INTRODUCCIÓN

En México la producción de ovinos destaca en la región del altiplano donde se ubica el Estado de México, la cual considerada una actividad socioeconómica integradora importante del sector agropecuario (^{SIAP, SAGARPA, 2016}). El Estado de México es el primer productor nacional de ovinos de carne, en la entidad la ovinocultura de tipo familiar se encuentra ampliamente distribuida, con diferencias marcadas en nivel de tecnificación y productividad (^{Orona et al., 2015}; ^{Garza-Camargo et al., 2025}). La mastitis ovina afecta la producción y calidad de la leche que repercute en un bajo desarrollo de las crías y en un menor número de corderos destetados (^{Contreras et al., 2007}; ^{Gelasakis et al., 2015}; ^{Bramis et al., 2016}). La inflamación de la glándula mamaria usualmente es causada por una infección bacteriana que provoca cambios patológicos del tejido mamario y alteraciones fisicoquímicas de la leche (^{Leitner et al., 2004}; ^{Pisanu et al., 2015}). La importancia clínica de la mastitis en la población se ha evidenciado en los rastros ovinos, donde el 10% de los animales faenados presentaban lesiones en glándula mamaria (^{Cooper et al., 2016}). Además de producir pérdidas económicas directas por la disminución en la producción de leche, aumento de costo de tratamiento por animal, muertes y reemplazo prematuro de ovejas (^{Page et al., 2021}). La ocurrencia de la mastitis se incrementa durante la lactancia; a su vez el hacinamiento en los corrales de las ovejas en lactación favorece la diseminación de la enfermedad en el rebaño (^{Suarez et al., 2002}). En un estudio realizado por ^{Gonzalo et al. (2002}), establecieron que la susceptibilidad de las ovejas a la mastitis aumenta al inicio del periodo de partos y durante la lactancia. Los estafilococos coagulasa positivos y negativos tienden a ser patógenos predominantes en la población de ovejas; las bacterias Gram negativas, principalmente enterobacterias, también son capaces de producir mastitis en las ovejas, en menor frecuencia a la observada en bovinos (^{Pisanu et al., 2015}). Por otra parte, se ha establecido que la infección por lentivirus en la población ovina aumenta la susceptibilidad de la glándula mamaria a la mastitis (^{Junkuszew et al., 2016}). A su vez los casos de ectima contagioso en la población ovina, incrementa la ocurrencia de mastitis por S. aureus (^{Government of Western Australia, 2018}). Estudios realizados por ^{Menzies & Ramanoon (2001}), sugieren que la colonización orofaríngea por Mannheimia haemolytica en los corderos, aumenta el nivel de infección en la glándula mamaria y consecuentemente la presentación de mastitis ocasionada por el agente.

La mastitis se puede presentar de forma clínica o subclínica, la primera se caracteriza por la presencia de signos inflamatorios en la ubre o cambios visibles en la leche; la segunda no presenta signos clínicos aparentes, sin embargo, se producen cambios funcionales importantes de la glándula mamaria que pueden llegar a alterar los parámetros normales de la leche y provocan el aumento de las células somáticas en la misma, para su diagnóstico se requiere realizar estudios que permitan determinar el aumento del número de células somáticas en la leche de forma directa o indirecta (^{Peixoto et al., 2010}).

El diagnóstico de la mastitis clínica o subclínica en las poblaciones ovinas es necesario para desarrollar e implementar estratégias de prevención y control de la enfermedad durante la lactancia y al secado (^{Arsenault et al., 2008}; ^{Le Maréchal et al., 2013}). La prueba de mastitis California (MTC), muestra alta sensibilidad y especificidad en la detección de los casos de mastitis subclínica en el diagnóstico de campo, al realizar el monitoreo estratégico de las ovejas durante la lactancia y el secado (^{González-Rodríguez et al.,1995}). La prueba de mastitis California puede ser utilizada en los programas de prevención y control de la mastitis ovina en los rebaños (^{Legarra & Ugarte, 2005}; ^{Rupp et al., 2019}; ^{Alba et al., 2019}). El objetivo del estudio fue determinar la frecuencia de patógenos relacionados con la mastitis subclínica y clínica en ovejas lactantes de carne en rebaños de tipo familiar la región central de México.

