Aislamiento e identificación de Aeromonas bestiarum a partir de carpa común de cultivo (Cyprinus carpió L.) procedentes de Santa María Chapa de Mota, Estado de México, México
Isolation and identification of Aeromonas bestiarum in cultured common carp (Cyprinus carpio L.) from Santa Maria Chapa de Mota, Estado de Mexico, Mexico
Edgardo Soriano–Vargas* Graciela Castro–Escarpulli** Ma. Guadalupe Aguilera–Arreola** Fernando Vega–Castillo* Celene Salgado–Miranda*
* Centro de Investigación y Estudios Avanzados en Salud Animal, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autónoma del Estado de México, Carretera Panamericana Toluca–Atlacomulco, km 15.5, Toluca, 50200, México, Tel./Fax: (722) 2965555, correo electrónico: soriano@uaemex.mx
** Laboratorio de Bacteriología Médica, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, Instituto Politécnico Nacional. Plan de Ayala y Carpio s/n, México, D. F., 11340, Tel. 57296300 ext. 62374.
]]>Recibido el 3 de septiembre de 2009.
Aceptado el 26 de marzo de 2010.
Abstract
The isolation of Aeromonas bestiarum from common carps (Cyprinus carpio L.), cultivated at Santa Maria Chapa de Mota, is reported for the first time. The genetic identification for differentiating A. bestiarum from A. salmonicida is here emphasized.
Key words: Aeromonas bestiarum, carp, aquacultura, Mexico.
Resumen
Se informa por primera ocasión el aislamiento de Aeromonas bestiarum a partir de carpa común (Cyprinus carpio L.) de cultivo, procedente de Santa María Chapa de Mota, Estado de México, México. Se enfatiza la identificación genética para la diferenciación entre A. salmonicida y A. bestiarum.
]]> Palabras clave: Aeromonas bestiarum, carp, acuacultura, México.
Introducción
El género Aeromonas incluye microorganismos gramnegativos que residen en amplia variedad de ambientes, aunque su hábitat más frecuente son las aguas dulces en asociación con fauna acuática y sedimentos. Algunas especies de Aeromonas infectan y ocasionan enfermedad en diversas especies animales, peces y humanos.1
El diagnóstico está basado principalmente en el aislamiento bacteriológico e identificación bioquímica del agente. De manera particular, A. salmonicida ocasiona forunculosis en los salmónidos principalmente, mientras que A. bestiarum se ha aislado de peces enfermos y ha demostrado ser patógena para la carpa común.2 Las cepas de A. salmonicida no son móviles y producen hemólisis. Actualmente se reconocen cinco subespecies: A. salmonicida subespecie achromogenes, A. salmonicida subespecie masoucida, A. salmonicida subespecie pectinolytica, A. salmonicida subespecie smithia y A. salmonicida subespecie salmonicida. Sin embargo, muchos laboratorios clasifican A. salmonicida subespecie salmonicida como "típica" y cualquier aislamiento con diferencias fenotípicas como "atípica".3 Las cepas de A. bestiarum producen hemólisis y generalmente son móviles.2* Sin embargo, los aislamientos con características fenotípicas diferentes pueden limitar la identificación precisa entre A. salmonicida y A. bestiarum.
En México se han aislado otras especies de Aeromonas del tipo mesofílico y móviles (por ejemplo, A. hydrophila) a partir de diversos peces de cultivo destinados para consumo humano y ornato: trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss),4,5 tilapia (Oreochromis aureus; O. niloticus niloticus),4,6 pez dorado (Carassius auratus auratus)7 y charal (Chirostoma humboldtianum).8
Aquí se informa por primera ocasión el aislamiento de A. bestiarum a partir de carpa común (Cyprinus carpio L.) de cultivo, procedente de Santa María Chapa de Mota, Estado de México, México.
Como parte del programa de vigilancia epidemiológica del Comité de Sanidad Acuícola del Estado de México, A. C. (CSAEM), se remitieron para diagnóstico carpas de cultivo procedentes de un bordo localizado en Santa María Chapa de Mota. La explotación es de tipo semiintensivo con tres mil peces de diferentes edades (crías, juveniles y adultos). Los peces se alimentan de plancton y conviven con ranas silvestres. El productor no informa condiciones patológicas previas.
Veinte carpas juveniles de talla y peso variado (longitud promedio, 9.47 cm; peso promedio, 11.91 g), clínicamente sanas, fueron incluidas en el estudio parasitológico, bacteriológico e histológico.
Durante la inspección externa se observaron: aletas dorsales y caudal deshilachadas (en nueve y diez peces, respectivamente); hemorragias petequiales en aleta caudal (en 12 peces); branquias pálidas (en dos peces); hemorragias en superficie ventral y lateral (en dos y cinco peces, respectivamente). A la necropsia se observó hepatopáncreas pálido (en siete peces).
