Efecto de los ácidos grasos poliinsaturados sobre población folicular y calidad ovocitaria en ovejas Pelibuey
Effect of polyunsaturated fatty acids on follicular population and oocyte quality in Pelibuey sheep
Victor Meza-Villalvazo1*, Hector Magaña2, Carlos Sandoval3, Monserrat Morales4, Alfonso Chay5, Alfredo Trejo6
1 Universidad del Papaloapan. Instituto de Biotecnología. Circuito Central No. 200, Col. Parque Industrial. CP. 68301. Tuxtepec, Oaxaca, México.*meza1077@hotmail.com.
]]> 2 Instituto Tecnológico de Conkal. Km 16.3 Antigua Carretera Mérida-Motul, Conkal Yucatán México.3 Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Autónoma de Yucatán. Apdo. 4-116 Itzimna, Mérida, Yucatán, México.
4 Centro de Bachillerato Tecnológico Forestal No 3, Colonia Obrera Tuxtepec Oaxaca México.
5 División Académica de Ciencias Agropecuarias, Universidad Juárez Autónoma de Tabasco. Carretera Villahermosa-Teapa, Km 25, R/a. La Huasteca 2a. Sección, Villahermosa, Tabasco, México.
6 Universidad del Papaloapan, Avenida Ferrocarril S/N, ciudad universitaria, Loma Bonita Oaxaca.
Artículo recibido: 06 de agosto de 2013,
Aceptado: 30 de octubre de 2013
RESUMEN
]]> Se estudió el efecto de los ácidos grasos poliinsaturados en la dieta de ovejas Pelibuey, en el tamaño de los folículos y la calidad de los ovocitos. Treinta ovejas se colocaron al azar en tres tratamientos, y se alimentaron con una dieta base y 0, 3, 6% de aceite de maíz, para TA0, TA3 y TA6 respectivamente. Los celos se sincronizaron con tres inyecciones de PGF2a a intervalos de siete días. La primera aplicación fue el día de inicio del experimento (día 0). Sobre el celo detectado se aplicó la tercera dosis, acompañada de la inserción de una esponja vaginal por 12 días. Los animales se sacrificaron el día 29 del experimento, se midieron los folículos y se clasificaron en pequeños (2 - 2.99 mm), medianos (3 - 4.99 mm) y grandes (> 5 mm). Los complejos ovocito-cúmulos (COCs) se aspiraron mediante punción a partir de folículos ≥ 2 mm, clasificándose en excelente, buena, regular y mala calidad. El peso vivo final (PVF), condición corporal final (CCF) y ganancia diaria de peso (GDP) no mostraron diferencias (P > 0.05). La media de la población total folicular y folículos grandes fue mayor en TA6 (P < 0.05). La proporción de ovocitos de excelente y buena calidad fue mayor (P < 0.05) para TA3 y TA6. En conclusión, la adición de ácidos grasos poliinsaturados en la dieta de ovejas Pelibuey no modifica la talla y el número de folículos pequeños y medianos, pero si la población de folículos grandes, mejorando la calidad de los ovocitos recolectados.Palabras clave: Ácidos grasos poliinsaturados, ovejas Pelibuey, calidad ovocitaria.
ABSTRACT
The effect of polyunsaturated fatty acids in the diet of Pelibuey sheep, on follicle size and oocyte quality was evaluated. Thirty sheep were placed randomly in three treatments, and were fed a basal diet and 0, 3, 6% corn oil, for TA0, TA3 and TA6 respectively. Their estrus was synchronised with three injections of PGF2a at intervals of seven days. The first injection was given on the first day of the experiment (day 0). When the animals' heat was detected, the third injection was applied, accompanied by the insertion of a vaginal sponge for 12 days. The animals were slaughtered on day 29 of the experiment, the follicles were measured and classified as small (2 - 2.99 mm), medium (3 - 4.99 mm) and large (> 5 mm). The oocyte-cumulus complexes (COCs) were suctioned by puncturing from follicles ≥ 2 mm, and were classified as excellent, good, fair and poor quality. The final live weight (FLW), final body condition (FBC) and daily weight gain (DWG) showed no differences (P > 0.05). The mean of the total follicular population and large follicles was greater in TA6 (P < 0.05). The proportion of oocytes of excellent and good quality was greater (P < 0.05) in TA3 and TA6. In conclusion, the addition of polyunsaturated fatty acids to the Pelibuey sheep diet does not alter the size and number of small and medium follicles, but does so in the case of the large follicle population, improving the quality of the collected oocytes.