MATERIAL Y MÉTODOS

Se realizó un estudio longitudinal de corte seccional en rebaños ovinos de carne en la región central de México, en el altiplano mexicano durante el periodo 2018-2019 de noviembre a abril en la temporada de nacimiento de los corderos. Mediante un muestreo por conveniencia realizado en unidades de producción ovina de tipo familiar (UPTF), previa aceptación de los productores participantes. Se estudiaron 38 rebaños en 4 regiones geográficas del Estado de México consideradas como: norte, centro, este y oeste (Figura 1). Las unidades de producción ovina de carne de tipo familiar de la región norte se localizaron en los municipios de: Jilotepec, Temascalcingo, Acambay, Atlacomulco en la región centro en Toluca, Tenango del valle, Xalatlaco; en la región este en Jocotitlán, San Bartolo Morelos, Ixtlahuaca, Chapa de Mota, Villa del Carbón, Jiquipilco y finalmente en la región oeste en los municipios de El Oro, San Felipe del Progreso, San José del Rincón (Figura 1). Los criterios de inclusión del estudio fueron: UPTF en pequeñas extensiones agrícolas, con instalaciones rústicas; un tamaño de rebaño de carne entre 15 y 50 ovinos, con un manejo productivo tradicional con pastoreo parcial diurno y encierro nocturno.

Figura 1 Distribución de Municipios del estado de México muestreados 

Las muestras de leche se obtuvieron de las ovejas por ordeño manual de cada uno de los medios glandulares, previa limpieza y desinfección de los pezones con alcohol etílico al 70% v/v; se desecharon los primeros chorros de leche, y se depositó en tubos estériles en un volumen aproximado de 10 mL. Las muestras se conservaron a 4ºC hasta su análisis microbiológico durante las primeras 4 h. Las muestras de leche se incubaron a 25 ºC en baño María y se homogenizaron para inocular 0.01 mL., de leche sobre las placas de gelosa sangre, agar MacConkey y manitol sal agar. Las placas se incubaron a 37°C durante 18 a 24 horas. Las placas de agar se consideraron positivas al observar de 3 a 5 unidades formadoras de colonia (UFC). Se describieron e identificaron las UFC mediante procedimientos microbiológicos (National Mastitis Council, 2005). Se realizó la tinción de Gram; las pruebas de catalasa, coagulasa en tubo; reacción de Voges Proskauer, fermentación anaerobia de manitol, fermentación aerobia de trealosa y arabinosa. En su caso las reacciones de CAMP, esculina, caldo sangre y la utilización de carbohidratos. Las pruebas de la oxidasa, hidrólisis de la urea en tubo, hierro triple azúcar, motilidad, sulfuro e indol. La confirmación final de los aislamientos de S. aureus y M. haemolytica se realizó mediante los sistemas Api-Staph y Api-20 E (bioMeriaux, France) y el sistema API WEB.

La prueba de mastitis California se realizó en laboratorio, a partir de la muestra individual de leche empleadas para el estudio microbiológico. En la paleta de prueba se agregaron 2 mL de leche y un volumen similar del reactivo de California. Las reacciones de la prueba se interpretaron por la formación del gel en la suspensión de leche considerándose negativas (N) aquellas donde no se observa formación de gel y los grados trazas (T), uno (1), dos (2) y tres (3) en los cuales se observa formación de gel con diferente estructura y consistencia (^{Blowey & Edmondson, 1999}).

Los resultados se analizaron a partir de los cuadros y gráficas, a través de estadística descriptiva a partir de las frecuencias observadas de aislamientos bacterianos, su distribución y asociación de las frecuencias observadas se evaluaron mediante la prueba de Ji-cuadrada (p< 0.05), con el uso del programa Epi Info 6, versión libre, CDS Atlanta, Ge. USA, 2010.

