Rafael Pérez-Pacheco1,2, Cesáreo Rodríguez Hernández2, Joel Lara-Reyna2, Roberto Montes Belmont3 y Gustavo Ramírez Valverde2
1 CIIDIR-Oaxaca del Instituto Politécnico Nacional. Hornos No. 1003, Colonia Indeco Xoxocotlan, CP 71230, Oaxaca, MÉXICO. rperez88@prodigy.net.mx.
2 Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrícolas. crhernan@colpos.mx; jlara@colpos.mx.
3 Instituto Politécnico Nacional. CEPROBI. rbelmont@ipn.mx.
Recibido: 7 de febrero 2003 ]]> Aceptado: 9 de octubre 2003
RESUMEN
Se evaluaron 51 especies de plantas del estado de Oaxaca, México; 39 como extractos acuosos al 5 y 15% y 21 al 25%, y como extractos acetónicos tres especies con cinco dosis (0.1, 0.01, 0.001, 0.0001 y 0.00001%). Además de ocho aceites vegetales a tres dosis (0.1, 0.01 y 0.001%) y 11 esencias vegetales comerciales con cuatro dosis (0.1, 0.01, 0.001 y 0.0001%). Los bioensayos consistieron en colocar 20 larvas de cuarto estadio larval de mosquito Cx. quinquefasciatus (Say) en un vaso de plástico con 100 ml de agua y adicionar 1 ml de cada dosis de los extractos preparados. Las plantas que presentaron mayor acción larvicida como extracto acuoso y acetónico fueron la semilla de anona (Annona squamosa L.), la vaina de huizache (Acacia farneciana L.) y la corteza de guamuchil (Pithecellobium dulce Roxb.). Las CL50 y CL95 del extracto acetónico de la semilla de A. squamosa fueron de 0.00025 y 0.00701% respectivamente. Los aceites vegetales provocaron 20% de mortalidad como máxima actividad y con las esencias vegetales se registró de 65 a 100% de mortalidad.
Palabras clave: Culex quinquefasciatus, extractos vegetales, mosquitos, toxicidad.
ABSTRACT
Fifty-one species of plants from the state of Oaxaca, Mexico, were evaluated for toxicity: 39 as water extracts at 5 and 15% and 21 at 25% and three species as acetone extracts in five doses (0.1, 0.01, 0.001, 0.0001 and 0.00001%). Also tested were eight vegetable oils in three doses (0.1, 0.01 and 0.001%) and 11 commercial vegetable essences in four doses (0.1, 0.01, 0.001 and 0.0001%). The bioassays consisted in placing 20, early IV instar larvae of the mosquito, Culex quinquefasciatus, in a plastic container with 100 ml of water with 1 ml of each dose of the extract preparations. The plants that presented the greatest larvacidal action as water and acetone extracts were anona seed (Annona squamosa L.), the huizache vine (Acacia farneciana L.), and bark from the guamuchil tree (Pithecellobium dulce Roxb.). The CL50 and CL95 of the acetone extract of A. squamosa seed was of 0.00025 and 0.00701% respectively. The vegetable oils produced a maximum mortality rate of 20% and the commercial essences produced mortality rates between 65% and 100%.
Key words: Culex quinquefasciatus, extracts of plants, mosquitoes, toxicity.
]]> INTRODUCCIÓN
Los mosquitos constituyen un grupo de insectos de gran importancia, debido a que muchas de sus especies, además de causar diversas molestias, son vectoras de agentes causales de enfermedades humanas con gran importancia en salud pública, como por ejemplo la malaria y el dengue. Su combate se ha efectuado tradicionalmente con insecticidas organosintéticos, los cuales han ocasionado daños al ambiente, intoxicado a las personas expuestas y desarrollado resistencia. En respuesta a esta problemática se considera necesaria la búsqueda de alternativas de solución con menos riesgos y con bajo costo económico y ambiental, como el uso de extractos vegetales; uno de los métodos de control más antiguos de plagas de insectos.