]]> En bazo se observó esplenomegalia (en un pez) y congestión (en tres peces). En el estudio parasitológico se identificaron: Trichodina spp y Apiosoma spp a partir de mucus de cuerpo; Trichodina spp en mucus de branquias; y Bothriocephalus acheilognathi en estómago e intestino (en dos peces).Para el estudio bacteriológico se incluyeron muestras de branquias, intestino, bazo, hepatopáncreas y riñón. Se aisló Escherichia coli a partir de branquias y Salmonella spp a partir de riñón. Un aislamiento de Aeromonas a partir de riñón fue identificado como A. salmonicida, con base en su perfil bioquímico, la actividad P–hemolítica y sin movilidad. En el estudio histológico no se observaron cambios patológicos aparentes en bazo y riñón.
El aislamiento de Aeromonas fue remitido al Laboratorio de Bacteriología Médica, de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas del Instituto Politécnico Nacional, para su identificación genética, que se realizó empleando el RFLP–PCR (por sus siglas en inglés: restriction fragment lenght polymorphism) del gen 16S ADNr de acuerdo con lo descrito por Borrell et al.9 y Figueras et al.10 El amplicón de 1502 pb se purificó empleando el sistema comercial PureLink PCR Purification Kit** y se sometió a digestión doble con las enzimas Alu–I y Mbo–I. El producto de la restricción se sometió a electroforesis vertical en poliacrilamida al 17%, para obtener el patrón común de las especies A. bestiarum, A. salmonicida, A. encheleia, Aeromonas HG11 y A. popoffi. Para determinar la especie, se realizó una digestión con la enzima Nar–I. Se obtuvieron dos fragmentos de restricción (1 050 pb y 542 pb), un patrón común para A. bestiarum y A. salmonicida. Una última digestión con la enzima Pst–I produjo dos fragmentos (1005 pb y 497 pb), patrón específico para A. bestiarum (Figura 1). El fragmento de 1 502 pb es el amplicón del gen 16S ARNr que no fue digerido por las endonucleasas de restricción. La especie A. piscicola, aislada de salmones y truchas, muestra un patrón relacionado con A. salmonicida y A. bestiarum. Sin embargo, las cepas de A. piscicola son distinguibles fenotípicamente debido a que son móviles.11
El cultivo de carpa se realiza generalmente en estanques rústicos con agua estancada, lo cual propicia la presencia de agentes patógenos parasitarios y bacterianos, principalmente. Los parásitos Trichodina spp y Apiosoma spp son identificados con mayor frecuencia en peces cultivados en agua con abundante materia orgánica en suspensión. Algunos autores consideran a Trichodina spp un parásito comensal. Sin embargo, ambos parásitos pueden producir enfermedad en los peces.12 El cestodo Bothriocephalus acheilognathi es considerado uno de los helmintos más exitosos para parasitar peces de agua dulce.13 La velocidad y la eficacia con que B. acheilognathi se ha dispersado en las diferentes cuencas hidrológicas del país, a partir de su introducción en 1996, indican una distribución general muy amplia que ha aumentado en cinco veces el número de peces susceptibles de infección. En contraste, B. acheilognathi no parece haberse adaptado a peces sudamericanos, como en Brasil, que sólo se ha registrado en Cyprinus carpio.14
El aislamiento de bacterias a partir de branquias e intestino es común también debido a la exposición al medio acuático. El aislamiento bacteriano a partir de órganos internos implica infección, colonización y posible producción de daño. Se desconoce la relevancia del aislamiento de Salmonella spp a partir de muestras de riñón. Sin embargo, debido a que estos peces son destinados para consumo humano, constituyen un riesgo de infección. Este tipo de estudios promovidos por el CSAEM, contribuyen a la vigilancia epidemiológica e inocuidad alimentaria de los productos acuáticos cultivados en la entidad.
No se observaron lesiones en las muestras de riñón incluidas en el estudio histológico; sin embargo, el aislamiento de A. bestiarum a partir de este órgano indica la capacidad de infección (establecimiento en un hospedero) e invasión.15 La falta de movilidad, una característica aparentemente "atípica" en A. bestiarum, puede explicar la baja virulencia de este aislamiento, por lo que es necesario realizar estudios de patogenicidad bajo condiciones controladas.
El proceso realizado para la identificación de A. bestiarum enfatiza la necesidad de la identificación genética de los aislamientos. Existen pocos trabajos realizados en México en los cuales se haya identificado genéticamente A. salmonicida en peces.16 Los resultados de este trabajo resaltan la importancia del género Aeromonas y la correcta identificación de las especies.
En conclusión, el presente trabajo es el primer informe de aislamiento de A. bestiarum a partir de carpa (Cyprinus carpio L.) de cultivo procedentes de Chapa de Mota. Es necesario realizar la identificación genética de Aeromonas en los laboratorios de microbiología diagnóstica de organismos acuáticos.
]]>Agradecimientos
Se agradece al personal del Comité de Sanidad Acuícola del Estado de México, A. C., por las facilidades proporcionadas.
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