Comparative anatomy of the petiole in Solanum species section Geminata

Carmen Benítez y María Ferrarotto

Instituto de Botánica Agrícola. Facultad de Agronomía. Universidad Central de Venezuela. Maracay. Edo. Aragua. Venezuela. Aptdo. Postal 4579. Correos electrónicos: cbenitez22@gmail.com; ferrarottom@agr.ucv.ve

Recibido: 4 agosto 2011. ]]> Aceptado: 9 febrero 2012.

Resumen

La sección Geminata del género Solanum, comprende 126 especies de las cuales 35 están representadas en Venezuela. Éstas son muy homogéneas en lo que respecta a su morfología externa y en general a su hábito de crecimiento y ramificación simpodial. En la búsqueda de otros caracteres que apoyen su identificación y/o separación, se estudió la anatomía del pecíolo considerando caracteres micromorfoanatómicos que podrían conformar un criterio taxonómico de delimitación a nivel específico. Para esta primera entrega, se seleccionaron 18 especies utilizando material fresco y herborizado de MER, MY y VEN. Las secciones transversales de pecíolos de hojas adultas, fueron obtenidas a mano alzada, teñidas y montadas en láminas semipermanentes para su observación en un microscopio compuesto. Se determinó la dimensión del eje transversal y longitudinal de las secciones, tipo y densidad de tricomas, tipo y densidad de estomas, número de capas epidérmicas y forma de sus células, forma y dimensiones del haz vascular, longitud de las alas. Los caracteres micromorfológicos más contrastantes en los pecíolos de las especies estudiadas fueron los cuantitativos referidos al número de tricomas con altas densidades para S. chlamydogynum, S. microleprodes y S. oblongifolium con 36 tricomas.mm ² y a la longitud de las alas de hasta 1700 μm en S. obovalifolium. El resto de los caracteres cuantitativos estudiados y todos los cualitativos no resultaron significativos para relacionar estas especies. Adicionalmente, la presencia de colénquima sólo en el pecíolo de S. nudum y S. obovalifolium así como arenillas cristalíferas sólo en seis especies permitiría diferenciarlas del resto de las consideradas.

Palabras clave: micromorfología, anatomía, pecíolo, Solanum sección Geminata.

Abstract

The Geminata Section of the genus Solanum is integrated by 126 species, from which 35 are represented in Venezuela. These are very homogeneous regarding its morphology andgeneral growth habit with simpodial branching. In the searching of other features that allow their identification and/or separation, a study of petiole anatomy considering micromorphoanatomics characters that can conform a taxonomic criterion for delimitation at specific level. For this first article, 18 species were considered using fresh and herborized material from MER, MY and VEN. Petiole transverse sections from adult leaves were hand made, stained and mounted in semipermanent slides for observationunder a compound microscope. The dimension of transversal and longitudinal axis of sections, the trichome type and density, stomata type and density, number of epidermal layers and cell shape, bundle sheath form, dimensions and wings length were registered. The most contrasting petioles micromorphological features between the studied species were the quantitative referred to trichomes number with high densities for S. chlamydogynum, S. microleprodes and S. oblongifolium with 36 trichomes.mm^-2 and petiole wing length to 1700 μm in S. obovalifolium. The rest quantitative characters studied and all the qualitative features have a lack of significanceto relate these species. In addition, the presence of collenchyma only in S. nudum and S. obovalifolium petiole, as well as abundant sandy crystals only six species would differentiate them from the rest of those considered.

Key words: micromorphology, anatomy, petiole, Solanum section Geminata.

La sección Geminata pertenece al género Solanum, comprende 126 especies que han sido separadas en 16 grupos (Knapp, 2002), de los cuales 12 grupos están representados en Venezuela con 35 especies. Esta sección se encuentra principalmente distribuida en el Neotrópico y en Venezuela es componente de bosques tropófilos macrotérmicos hasta páramos, entre 100-3 500 m. Dicha sección incluye árboles pequeños o arbustos de 1.5-4 m de alto, glabros o pubescentes, con unidades simpodiales unifoliadas o bien difoliado-geminadas o fasciculadas con las inflorescencias opuestas a las hojas o en algunos casos alternas a éstas.