Las plantas y sus derivados han mostrado actividad contra ácaros, roedores, nematodos, bacterias, virus, hongos e insectos, entre éstos los mosquitos (Grainge & Ahmed 1988).
Las evaluaciones realizadas con plantas, como extractos acuosos (Rodríguez et al. 1982, Kumul 1983, Pacheco 1983, Espinosa 1985, Salcedo 1985, Rodríguez & Lagunes 1987, Sánchez 1987, Rivera 1992, Bowers et al. 1995, Sánchez et al. 1997), extractos acetónicos (Subramonia & Kathiresan 1992, 1993, Pushpalatha & Muthukrishnan 1995, Sagar & Sehgal 1997, Latha & Joseph 1999), y aceites vegetales (Ho et al. 1992, Ansari et al. 2000a, b) para eliminar larvas de mosquitos, han incrementado la lista a 140 especies de plantas con propiedades larvicidas informadas por Grainge y Ahmed (1988), quienes en su extensa revisión de literatura no presentaron algunas de las referencias citadas anteriores a 1988 y faltando en este trabajo obviamente los datos generados posteriormente a 1988.
Entre las plantas que han destacado contra larvas de mosquitos se encuentra el género Annona, como A. bullata (Rich), A. densicoma (Mart.), A. glabra (L.), A. muricata (L.) y A. squamosa (L.), tóxicas a larvas de mosquito Ae. aegypti (L.) y A. cherimola (Mill) activa contra Ae. aegypti y Anopheles spp. De estas plantas se han extraído nueve principios activos pertenecientes a las acetogeninas y a los alcaloides, los cuales se encuentran principalmente en la corteza y la semilla; aunque también se han encontrado en la raíz, el fruto y en la hoja. Los disolventes que se han utilizado para la extracción de sus principios activos han sido varios: agua, etanol, acetona, cloroformo, éter etílico, éter de petróleo y hexano, lo que denota que varias sustancias activas están inmiscuidas en esta actividad, desde las muy polares que se extraen con agua hasta las no polares que se extraen con hexano (Rodríguez & Nieto 1997, Rodríguez 2000). Por lo que con acetona, un solvente de polaridad intermedia, se extraen la mayor parte de compuestos activos.
La mayoría de las investigaciones que se realizan actualmente sobre el uso de sustancias vegetales para el control de mosquitos están enfocadas a encontrar especies de plantas con propiedades contra adultos (Barnard 1999, Jantan & Mohd, 1999; Ansari et al. 2000a, b, Tawatsin et al. 2001, Fradin & Day 2002), por lo que se requiere continuar evaluando diversas especies de plantas de varias regiones biogeográficas, para encontrar plantas con alto potencial en la eliminación de larvas de mosquito y alguna planta con mayor actividad contra larvas de cierta región en particular que se pueda utilizar para implementar estrategias de control y manejo integrado de mosquitos, haciendo mejor uso de los recursos naturales y reduciendo el uso actual de insecticidas organosintéticos.
El presente trabajo se realizó con el objetivo de determinar el efecto tóxico de extractos acuosos y acetónicos de plantas colectadas en la región de los Valles Centrales del estado de Oaxaca, México, y de algunos aceites y esencias vegetales sobre larvas de mosquito Cx. quinquefasciatus en ensayos de laboratorio.
MATERIALES Y MÉTODOS
Esta investigación se realizó de septiembre del 2000 a agosto del 2001 en el laboratorio de control biológico de mosquitos del Centro Interdisciplinario de Investigación para el Desarrollo Integral Regional (CIIDIR) unidad Oaxaca, del Instituto Politécnico Nacional (IPN), localizado en Santa Cruz Xoxocotlan, Ciudad de Oaxaca, México.
