Los métodos confiables y reproducibles de transformación genética son una herramienta clave para entender la fisiología y biología celular de Symbiodinium. Sin embargo, los métodos de transformación aplicados previamente a células tales como microalgas, incluyendo aquellos que usan perlas de vidrio, no han sido probados en Symbiodinium. Aquí reportamos un método simple de transformación transitoria que permitió la incorporación de plásmido en tres clados distintos de células de Symbiodinium en cultivo, con el plásmido pCB302 dirigido a plantas y que alberga secuencias codificantes de la fusión de proteína verde fluorescente (gfp) con RACK1C de Arabidopsis thaliana (AtRACK1C). La accesibilidad del plásmido a la pared celular resistente y a través de la membrana plasmática de los dinoflagelados se logró mediante agitación vigorosa en presencia de perlas de vidrio y polietilenglicol. El gen que confiere resistencia al herbicida Basta permitió la selección apropiada en las células fotosintéticas. La frecuencia de transformación con este plásmido por cada 10⁶ células fue de 107 ± 7 transformantes para Symbiodinium kawagutii; 74 ± 8 para Symbiodinium microadriaticum ssp. microadriaticum y 65 ± 5 para Symbiodinium sp. Mf11. Por otra parte, los cultivos de Symbiodinium pulchrorum fueron transformados exitosamente con un vector diferente (pCAMBIAFABD2-gfp) bajo las mismas condiciones, lo cual valida aún más nuestro procedimiento. La observación de emisión verde fluorescente en el citoplasma de las células en todas las transformaciones llevadas a cabo indicó que este procedimiento permitió que los plásmidos heterólogos entraran y promovieran la expresión en las células de Symbiodinium. El éxito de este método de transformación transitoria abre posibilidades interesantes para los estudios de genómica funcional en Symbiodinium spp.

Reproducible and reliable genetic transformation methods are a key tool for understanding the physiology and cell biology of Symbiodinium. Nevertheless, transformation methods previously applied to cells such as microalgae, including those utilizing glass beads, have not been tested on these microorganisms. Here, we report a simple, transient transformation method, which allowed plasmid incorporation into three distinct clades of cultured Symbiodinium cells with the plant-targeted plasmid pCB302 harboring sequences encoding a fusion of green fluorescent protein (gfp) with RACK1C from Arabidopsis thaliana (AtRACK1C). Accessibility of the plasmid to the resistant cell wall and through the plasma membrane of the dinoflagellates was achieved through vigorous shaking in the presence of glass beads and polyethylene glycol. A resistance gene to the herbicide Basta allowed appropriate selection in the photosynthetic cells. The transformation frequency per every 10⁶ cells was 107 ± 7 transformants for Symbiodinium kawagutii, 74 ± 8 for Symbiodinium microadriaticum ssp. microadriaticum, and 65 ± 5 for Symbiodinium sp. Mf11. Moreover, Symbiodinium pulchrorum cultures were successfully transformed with a different vector (pCAMBIA-FABD2-gfp) under the same conditions, further validating our procedure. The observation of green fluorescent emission from the cell cytoplasm in all performed transformations indicated that the procedure allowed the heterologous plasmids to enter and undergo expression in the Symbiodinium cells The success of this transient transformation method opens interesting possibilities for functional genomics studies in Symbiodinium spp.