Para una misma especie de esta sección, las hojas pueden ser glabras o pubescentes en ambas caras o sólo en una de ellas, con la pubescencia distribuida en toda la lámina o bien a lo largo de las venas o en las axilas de éstas. Los tricomas pueden ser protectores o glandulares; entre los primeros se presentan simples uniseriados o ramificado-dendríticos y los segundos con cabeza bicelular o unicelular. Las inflorescencias son opuestas a las hojas. Las flores son pequeñas, la corola rotácea y de color blanco. Los frutos son firmes y verdes cuando maduros. Las semillas reniforme-ovoideas. En Venezuela las especies están principalmente distribuidas en la Cordillera de la Costa y en la Cordillera de Mérida, creciendo en selvas nubladas o en bosques muy húmedos, a elevaciones entre 750-2 900 m.

Estudios anatómicos en Solanum se han realizado a nivel de epidermis foliar y tallos, sin embargo, consideraciones de las características micromorfológicas a nivel del pecíolo no han sido abordadas. El pecíolo, es parte importante de estudios tendentes a la clasificación tipológica de las hojas, basada en la forma, estructura y proporción de cada una de sus partes: base foliar, pecíolo y lámina que varían ampliamente. Así mismo, los estudios anatómicos de los nudos, generalmente incluyen al pecíolo, tal como lo indican Bhatt y Singh (1979) para la identificación de algunas especies de Solanum.

Debido a que los miembros de la sección Geminata, conforman un grupo de plantas muy homogéneas, lo cual dificulta su identificación en campo, Benítez & Ferrarotto (2009) iniciaron el estudio micromorfológico de los miembros de esta sección para Venezuela, en la búsqueda de caracteres adicionales que apoyen la identificación y/o separación de especies de Solanum. En este estudio se realizó la micromorfología y anatomía del pecíolo de las especies pertenecientes a la sección Geminata para Venezuela (Benítez & Ferrarotto, 2009): Solanum aphyodendron, Solanum aphyodendron S. Knapp, Solanum chlamydogynum Bitter, Solanum cornifolium Dunal, Solanum dissimile C.V. Morton, Solanum falconense S. Knapp, Solanum gratum Bitter, Solanum leucocarpon Dunal, Solanum lucens S. Knapp, Solanum microleprodes Bitter, Solanum nudum Dunal, Solanum oblongifolium Dunal, Solanum obovalifolium Pittier ex Benítez, Solanum oppositifolium Ruiz & Pavón, Solanum ripense Dunal, Solanum tanysepalum S. Knapp, Solanum tepuiense S. Knapp, Solanum turgidum S. Knapp, Solanum validinervium Benítez et Knapp.

MATERIAL Y MÉTODOS

Para el estudio de los pecíolos, en la presente investigación fue necesario realizar una selección de material fresco y herborizado que dependió de la presencia de la especie al momento de la colecta en campo. De las 18 especies estudiadas, sólo se dispuso de material fresco para nueve, el resto del material se obtuvo a partir de muestras de colecciones depositadas en los herbarios MER, MY y VEN, según como se especifica en la tabla 1. El muestreo consistió en la selección de la porción media de pecíolos de hojas adultas tanto en material fresco, como de herbario. El número de muestras obtenidas fue de cinco secciones de pecíolo para cada especie, variando el número de especímenes utilizados para cada especie, siendo sólo de un espécimen en el caso de S. microleprodes y S. tepuiense debido a su distribución restringida. En contraste, para S. nudum, se dispuso de cuatro ejemplares basado en la diversidad morfológica de esta especie.

Las secciones transversales del pecíolo tanto del material fresco como herborizado se realizaron a mano alzada en su porción media, con navaja de afeitar y ayuda de cubos de anime como soporte, después se tiñeron con azul de toluidina acuosa al 0.05%. Los montajes se hicieron sobre portaobjetos, cubriendo con una solución de glicerina+agua destilada (v/v) y un cubreobjeto. Las láminas se sellaron con esmalte transparente para evitar la deshidratación del material. Para la observación con microscopía óptica se utilizó un microscopio Leica DMLS con una cámara fotográfica incorporada Leica MPS 30. Las secciones de pecíolo se obtuvieron en su punto medio, equidistante del eje y la lámina, debido a que se ha señalado que dependiendo de la posición topológica, el pecíolo puede presentar variaciones en el patrón vascular, variando desde ramificados hasta los anastomosados (Maksymowych et al., 1983).