RESULTADOS

En la región central de México, se estudiaron 38 rebaños ovinos de carne con un tamaño de rebaño de 22.6 ±7.2, bajo el sistema de producción ovina de tipo familiar localizados en 16 municipios, del estado de México. De 822 ovejas examinadas de las regiones geográficas denominadas como norte, centro, este y oeste, se obtuvo una frecuencia promedio de aislamiento del 21.9 % (Cuadro 1).

La frecuencia promedio de mastitis subclínica en las cuatro regiones estudiadas fue del 19.89%, en tanto el promedio de mastitis clínica fue del 2.79% (cuadro 2).

La frecuencia general de aislamientos microbianos (cuadro 3), fue del 21.9% (196/822), donde destaca S. aureus como el principal agente, seguido de los SCN y las bacterias coliformes y M. haemolytica. La proporción de aislamientos de los medios glandulares de las ovejas estudiadas en las diferentes regiones geográficas fue la siguiente: La mayor proporción de aislamientos fue del 25.0 al 42.18% observada en los municipios de Atlacomulco, San José del Rincón, El Oro, Villa del Carbón y Xalatlaco (p<0.001). Una proporción media de aislamientos entre el 21.23 al 23.46%, se observó en los municipios de Chapa de Mota, Jocotitlán, y San Felipe del Progreso. La menor proporción de aislamientos microbianos del 10.29 al 13.20%, se observó en las ovejas de los municipios de Toluca, San Bartolo Morelos, Ixtlahuaca y Acambay.

La distribución de las reacciones de la prueba de California en leche de las ovejas de los rebaños estudiados y los aislamientos obtenido en ellos (Cuadro 4), en los grados de trazas y 1 se identificaron Staphylococcus coagulasa negativos (SCN), bacterias coliformes y no coliformes y Bacillus spp (p<0.05). En comparación con los grados 2 y 3 en donde se obtuvo un mayor número de agentes: S. aureus y SCN (S. epidermidis y S. haemolyticum), Streptococcus agalactiae, Streptococcus no agalactiae, Bacillus sp., Pasteurella sp., M. haemolytica y Pseudomonas spp. En los casos de mastitis clínica se identificaron S. aureus, SCN, T. pyogenes y M. haemolytica.

DISCUSIÓN

Se identificaron los patógenos asociados en la presentación de la mastitis subclínica y clínica en rebaños ovinos de carne de producción familiar. Se destaca la elevada frecuencia de aislamientos de S. aureus y Staphyloccoccus coagulasa negativos (SCN), relacionados con grados altos a la prueba de mastitis California. La mastitis subclínica mostró una amplía distribución en los rebaños estudiados. En el sistema de producción ovina familiar se determinó una frecuencia del 19.89% de mastitis subclínica y 2.79% de mastitis clínica. Los resultados obtenidos en la región central de México coinciden con los descritos por ^{Drescher et al., (2010}), se reportó en ovinos una incidencia anual de mastitis subclínica del 5 y 30%, y mastitis clínica menor al 5%.

Estos datos son concordantes con los resultados obtenidos por ^{Contreras et al., (2007)}, quienes informaron en su estudio con pequeños rumiantes una prevalencia de mastitis subclínica del 5 a 30%, y una proporción menor del 5% de mastitis clínica. Por su parte ^{Peckler et al., (2024}), determinaron que al avanzar la lactancia de las ovejas y la proximidad del destete de los corderos, la prevalencia de mastitis subclínica aumentó del 26.0 al 47.1 %.