]]> Material vegetal: Durante el período de septiembre a noviembre del 2000 se colectaron 40 especies de plantas (hojas, flores, semillas) en la región de los Valles Centrales de Oaxaca, México, y 11 más se adquirieron en el mercado de abastos de la ciudad de Oaxaca. Este material vegetal se colocó sobre papel periódico, en un lugar ventilado y sombreado, para su secado. Posteriormente se pulverizó cada una de las partes vegetativas, en un molino manual.La identificación de plantas, tanto colectadas como adquiridas en los expendios de plantas medicinales, la realizó personal del herbario del CIIDIR-IPN-Oaxaca. El nombre científico, nombre común en Oaxaca, (Martínez, 1979) y la familia a la cual pertenece cada una de las 51 especies de plantas evaluadas como extractos acuosos se presenta en el Cuadro 1.
Se prepararon extractos acuosos al 5, 15 y 25%, agregando 2.5, 7.5 y 12.5 g de polvo de la planta en 50 ml de agua, respectivamente. Luego se dejaron 24 horas en reposo, para la mejor extracción de sus compuestos hidrosolubles y al término de este tiempo, se separó el sólido del líquido y este último se utilizó en las evaluaciones. Primero se evaluaron extractos acuosos de 39 especies a una dosis de 5 y 15%, y posteriormente extractos de 21 especies a una dosis de 25% de las cuales 12 no se habían evaluado en las dosis anteriores.
Se prepararon extractos acetónicos de las especies de plantas que como extractos acuosos presentaron más del 20% de mortalidad de larvas. Para la preparación de estos extractos se colocaron 75 g de polvo de la planta en un matraz de 1000 ml y se agregaron 300 ml de acetona. Luego se dejó reposar por tres días y se evaporó el solvente con un rotavapor, obteniéndose de 20 a 25 ml de extracto concentrado del cual se prepararon cinco dosis (0.1, 0.01, 0.001, 0.0001 y 0.00001%), que fueron derivadas a partir de una solución madre al 10% (1 ml del extracto concentrado en 9 ml de agua), de la cual se tomó 1 ml y se mezcló con 9 ml de agua para hacer otra solución al 1%, de igual manera de ésta se volvió a tomar 1 ml para hacer la dosis de 0.1% y así sucesivamente para preparar las dosis subsecuentes, sin agregar emulsificante para disolver las soluciones utilizadas.
Para la evaluación de ocho aceites vegetales, seis de ellos (aguacate, almendras, coco, mamey, olivo y papa) comercializados por la farmacia "Ahorro" de la ciudad de Oaxaca, México, el aceite de citronela por la farmacia "París" y el aceite de pino por "Drogas Tacuba, S. A. de C. V." en la ciudad de México, se prepararon tres dosis (0.1, 0.01 y 0.001%) de la misma forma como se describió para los extractos acetónicos.
Se evaluaron 11 esencias vegetales (agave, chícharo, clavel, gardenia, jazmín, lila, narciso, nardo, rosas, sándalo y tabaco), de uso en perfumería, adquiridas en casas comerciales de Perfumes y esencias. De cada una se evaluaron cuatro dosis (0.1, 0.01, 0.001 y 0.0001%) que se prepararon de la misma forma como se describió para las dosis de extractos acetónicos.
Los aceites y esencias vegetales comerciales no mostraron en su etiqueta información relativa a su ingrediente activo.
Cría del mosquito Cx. quinquefasciatus: Para iniciar la cría se colectaron huevos, larvas y pupas del mosquito Cx. quinquefasciatus en estanques con agua sucia y en floreros de panteones de la Ciudad de Oaxaca. Posteriormente se colocaron en bandejas de plástico (47x35x12 cm) con agua, para su desarrollo en el laboratorio de control biológico del CIIDIR-IPN-Oaxaca. Las pupas formadas se colectaron diariamente y se depositaron en una bandeja de plástico (24x19x9 cm) con agua. La bandeja con pupas se introdujo en una jaula entomológica (60x60x60cm) y a los adultos emergidos dentro de ésta se les alimentó de dos maneras: con agua azucarada y azúcar para los machos y adicionalmente para las hembras se colocó un pollo (inmovilizado en una pequeña jaula) como recurso hematofágico. Los huevos depositados en la superficie del agua, se colectaron diariamente y se colocaron en bandejas de plástico (47x35x12 cm) con agua para su eclosión. En estas bandejas se desarrollaron las larvas, a las cuales se les proporcionó alimento para peces tilapia (Apitilapia nivel 1), previamente molido, cada dos días. Al terminar el desarrollo larval y formarse las pupas, se trasladaron a jaulas de emergencia de adultos, para así continuar cotidianamente con todas las actividades de cría de Cx. quinquefasciatus con la finalidad de disponer constantemente de larvas de cuarto estadio larval para efectuar los bioensayos.