Los caracteres micromorfológicos estudiados fueron cualitativos y cuantitativos. Los primeros se basaron en la observación al microscopio óptico y su respectiva descripción. Para los cuantitativos, se utilizó un lente micrometrado adaptado al microscopio. En todos los casos las observaciones se realizaron en tres campos distintos de cada muestra, a una magnificación de 400x y 100x respectivamente. Las variables cualitativas fueron: tipo de tricomas y estomas, forma externa del pecíolo (considerando las dimensiones eje transversal por eje longitudinal), prominencia de las alas del pecíolo, forma de las células de la epidermis y aspecto de las paredes celulares, presencia o no de colénquima, presencia o no de arenillas cristalíferas o granos de almidón en las células del parénquima esponjoso ubicado hacia la región del envés del pecíolo. Respecto al haz conductor central del pecíolo, se consideró su forma y el arreglo relativo de xilema y floema.

Las variables cuantitativas estudiadas fueron: dimensiones del pecíolo (largo x ancho), largo de las alas del pecíolo, número de capas de parénquima clorofiliano, número de capas de colénquima, número de estomas y tricomas por mm² y dimensiones del haz conductor. La densidad de tricomas (DT) y estomas (DE) se determinó aplicando las relaciones: DT = núm. de tricomas por unidad de área foliar/0.19635 mm² y DE = estomas/estomas + células epidérmicas x 100, respectivamente. El área utilizada en mm² correspondió al campo de observación del microscopio utilizado.

Se realizó un análisis de varianza y prueba de comparaciones múltiples de Tukey para un α = 5%. Se determinó la correlación entre variables estudiadas todo ello utilizando el programa Statistix, versión 8.0.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Las características anatómicas del pecíolo para cada especie, se describen a continuación:

Solanum aphyodendron

Pecíolo con alas poco prominentes, exhibiendo un hacesillo vascular poco desarrollado en cada extremo distal. La epidermis es uniestratificada, con células poligonales alargadas, con paredes celulares relativamente engrosadas, con tricomas glandulares (Fig. 1a). Por debajo de la epidermis se observan dos capas de células parenquimáticas, con abundantes cloroplastos, seguidamente se observa el tejido colenquimàtico angular de 5-6 capas de células, continuando con 7-8 capas de parénquima esponjoso, muchas de ellas se observan llenas de arenillas cristalíferas y granos de almidón, las cuales oscurecen las células, en mayor proporción en el envés y alrededor del tejido vascular. El haz vascular presenta arreglo bicolateral, reniforme (Fig. 4a).

Solanum chlamydogynum

Pecíolo con alas prominentes, las cuales presentan un hacesillo vascular poco desarrollado en cada extremo. La epidermis es uniestratificada con células poligonales alargadas, con abundantes tricomas ramificados (Fig. 1b), estando éstos presentes sólo hacia la región del envés del pecíolo.

Por debajo de la epidermis se observaron dos capas de células parenquimáticas con abundantes cristales, seguido de 6-7 capas de tejido colenquimático angular, con más de nueve capas de células globosas. El haz vascular presenta arreglo bicolateral, en herradura (Fig. 4b), rodeado por células esclerenquimáticas aisladas y en paquetes de 3-4 células en cada uno.

Solanum cornifolium

Solanum dissimile

Pecíolo con alas prominentes, observándose en cada extremo un hacesillo vascular poco desarrollado en cada extremo distal. La epidermis uniestratificada muestra células poligonales redondeadas, con paredes celulares relativamente delgadas. Se observaron bases de tricomas glandulares en grupos (Fig. 1c) y abundantes tricomas glandulares con base unicelular. Por debajo de la epidermis se presentan dos capas de células parenquimáticas, seguidas por 6-7 capas de colénquima angular: en las células del parénquima esponjoso cercanas al haz vascular, se observaron abundantes arenillas cristalíferas y granos de almidón. El haz vascular presenta arreglo bicolateral, reniforme (Fig. 4a), observándose rodeado por células esclerenquimáticas y arenillas cristalíferas que restan la transparencia de las células globosas, en mayor proporción hacia el envés.