Key words: Polyunsaturated fatty acids, Pelibuey sheep, oocyte quality.
INTRODUCCIÓN
La calidad de los ovocitos y un desarrollo embrionario temprano óptimo son importantes para el establecimiento de la preñez, ya que aseguran un mayor nacimiento de crías, tanto en los procesos de gestación natural, como en biotecnológicos aplicados a la reproducción animal.
En todos los casos, el nivel y la composición de la dieta alimenticia puede tener efectos sobre el ovocito y en el desarrollo embrionario temprano (Ashworth et al. 2009). Componentes específicos de la dieta, como la energía pueden influenciar positivamente algunos aspectos reproductivos de la hembra (Fouladi-Nashta et al. 2009). En este sentido, se ha demostrado que dietas ricas en ácidos grasos poliinsaturados tienen efectos específicos en diferentes tejidos, con beneficios potenciales sobre la fertilidad, los cuales, parecen ser independientes de la disposición de calorías y cambios en el estado energético del animal (Santos et al. 2008). Se han reportado diferentes efectos de los ácidos grasos poliinsaturados en el aspecto reproductivo in vitro e in vivo en la esteroidogénesis (Hughes et al. 2011), metabolismo de las células endometriales (Kirkup et al. 2010), calidad ovocitaria y desarrollo de embriones (Sturmey et al. 2009). Sin embargo, en el contexto de las investigaciones actuales, los resultados sobre ácidos grasos y su papel como proveedores de energía de los ovocitos y embriones (Sturmey et al. 2009) son contradictorios, ya que la composición de ácidos grasos de diferentes fuentes varía en su perfil, por lo que resulta interesante esclarecer como estos cambios ejercen su efecto sobre la calidad de los ovocitos y su repercusión sobre la fertilidad de los animales (Waleed et al. 2010; Bender et al. 2010). Aunado a lo anterior, en ovinos de pelo bajo condiciones tropicales se han realizado pocos estudios que evalúen el efecto de la suplementación grasa de origen vegetal (Herrera-Camacho et al. 2008; Cancino-Arroyo et al. 2009).
]]> Con base en lo anterior, el objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de la adición de diferentes niveles de ácidos grasos poliinsaturados omega 6 en la dieta, sobre el número de folículos y la calidad de los ovocitos en ovejas Pelibuey.
MATERIALES Y MÉTODOS
Ubicación
El estudio se realizó en la posta zootécnica de la Universidad del Papaloapan Campus Loma Bonita, Oaxaca. Latitud Norte 95° 53', longitud Oeste 18° 06', altura de 30 msnm y Clima "Am" (INEGI 2010).