En rebaños ovinos lecheros la proporción de mastitis clínica se ha determinado menor al 5%, sin embargo, se pueden producir brotes epidémicos de mastitis clínica que afectan hasta el 30 y 50% de los animales en producción lo que incrementa la tasa de desecho de ovejas productivas (^{Bergonier & Berthelot, 2003}). En la mastitis crónica la infección por agentes de la familia Micrococacea y Streptococacea con aislamientos de cepas resistentes a los antimicrobianos tiende a ser relevante (^{Mavrogianni et al., 2011}).

Al ocurrir la mastitis subclínica durante la lactancia en las ovejas, se producen alteraciones físico-químicas y celulares en la leche que afectan su calidad (^{Ariznabarreta et al., 2002a}). Al disminuir la producción de leche y su calidad debido a la mastitis, el crecimiento y el peso de los corderos se afecta considerablemente (^{Huntley et al., 2012}). El efecto negativo de la mastitis ovina y caprina sobre la producción y la calidad de la leche, es mayor que el observado en las vacas lecheras (^{Blowey & Edmondson, 1999}), caracterizado en las ovejas por una importante reducción en la producción de leche debida a la mastitis subclínica (^{Leitner et al., 2004}; ^{Nunes et al., 2008}). Lo anterior denota la importancia del diseño e implementación de nuevas estrategias de prevención de la enfermedad en los rebaños (^{McLaren et al., 2018}). En nuestro estudio se destaca la importancia de la mastitis en las ovejas de carne en lactación, con los posibles efectos negativos en la producción de leche y en el desarrollo de los corderos (^{Grant et al., 2016}), otros estudios demostraron que la mastitis provocada experimentalmente con Staphylococcus simulans en ovejas, afecta el desarrollo de los corderos criados por las ovejas infectadas experimentalmente los cuales tuvieron tasas de crecimiento al destete significativamente menores que el grupo de los corderos testigos criados por ovejas sanas (^{Arsenault et al., 2008}; ^{Rupp et al., 2009}).

El estudio demostró la utilidad de la prueba MTC en la detección de la mastitis subclínica al detectar una frecuencia del 10 al 35.8% en los rebaños ovinos de carne. Los resultados de la MTC obtenidos indicaron que la reacción grado 1 mostró una proporción del 5.55%, cuya reacción puede superar el número normal de células somáticas en la leche de la oveja (^{Suarez et al., 2002}; ^{Bergonier & Berthelot, 2003}). A su vez los grados 2 y 3 de la MTC se obtuvo la mayor frecuencia de aislamiento microbiano 42.86%, lo cual puede indicar una asociación causal de los agentes con la mastitis subclínica en las ovejas estudiadas (^{Ariznabarreta et al., 2002a}). En el estudio realizado por ^{Zafalon et al., (2016}), al determinar el límite de confianza para la detección de la mastitis subclínica comparó el número de células somáticas y la prueba MTC, la reacción 1 (>400 x10³/células somáticas) indicó una adecuada sensibilidad y especificidad al monitorear diferentes periodos de lactancia de las ovejas.

En el estudio en los rebaños ovinos en las regiones del estado de México destaca que al incrementarse las reacciones en la prueba de MTC, también aumentó la frecuencia de aislamiento microbiano en la leche. Este hallazgo puede estar relacionado con la infección e inflamación crónica de la glándula mamaria lo que podría contribuir en la severidad de la mastitis, la baja producción de leche y el deterioro en su calidad, lo cual repercute en la crianza de los corderos (^{Grant et al., 2016}; ^{Abdalhamed et al., 2018}). Los grados superiores a 1 en la prueba de MTC durante la lactancia de las ovejas suele relacionarse indirectamente con una inflamación crónica y el desarrollo progresivo de lesiones fibrosas del parénquima glandular (^{Menzies & Ramanoon, 2001}; ^{McLaren et al., 2018}). En coincidencia con el estudio realizado por ^{Suarez et al., (2002}), en un grupo de ovejas lecheras de la raza Pampinta, se estableció una relación del 65% entre el conteo de células somáticas y la reacción de la prueba de California. Cuando el conteo celular fue 225x10³ células /mL de leche no se encontró infección glandular, sin embargo, cuando el conteo celular ascendió a 1004 x 10³ células /mL se encontró asociado con la presencia de SCN, Micrococcus y Corynebacterium spp y cuando aumentó a 2045 x 10³ células /mL se identificaron S. aureus y E. coli.