Solanum falconense

Pecíolo con alas rudimentarias y un hacesillo vascular incipientes en el extremo de cada una de ellas. Presenta epidermis uniestratificada con células poligonales alargadas de paredes celulares delgadas con tricomas tectores (Fig. 1d). Por debajo de esta epidermis se observan 6-7 capas de colénquima angular, seguido de 7-8 capas de parénquima esponjoso con presencia de cristales y granos de almidón. El haz vascular presenta arreglo bicolateral, reniforme (Fig. 4a).

Solanum gratum

Pecíolo con alas prominentes que presentan un hacesillo vascular incipiente en cada extremo distal. La epidermis es uniestratificada con células poligonales redondeadas, de paredes celulares moderadamente delgadas. Por debajo de esta epidermis, encontramos 1-2 capas de células parenquimáticas, seguido por 4-5 capas de colénquima angular y luego 7-8 capas de parénquima esponjoso, de pared celular moderadamente gruesa. El haz vascular presenta arreglo bicolateral, en herradura (Fig. 4b), rodeado por células esclerenquimáticas dispuestas en forma aislada y agrupadas en paquetes de 2-4 células cada uno.

Solanum leucocarpon

Pecíolo con alas incipientes que presentan un hacesillo vascular incipiente en cada extremo distal. Epidermis uniestratificada de células poligonales alargadas con abundantes tricomas glandulares cortos (Fig.1e). Debajo de la epidermis se observan seis capas de colénquima angular, seguido por 8-9 capas de células de parénquima esponjoso, de pared celular ligeramente gruesa. El haz vascular presenta arreglo bicolateral, en herradura (Fig. 4b), rodeado por células esclerenquimáticas aisladas y en paquetes de 3-4 células cada uno.

Solanum lucens

Solanum microleprodes

Pecíolo con alas poco prominentes con evidencia de un hacecillo vascular poco desarrollado en cada extremo distal. La epidermis es uniestratificada, con células poligonales redondeadas con alta densidad de tricomas ramificados (Fig. 1f). Por debajo de ésta, 1-2 capas de células parenquimáticas con abundantes cloroplastos, seguida por 4-5 capas de colénquima y 7-8 capas de parénquima de células globosas. El haz vascular presenta arreglo bicolateral, reniforme (Fig. 4a) rodeado por células esclerenquimáticas aisladas y agrupadas en paquetes de 2-3 células cada uno.

Solanum nudum

Pecíolo con alas poco prominentes con un hacesillo vascular en desarrollo en cada extremo distal. La epidermis es uniestratificada con células poligonales rectangulares de pared celular ligeramente delgada con pocos tricomas protectores simples, y ausencia de tricomas glandulares (Fig. 1g). Por debajo de la epidermis se observan dos capas de parénquima clorofiliano con abundantes cloroplastos, seguido por 5-6 capas de colénquima angular de paredes engrosadas, continuando con 12 capas de células parenquimáticas globosas de paredes medianamente delgadas. El haz vascular presenta arreglo bicolateral, reniforme (Fig. 4a), rodeado por células esclerenquimáticas discontinuas.

Solanum oblongifolium

Pecíolo con alas prominentes, mostrando un hacesillo vascular incipiente en cada extremo distal. Presenta epidermis uniestratificada, con células poligonales alargadas, con pocos tricomas tectores ramificados (Fig. 1h) ubicados solamente en la zona próxima al envés. Por debajo de la epidermis se observaron 6-9 capas de colénquima angular, seguido de 9-10 capas de células de parénquima esponjoso. El haz vascular presenta arreglo bicolateral, de forma aplanada (Fig. 4c), es uno de los que ocupa mayor área dentro del pecíolo en comparación con el resto de las especies estudiadas. No se observaron células esclerenquimáticas, pero sí arenillas cristalíferas y almidones en el parénquima esponjoso, en mayor proporción alrededor del tejido vascular.

Solanum obovalifolium

Pecíolo con alas prominentes y hacesillos vasculares incipientes en cada extremo distal. La epidermis es uniestratificada de células poligonales redondeadas y presenta abundantes tricomas tectores y pocos glandulares (Fig. 1i). Por debajo de la epidermis se observaron 1-2 capas de células parenquimáticas con abundantes cloroplastos, y luego siete capas de colénquima angular y 9-10 capas de células de parénquima esponjoso con paredes celulares ligeramente gruesas. El haz vascular presenta arreglo bicolateral, en herradura (Fig. 4b), rodeado por células esclerenquimáticas agrupadas en paquetes entre 4-5 células cada uno.