Animales, manejo y alimentación
Se utilizaron 30 ovejas adultas multíparas, de la raza Pelibuey, con una condición corporal (CC) al inicio del experimento 2.60 ± 0.30 en la escala uno a cinco (Russel et al. 1969) y un peso vivo (PV) de 32.70 ± 1.87 kg. Las ovejas se mantuvieron en estabulación completa por un periodo de 28 d; se distribuyeron al azar en tres tratamientos: tratamiento testigo (TA0, n = 10), 600 g de pasto Pangóla + 400 g de maíz molido; tratamiento aceite de maíz al 3% (TA3, n = 10), 700 g de pasto Pangola + 250 g de maíz molido + 30 g de aceite de maíz; tratamiento aceite de maíz al 6% (TA6, n = 10) 820 g de pasto Pangóla + 120 g de maíz molido + 60 g de aceite de maíz. Las dietas se balancearon de acuerdo al AFCR (1993), procurando que fueran isoenergéticas y que permitiera que los animales ganaran entre 60 y 80 gd-1. La cantidad de aceite correspondiente a cada tratamiento se suministró vía oral con una jeringa, para asegurar que cada animal consumiera la cantidad exacta diariamente. Los animales se pesaron cada siete días, durante la mañana previo a la administración de la dieta, así mismo se registró la condición corporal (CC) inicial y final. El cambio diario de peso (GDP gd-1) se estimó por medio de regresión, considerando la pendiente de la ecuación de regresión como la tasa de cambio de peso de los animales.
Sincronización de celos
Los ciclos estrales se sincronizaron con PGF2α (Lutalyse, Pfizer®) en el día cero (día del inicio del inicio del experimento), la segunda aplicación fue el día siete, en los días ocho y nueve, se detectó celo y a partir de esto el día 14 se aplicó una tercera dosis de prostaglandina acompañada por la inserción de esponjas vaginales impregnadas de FGA (Chronogest CR Intervet) por 12 días.
Determinación de la población folicular y obtención de ovocitos
]]> Para determinar la población folicular y obtención de ovocitos, se detectó la presencia de celo a intervalo de 4 h a partir de las 24 h del retiro de la esponja hasta las 48 h, cada hembra fue expuesta a un macho con mandil, conforme manifestaban celo se sacrificaron. Los ovarios fueron recuperados y se colocaron en una bolsa de sellado hermético con 200 mi de suero fisiológico (Solución Hartmann, Pisa) y transportados al laboratorio químico-biológico de la Universidad del Papaloapan en un recipiente isotérmico para su evaluación. La determinación del tamaño de folículos se realizó con un vernier digital (TRUPER, digital estándar y milimétrico Mod. 14388) y se clasificaron en pequeños (2.00 - 2.99 mm) medianos (3.00 - 4.99 mm) y grandes (> 5.00 mm). Los complejos ovocito-cúmulos (COC) fueron aspirados mediante punción a partir de folículos ≥ 2.00 mm con una jeringa de 5 cc y aguja de 18 × 1½.x. El contenido folicular colectado fue vertido en una caja de Petri de 100 mm y diluido con solución fisiológica para facilitar su evaluación y clasificación, la cual se realizó con un microscopio de contraste de fase (Leica Mod. DM300) Clasificándose en cuatro categorías: excelente: cúmulos compacto (> 4 a 5 capas) con un ooplasma homogéneo; buena: cúmulo compacto de una o dos capas con ooplasma homogénea que tiene una apariencia gruesa; regular: menos cúmulo compacto (ligeramente ampliado cúmulos) con ooplasma irregulares que contienen grupos obscuros; mala: ovocitos desnudos y ooplasmas irregulares (Patricio et al. 2003).Análisis estadístico
Las variables peso vivo final (PVF), condición corporal final (CCF), ganancia diaria de peso (GDP), el tamaño y total de folículos se analizaron mediante un análisis de varianza (ANOVA). La calidad de los ovocitos, se analizó mediante una prueba de Chi-cuadrada con el programa estadístico Statistix (1996).
RESULTADOS
El peso de las ovejas al principio y al final del experimento no varió debido al nivel de aceite de maíz en la dieta (P > 0.05) entre los tratamientos ya que las dietas se balancearon de manera isoenergética e isoproteica y fueron calculadas para un equilibrio nutricional positivo, lo que permitió a las ovejas expresar una ganancia media diaria de peso positiva.
Los datos de población folicular se muestran en la Tabla 1, en la cual se observa que el tamaño promedio de la población total de folículos y folículos grandes es mayor en el grupo TA6 (P < 0.05). A pesar presentar un promedio mayor de folículos de tamaño pequeño y mediano los tratamientos TA3 y TA6 no se observó diferencia (P > 0.05) con respecto al tratamiento TAO (Tabla 2).