En las técnicas de diagnóstico de mastitis, el conteo de células somáticas es un indicador de la salud de la glándula mamaria en los rumiantes (^{Ariznabarreta et al., 2002}b; ^{Peixoto et al., 2010}). A su vez la MTC determina indirectamente el nivel de células somáticas en la leche lo cual permite el uso de la prueba de MTC aplicable en condiciones de campo (^{González-Rodríguez,1995}).

En los rebaños ovinos de carne de producción familiar, la frecuencia general de aislamiento microbiano de los medios glandulares en los rebaños fue elevada, con predominio del S. aureus lo que coincide con otros estudios, lo que indica la importancia del patógeno (^{Alba et al., 2019}), los aislamientos de Staphylococcus coagulasa negativos (SCN) siguieron en orden de importancia identificándose en este grupo a S. epidermidis,

S. simulans y S. intemedius, mismos que han sido identificados en rebaños ovinos de otras latitudes (^{Gelasakis et al., 2015}), los cuales también se distribuyeron en menor proporción en los diferentes grados de reacción en las pruebas MTC (^{Menzies & Ramanoon, 2001}).

Los casos de mastitis clínica en nuestro estudio se relacionaron con aislamientos de S. aureus, SCN, M. haemolytica y Truperella pyogenes. El estudio determinó la importancia de S. aureus en la presentación de la mastitis subclínica y clínica en las ovejas de carne en la región central de México en los rebaños de producción familiar. Lo que confirma la importancia de S. aureus como causante de mastitis de los pequeños rumiantes (^{Ünal et al., 2012}; ^{Smith et al., 2015}; ^{Vasileiou et al., 2019}), lo que puede llevar a la disminución progresiva de la producción de leche en la infección crónica (^{Benchaoui, 2010}). Además de establecerse el riesgo en la ocurrencia de mastitis gangrenosa en el rebaño ovino por S. aureus durante la lactancia lo que concuerda con lo observado en diversos estudios (^{Ariznabarreta et al., 2002}a; ^{Vautor et al., 2009}; ^{Le Maréchal et al., 2013}). A su vez la persistencia de la infección intraglandular por S. aureus, incrementa el desecho de animales crónicamente afectados (^{Mavrogianni et al., 2011}).

La relevancia S. aureus y SCN en rebaños ovinos de carne, se ha confirmado también en Canadá, en donde obtuvo una prevalencia del 28.8% en mastitis subclínica a estos agentes (^{Arsenault et al., 2008}). En otro estudio realizado en Grecia por ^{Vasileiou et al. (2018}) reportaron como los principales agentes etiológicos en casos de mastitis subclínica a los estafilococos (S. aureus y SCN). Estos agentes causales también han sido reportados en rebaños de ovejas de Egipto, identificados como responsables del 31.1% y 19.1% de los casos de mastitis subclínica (^{Abdalhamed et al., 2018}). ^{Mørk, et al. (2007}) en Noruega se ha reportado a S. aureus como el patógeno prevalente en el país en los casos de mastitis clínica en ovejas de carne y lana.