Solanum oppositifolium

Solanum ripense

Pecíolo con alas rudimentarias con un hacesillo vascular incipiente en cada extremo distal. La epidermis es uniestratificada, con células poligonales alargadas de paredes celulares moderadamente delgadas con pocos tricomas tectores (Fig. 1k). Por debajo de la epidermis se observan dos capas de parénquima clorofiliano seguido por 6-7 capas de colénquima angular, siguiendo con 7-8 capas de parénquima esponjoso con gran cantidad de granos de almidón y arenillas, que disminuyen la transparencia de las células que los contienen, ubicándose mayormente cerca del haz vascular. Este último presenta arreglo bicolateral, en herradura (Fig. 4b) y rodeado por una vaina de paquetes grandes de esclereidas.

Solanum tanysepalum

Pecíolo con alas rudimentarias con un hacesillo vascular poco desarrollado en cada extremo distal. La epidermis es uniestratificada con células poligonales, con gran cantidad de cristales. Por debajo de la epidermis se observa una capa de células parenquimáticas, seguida por 7-8 capas de colénquima angular, continuando con 10-12 capas de células de parénquima esponjoso de paredes moderadamente delgadas con abundantes cristales. El haz vascular presenta arreglo bicolateral, de forma aplanada (Fig. 4c), bastante extendido y rodeado de células esclerenquimáticas aisladas.

Solanum tepuiense

El pecíolo presenta alas rudimentarias con un hacesillo vascular poco desarrollado en cada extremo distal. La epidermis es uniestratificada con células poligonales con poca densidad de tricomas glandulares (Fig. 1l) Por debajo de ésta se observa una capa de células parenquimáticas, seguida por seis capas de colénquima angular y luego 5-6 capas de parénquima esponjoso de paredes celulares delgadas, con gran contenido de arenillas cristalíferas y cristales. El haz vascular presenta arreglo bicolateral, reniforme (Fig. 4a) se presenta rodeado por células esclerenquimáticas aisladas y en paquetes de aproximadamente 2-4 células cada uno.

Solanum turgidum

El pecíolo presenta alas poco prominentes, presentando un hacesillo vascular incipiente en cada extremo distal. La epidermis es uniestratificada, con células poligonales y abundantes tricomas tectores (Fig. 1m). Debajo de la epidermis se observan 6-7 capas de colénquima, seguido por 10-12 capas de células de parénquima esponjoso, de paredes ligeramente delgadas. El haz vascular presenta arreglo bicolateral, reniforme (Fig. 4a), rodeado de células esclerenquimáticas aisladas y agrupadas en paquetes de 2-4 células cada uno.

Solanum validinervium

Especies dentro de la sección Geminata agrupadas mediante caracteres comunes

Para las 18 especies estudiadas, el resultado del estudio de los caracteres cuantitativos del pecíolo se muestran en la tabla 2. Puede observarse que las especies S. chlamydogynum, S. microleprodes y S. oblongifolium presentaron alta densidad de tricomas ramificados (36 tricomas.mm^-2) (Fig.2), siendo S. oppositifolium la especie con densidad de tricomas ramificados, significativamente menor (4 tricomas.mm^-2).

Respecto a las alas del pecíolo, la presente investigación permitió establecer tres categorías para este carácter, siendo alas rudimentarias, aquellas casi imperceptibles como en S. falconensi, S. ripense, S. tanysepalum y S. tepuiense en cuyo caso el pecíolo es de aspecto redondeado. Alas poco prominentes, aquellas con una longitud hasta 750 μm y alas prominentes las de longitud de 750 μm y hasta 1700 μm, como en el caso de S. dissimile, S. oblongifolium, S. obovalifolium y S. validinervium (Fig. 3). Este carácter podría utilizarse como diagnóstico para separar grupos.

Así mismo, las dimensiones del haz vascular permitieron distribuir las especies en tres grupos distintos, siendo de 88 por 250 μm el de menores dimensiones, donde sólo se ubica S. dissimile. Seguidamente de 200 hasta 625 μm del eje transversal por 625 hasta 1625 μm del eje longitudinal, como en S. aphyodendron, S. cornifolium, S. falconense, S. gratum, S. leucocarpon, S. lucens, S. microleprodes, S. nudum, S. oppositifolium, S. tanysepalum, S. tepuiense y S. validinervium. En el tercer grupo se ubicaron S. chlamydogynum, S. oblongifolium, S. obovalifolium, S. ripense y S. turgidum, con dimensiones del haz vascular en su eje transversal de 750 hasta 1 250 μm y su eje longitudinal 1 375 hasta 2 000 μm.