El total de ovocitos obtenidos en el presente trabajo y clasificados en función de su calidad (Figura 1) se presentan en la Tabla 3. Los tratamientos TA3 y TA6 presentan un porcentaje de ovocitos de excelente y buena calidad del 77.5% contra un 46 % del tratamiento TAO. Sin embargo, al contrastar únicamente los ovocitos de excelente calidad el TA6 presenta un mayor número (56%) y una significancia estadística del (P < 0.05) en comparación con los tratamientos TA3 (43%) y TAO (26%). En cuanto a los ovocitos con calidad regular y mala los tratamientos no presentan diferencias (P > 0.05), pero es importante enfatizar que el TAO presenta un 54% en comparación con un 26% y 19% de los tratamientos TA3 y TA6, lo que denota una disminución de dichas categorías conforme el nivel de aceite aumenta en la dieta.
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DISCUSIÓN
La población folicular, los folículos de tamaño pequeño (2.00 - 2.99 mm) y grande (≥ 5.00 mm) en el presente estudio concuerdan con lo reportado por Herrera et al. (2003) quien al suplementar ovejas Pelibuey con aceite de maíz observaron un mayor número de folículos pequeños (7.50 ± 1.02 vs 6.13 ± 0.80) y grandes (2.28 ± 0.22 vs 1.00 ± 0.13) en ovejas que consumieron el aceite con respecto al testigo.
Los resultados del presente estudio son similares con otros trabajos donde se emplean distintas fuentes de suplementación grasa, teniendo como resultado un aumento constante en el número y tamaño de los folículos ováricos (Oldick et al. 1997, Thomas et al. 1997, De Fries et al. 1998) pero difieren a lo reportado por Herrera-Corredor et al. (2010) al alimentar ovejas Pelibuey con aceite de soya encontraron una disminución en el número de folículos pequeños (8.03 ± 0.26 vs 10.15 ± 0.26) en comparación a la dieta control, sin encontrar efecto significativo del aceite sobre folículos grandes (1.36 ± 0.09 vs 1.24 ± 0.09). El incremento del tamaño de folículos preovulatorios puede deberse en parte al incremento de las concentraciones de LH en plasma, el cual estimula la etapa tardía del crecimiento folicular (Mattos et al. 2000). Los mecanismos por el cual la suplementación grasa puede estimular la liberación de LH aún no son del todo claros (Staples et al. 1998). Sin embargo, puede ejercer su efecto a través de la concentración plasmática de insulina, tras el consumo de grasa se reduce la concentración de insulina en sangre, esto provoca lipólisis y aumento del aporte de ácidos grasos endógenos, el subsecuente ahorro de glucosa para síntesis de grasa aumenta la glucosa disponible para otros tejidos y estimula la producción de insulina que actúa como señal para la estimulación de la liberación de LH (Fuston 2004; Nicholas et al. 2005). En este sentido, se requiere mayor investigación en ovinos de regiones tropicales, ya que el uso de ácidos grasos poliinsaturados como suplementación energética no está documentado de forma consistente en la reproducción de ovejas (Herrera et al. 2003, Herrera-Camacho et al. 2008, Cansino-Arroyo et al. 2009, Herrera-Corredor et al. 2010).
