en tallo y una extensiva colonización interna del patógeno en el fruto. El tejido interno en estos frutos mostró decoloración de tejido vascular y degradación de la médula (Figura 1).

Estos mismos patrones de colonización en fruto son similares con los observados en otras investigaciones (^{Tancos et al., 2013}). La infección en frutos es resultado de la extensiva colonización de Cmm en el xilema de la planta de donde se dispersa hasta ingresar a través del pedicelo e infectar frutos y semillas (^{de León et al., 2011}; ^{Eichenlaub y Gartemann, 2011}). En esta investigación, en los frutos con alta colonización interna en las variedades más susceptibles no se observaron síntomas externos, aparentemente aptos para su comercialización; sin embargo, representan una eficiente fuente de inóculo para sucesivas estaciones de crecimiento (^{Nandi et al., 2018}), principalmente a través de la semilla infectada (^{de León et al., 2011}).

Del tejido interno del tallo con síntomas de degradación y necrosis del xilema de cada variedad, se re-aislaron en cultivo puro colonias con las mismas características morfológicas de Cmm. La identidad de la cepa Cp_Cmm-1 inoculada se confirmó por PCR con la amplificación del plásmido pCM2 con el protocolo previamente descrito (Figura 2).

Figura 2 Amplificación del plásmido pCM2 -1 por PCR de la cepa Cp_Cmm-1 inoculada en 10 variedades de jitomate. Líneas: 1: marcador molecular de 100pb, 2: control (-), 3: control (+) 14: control (+), 4: Benedetti, 5: Reserva, 6: Malvia, 7: USATX12227, 8: Sahel, 9: Pai-Pai, 10: Súper óptimo, 11: Nápoles, 12: Sv4401, 13: Tobalá y 15: marcador molecular de 100pb. 

Sensibilidad in vitro a bactericidas

Los resultados de la sensibilidad de la cepa CP_Cmm-1 a los bactericidas evaluados mostraron diferencias significativas (*= p≤0.05) con las formulaciones de Sulfato de estreptomicina + Oxitetraciclina + Sulfato tribásico de cobre monohidratado (Cuprimicin 500) y Kasugamicina (Kasumin) en la reducción del crecimiento celular. Los valores de la DO del co-cultivo de Clavibacter con estos bactericidas fueron significativamente menores que el testigo, donde se verificó la normalidad con la prueba de Shapiro-wilks. El porcentaje de crecimiento celular de Cmm decreció 19 y 18 % con los tratamientos: sulfato de estreptomicina + oxitetraciclina + sulfato tribásico de cobre monohidratado (Cuprimicin 500) y kasugamicina (Kasumin) respectivamente a las 84 h de interacción (Figura 3).

Figura 3 Sensibilidad in vitro a bactericidas de Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis cepa CP_Cmm-1. Interacción del co-cultivo con bactericidas a las 84 h a 28 ^o C. Lecturas de la densidad de crecimiento celular, absorbancia 600 nm (DO). Medias con una letra común no son significativamente diferentes (*= p≤0.05). 

Los resultados coinciden con ^{de León et al. (2008}); ^{Milijašević et al. (2009}) y ^{Werner et al. (2002}); quienes reportan que el sulfato de cobre, oxitetraciclina y kasugamicina es efectivo contra Cmm y redujo la severidad de los síntomas foliares y daño al fruto (^{Theodoro y Maringoni, 2000}). Actualmente el uso de bactericidas en la agricultura es limitado; las aplicaciones de cobres y antibióticos, principalmente la estreptomicina y oxitetraciclina, están autorizados solo para algunos cultivos en muchos países y se ha demostrado la generación de resistencia por Cmm (^{Lyu et al., 2019}; ^{Valenzuela et al., 2019}). La kasugamicina solo se usa en la agricultura y su espectro es reducido (^{Sundin et al., 2016}); así mismo, en otras investigaciones se ha evidenciado que la kasugamicina reduce las poblaciones de patógenos bacterianos vasculares (^{Dias et al., 2019}; ^{McGhee y Sundin, 2011}). La estreptomicina ha sido usada para el control de enfermedades bacterianas en México disminuyendo la dispersión secundaria de inóculo (^{Félix-Gastélum et al., 2012}). La mejor estrategia de control de Cmm en jitomate se basa principalmente en estrictas medidas preventivas y prácticas culturales que incluyen el uso de variedades menos susceptibles, semilla certificada, plántula sana, desinfestación de herramientas e invernaderos y manejo con bactericidas que disminuyan el inóculo secundario del patógeno (^{de León et al., 2011}; ^{EFSA, 2014}; ^{Sundin et al., 2016}). Los resultados de esta investigación sugieren que la combinación del uso de la variedad Sahel, la kasugamicina, en conjunto con las medidas de manejo anteriores podría ser una estrategia útil para reducir el daño causado por Cmm.