ROSAS-QUIJANO, Raymundo    GAILLARDIN, Claude. El sistema Cre/loxP1 como una herramienta genética en Yarrowia lipolytica. []. , 33, pp.17-27. ISSN 0187-3180.

^len^aThe non-conventional yeast Yarrowia lipolytica has been broadly studied, its whole genome sequence is known and public, and there are many molecular tools for study itself. However, their genetic markers are limited. Therefore, we need to recycle these markers. Taking advantage of Y. lipolytica has the ability for express different sources of recombinant protein, we constructed one replicating plasmid for Cre1 recombinase from one replicative plasmid under the direction of a strong promoter. The recombinase activity was evaluated in mutants obtained by transposition. The mTnYl1plasmid includes two Lox at ends who are target sequences of phage P1 recombinase. Our results indicated high efficiency and specificity of the recombinase activity. Based on this strategy we replaced the URA3 selective marker gene contained in mTnYl1 and then we sequenced the segments generated after recombinase activity to corroborate its proper action. This strategy is simple as well as a powerful molecular biology tool for Y. lipolytica study under selection and use of one single marker.^les^aLa levadura no convencional Yarrowia lipolytica ha sido estudiada ampliamente, su genoma está totalmente secuenciado y existen numerosas herramientas moleculares para su estudio; sin embargo, los marcadores genéticos son limitados. Por tanto, surge la necesidad de reciclar dichos marcadores. Dada la ventaja de que Y. lipolytica expresa diferentes fuentes de proteína recombinante se construyó un plásmido de expresión para la recombinasa Cre1 a partir de un plásmido replicativo bajo la dirección de un promotor fuerte. La actividad de la recombinasa se evaluó en mutantes obtenidas por transposición. El plásmido mTnYl1 contiene en sus extremos dos secuencias Lox que son blanco de la recombinasa del fago P1. Los resultados indicaron una alta eficiencia de actividad y especificidad de la recombinasa. Bajo esta estrategia, se hizo el recambio del gen marcador de selección URA3 contenido en mTnYl1 y se secuenció el segmento generado después de la acción de la recombinasa para corroborar su adecuada acción. Esta estrategia es simple pero es una poderosa herramienta de biología molecular para realizar manipulaciones múltiples en ingeniería genética para el estudio de Y. lipolytica bajo la selección y utilización de un solo gen marcador.

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