El grosor de las paredes de las células epidérmicas pareció estar relacionado con su forma, ya que en las alargadas se observaron paredes engrosadas, mientras que en las de forma redondeada las paredes fueron finas.

Respecto al patrón vascular del pecíolo, todas las especies estudiadas mostraron un solo haz conductor central de arreglo bicolateral y dos hacesillos pequeños presentes en el extremo distal de cada ala. Sin embargo, se observaron diferencias en la forma del haz vascular que presentó tres patrones distintos: reniforme, en herradura y de forma aplanada, siendo éstos similares al arco plano y medulado abierto referidos por Judd et al. (1999), quien considera doce patrones vasculares comunes para dicotiledoneas. El primer patrón lo presentaron: S. aphyodendron, S. cornifolium, S. dissimile, S. falconense, S. microleprodes, S. nudum y S. turgidum (Fig. 4); el segundo S. chlamydogynum, S. gratum, S. leucocarpon, S. lucens, S. obovalifolium, S. ripense y S. tanysepalum (Fig. 4) y el tercero en S. oblongifolium y S. validinervium (Fig. 4).

Respecto a las sustancias ergásticas, sólo S. aphiodendron, S. cornifolium, S. dissimile, S. oblongifolium, S. ripense, S. tepuiense y S. validinervium presentaron arenillas cristalíferas en células del parénquima esponjoso. Por otra parte la presencia de cristales se evidenció sólo en S. chlamydogynum, S. falconense, S. lucens y S. tepuiense. Este carácter podría considerarse de valor y significado taxonómico (Judd et al., 1999). Todas las especies que presentaron arenillas cristalíferas, a su vez mostraron granos de almidón a excepción de S. tepuiense, S. validinervium. Caso contrario ocurrió con S. falconense que mostró granos de almidón pero ausencia de arenillas cristalíferas.

El análisis de la varianza y la prueba de Tukey, para un α = 5%, indicaron que las especies estudiadas se agrupan en mayor número alrededor de las variables dimensiones del pecíolo (eje transversal x eje longitudinal) y largo de las alas, y en menor grado alrededor del ancho largo del haz vascular. Por otra parte, sólo se encontró correlación entre las dimensiones del pecíolo (r = 0.8902).

Los resultados obtenidos indican que las variables que permiten agrupar las especies para conformar grupos con caracteres comunes dentro de la sección Geminata son: dimensiones del pecíolo (eje transversal por eje longitudinal) y largo de las alas del pecíolo, respectivamente. Así mismo, en todas las especies estudiadas, las dimensiones del pecíolo mostraron correlación entre sí. En las 18 especies, la presencia de alas en el pecíolo permite agruparlas en tres categorías dependiendo de su prominencia. El grosor de las paredes de las células de la epidermis, pareció estar relacionado con su forma.

AGRADECIMIENTO

Al Fondo Nacional de Investigaciones Científicas y Tecnológicas (FONACIT) por su apoyo financiero con base al Proyecto 98002242.

LITERATURA CITADA 

Bhatt, G.P. y V. Singh., 1979. "Nodal anatomy and nodes of branching in Solanaceae". Ind. J. Bot., 2: 171-179.         [ Links ]

Benítez, C.E. y M. Ferrarotto, 2009. "Morphology of foliar epidermis in two groups of Solanum section Geminata (Solanaceae)". Caldasia, 31: 31-40.         [ Links ]

Judd, W., C. Campel, E. Kellogg y P.  Stevens, 1999. Plant Systematic. A Phylogenetic approach. Sunderland, Massachusetts, USA. 464Pp.         [ Links ]

Knapp, S., 2002. "Solanum section Geminata (Solanaceae)". Fl. Neotrop. Monogr., 84: 1-404.         [ Links ]

Maksymowych, A.B., J.A. Orkwiszewski y R. Masymowych, 1983. "Vascular bundles in petioles of some herbaceous and woody dicotyledons". Amer. J. Bot., 70: 1289-1297.         [ Links ]