Los SCN aislados en el estudio correspondieron a: S. epidermidis, S. simulans, S. intemedius, S. haemolyticus, Microccocus spp. y otros SCN en menor frecuencia que S. aureus. Los resultados difieren con otros autores quienes señalan a los SCN como los principales agentes causantes de la mastitis ovina, lo que denota la variación estacional en la frecuencia de infección en los ovinos (^{Narenji Sani et al., 2015}); observándose una amplia variedad de especies de SCN al ocurrir la infección intraglandular mamaria de las ovejas (^{Vasileiou et al., 2019}), la presencia de SCN en las ovejas muestra diferencias en su patogenicidad, identificándose en leche a partir de conteos de células somáticas < de 200 x10³ células / mL (^{Menzies & Ramanoon, 2001}). En ovejas Assaf de Israel se observó un incremento en el nivel de células somáticas > 1500 x10³ células / mL asociado a la infección por SCN lo que indica una mayor susceptibilidad a la infección en las ovejas lecheras, lo que marca diferencias importantes con la infección en vacas lecheras (^{Leitner et al., 2001}). Es posible determinar infecciones simultaneas por SCN y S. aureus lo que provocan lesiones severas en la glándula mamaria (^{Petridis & Fthenakis, 2014}).

n el estudio la presencia de la mastitis ovina, se determinó una baja frecuencia de infección glandular por Str. agalactiae y no agalactiae. La presencia de estos agentes en el rebaño ovino puede ser explicada a partir de las fuentes de infección como un ambiente de producción contaminado y un deficiente manejo higiénico sanitario del rebaño. Así también las ovejas infectadas pueden contribuir a la diseminación de la mastitis durante la lactación. Además, la presencia en la empresa ovina de otras especies animales portadoras de agentes como Str. agalactiae, Str. uberis, Srt. suis y Str. equi subsp. zooepidemicus (S. zooepidemicus) que pueden contaminar el ambiente (^{Marguet et al., 2000}).

Otros patógenos identificados en el estudio fueron: E. coli y otras bacterias coliformes; las cuales fueron observadas en una baja proporción en los casos de mastitis subclínica, este hallazgo puede representar un riesgo en los casos de mastitis aguda durante el periodo perinatal y al finalizar la lactancia (^{Berriatua et al., 2001}), el aumento de casos de mastitis subclínica y clínica ocasionados por bacterias coliformes y no coliformes en los rebaños ovinos se puede deber a las instalaciones con áreas húmedas e insalubres, material de cama contaminado con excretas y la presencia de vapores originados de desechos orgánicos en descomposición en los cobertizos de encierro del ganado ovino (^{Bergonier et al., 2003}; ^{Mørk et al., 2005}; ^{Plummer & Plummer, 2012}).

En el presente estudio se reporta una baja proporción de aislamientos de M. haemolytica que fueron identificados en infecciones subclínicas y clínicas en las ovejas de carne. Se ha establecido que M. haemolytica puede estar en la piel del pezón inmediatamente después del parto, debido a la presencia de corderos enfermos de neumonía y el ambiente de producción contaminado por las secreciones de animales afectados, lo cual puede aumentar el riesgo de mastitis por M. haemolytica en el rebaño puede sugerir la transmisión horizontal entre la población ovina con los diferentes genotipos M. hemolytica particularmente en condiciones climáticas adversas (^{Omaleki et al., 2016}).

Los casos de mastitis clínica del estudio en los rebaños de ovejas de carne de producción familiar se identificaron asociados a los patógenos mayores como S. aureus, M. haemolytica y T. pyogenes causantes de la infección oportunista lo que coincide con lo descrito en otros estudios (^{Omaleki et al., 2011}; ^{Rogovskyy et al., 2018}).

CONCLUSIONES

La mastitis subclínica en los rebaños ovinos de producción de carne de tipo familiar mostró una alta frecuencia y amplia distribución. Staphylococcus. aureus y Staphylococcus coagulasa negativos (SCN), Streptococcus no agalactiae y Mannheimia haemolytica fueron los aislamientos más frecuentes en los rebaños ovinos de carne de la región central del Estado de México. Los casos de mastitis clínica en este estudio se relacionaron con aislamientos de Staphylococcus aureus, SCN, M. haemolytica y Truperella pyogenes y Streptococcus agalactiae. La alta frecuencia de mastitis subclínica observada en los rebaños ovinos durante la lactancia hace necesario implementar programas de prevención y control de la mastitis para disminuir el impacto económico negativo sobre la producción de leche y cría de corderos.