En el presente trabajo, se muestra evidencia del efecto estimulatorio de la suplementación del aceite de maíz sobre la calidad ovocitaria, ya que los tratamientos suplementados con el 3 y 6% de este aceite presentaron un mayor porcentaje de ovocitos de excelente y buena calidad, lo cual concuerda con lo citado por Zeron et al. (2002), al suplementar ovejas con jabones cálcicos de aceite de pescado reportan una mayor calidad ovocitaria, mejor integridad de las membranas del ovocito y un incremento de la proporción de ácidos grasos poliinsaturados en el plasma, líquido folicular y células del cumulus, pero no en los ovocitos, de igual manera McEvoy et al. (2012) informa que la inclusión del 3% de aceite pescado en la dieta de ovejas puede propiciar un efecto benéfico para producción de ovocitos y el desarrollo subsecuente del embrión in vivo, mientras que in vitro concentraciones altas pueden ser contraproducentes. Sin embargo, los datos del presente estudio difieren a lo reportado por Bilby et al. (2006) al evaluar diferentes fuentes de ácidos grasos en vacas y su influencia en la calidad de los ovocitos y desarrollo folicular en la estación de verano, encontrando que la fuente de suplementación enriquecida con diferentes ácidos grasos omega afecta el folículo y el tamaño del cuerpo lúteo en vacas lecheras durante el verano, pero no altera la calidad del ovocito según lo determinado por la subsecuente capacidad para formar un embrión en desarrollo después de la fecundación in vitro, de igual manera Wonnacott et al. (2010) no reportaron diferencia alguna en cuanto a calidad y composición de ácidos grasos de ovocitos provenientes de ovejas alimentadas con 4.5% de diversas fuentes de aceite (linasa, salmón, girasol) en la ración; sin embargo, la relación de ácidos grasos poliinsaturados n - 3 / n - 6 difiere significativamente entre dietas, la composición lipídica de los ovocitos aún sigue siendo incierta (Sturney et al. 2009) y puede estar en función del aporte del tipo de ácidos grasos provenientes de la dieta (Bilby et al. 2006). Vaquillas suplementadas con niveles altos de aceite de pescado, incrementaron significativamente el total de ácidos grasos poliinsaturados omega 3 y la relación en el líquido folicular de ácidos grasos omega 3:6 (Childs et al. 2008), estos cambios se correlacionan fuertemente con el incremento de los niveles de n-3 en plasma, tales alteraciones del perfil de ácidos grasos en líquido folicular demuestran su influencia en el desarrollo del ovocito (Webb et al. 2003; Waleed et al. 2010). Sin embargo, se ha sugerido la existencia de un proceso selectivo de protección, el cual se ha desarrollado para garantizar que la composición de ácidos grasos poliinsaturados del ovocito mantenga un nivel constante para evitar el riesgo de daño celular (Santos et al. 2008). Por otra parte, la excelente y buena calidad de los ovocitos, se ha correlacionado con aspectos morfológicos en las células del cumulus, correspondientes a los folículos preovulatorios que tienen mayor capacidad de desarrollo a etapa de blastocisto, posiblemente debido al aumento de la maduración citoplasmática (Blondín & Sirrard 1995). Folículos pequeños de novillonas alimentadas con dietas altas en energía han reducido significativamente los niveles de ARNm que codifica IGFP-2, IGFP-4, los cuales son potencialmente reguladores de la biodisponibili-dad de los IGFs, (Insulin like growth factors) (Armstrong et al. 2001, Nicholas et al. 2005). La calidad del ovocito maduro in vivo resulta de especial interés, dado que en esta fase, prácticamente se selecciona naturalmente por estos factores (Gonzales et al. 2007), los cuales pueden ser influenciados por la dieta y tienen la capacidad para interactuar con el ovocito a través del receptor IGF-, este es probablemente un factor crítico que controla la capacidad del ovocito para desarrollarse (Armstrong et al. 2002).
Los resultados en el presente estudio indican que la adición de ácidos grasos poliinsaturados en la dieta de ovejas Pelibuey, no modifica la talla y el número de folículos pequeños y medianos, pero si la población de folículos grandes, mejorando la calidad de los ovocitos recolectados
AGRADECIMIENTO
A el CONACYT por la beca otorgada (98932) para la realización de los estudios doctorales del autor de correspondencia.
]]> A el PROMEP por el otorgamiento de la beca convencional para estudios de posgrado.
LITERATURA CITADA
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