]]> Bioensayos: La población de larvas de cuarto estadio temprano se concentró en una bandeja con agua limpia y de ahí se seleccionaron grupos de 20 larvas para colocarlas en un vaso de plástico de 150 ml de capacidad, al que previamente se le añadieron 100 ml de agua. Posteriormente se aplicó 1 ml de los extractos acuosos, acetónicos, aceites y esencias. Al testigo no se le aplicó ningún tratamiento. Para cada dosis evaluada se utilizaron tres repeticiones. Los bioensayos se establecieron bajo un diseño experimental completamente aleatorio, a una temperatura promedio de 27 ± 2°C y humedad relativa de 60 ± 10%.Análisis de datos: A las 24 horas después de la aplicación de los tratamientos se registró la mortalidad de las larvas, considerando muerta aquella que no presentaba movimientos normales. Cuando la mortalidad en el testigo fue de 4 a 12% se realizó la corrección de mortalidad por medio de la ecuación de Abbott (1925):
M.C.=[(X-Y)/(100-Y)] (100)
Donde:
M.C.= Mortalidad corregida (en %).
X = Porcentaje de mortalidad en el tratamiento.
Y = Porcentaje de mortalidad en el testigo.
Cuando esta mortalidad fue menor del 4% no se tomó en cuenta, y cuando excedió del 12% se repitió el experimento.
]]> A los datos obtenidos de la evaluación del extracto acetónico de A. squamosa se realizó un análisis Probit (Raymond 1985), para determinar la Concentración Letal media (CL50) y 95 (CL95).
RESULTADOS
Mortalidad con extractos acuosos al 5 y 15%
La mortalidad obtenida con los extractos acuosos al 5 y 15% de 39 especies de plantas no fue mayor al 15% en ningún tratamiento, como se aprecia en el Cuadro 2.
Mortalidad con extractos acuosos al 25%
En el Cuadro 3 se presenta la mortalidad provocada por los extractos acuosos al 25% de 21 especies de plantas, donde se observa un incremento de mortalidad en las especies que presentaron efecto a 5 y 15% (A. squamosa, A. farneciana, H. sabdaritta, P. dulce y R. communis). Los tratamientos que presentaron mortalidad mayor a 20% fueron los extractos de semilla de A. squamosa, vaina de A. farneciana y corteza de P. dulce.
]]>
Mortalidad con extractos acetónicos
Los resultados de mortalidad ocasionados con extractos acetónicos (Cuadro 4) evidencian un rango de efectividad de 10 a 100% con la semilla de A. squamosa, determinando mediante el análisis probit CL50 de 0.00025% con límites fiduciales de 0.00005 a 0.00134% y CL95 de 0.00701% con límites de 0.00034 a 0.22166% a un nivel de significancia de 95%. Los extractos de P. dulce y de A. farneciana a la dosis de 0.1% provocaron mortalidad moderada.
Mortalidad con aceites y esencias comerciales
En el Cuadro 5 se presenta la mortalidad causada con la aplicación de ocho aceites vegetales en larvas de Cx. quinquefasciatus, donde se observa que ésta no fue mayor al 20%.
Los resultados de mortalidad de larvas de mosquito Cx. quinquefasciatus obtenidos con la aplicación de cuatro dosis de 11 esencias vegetales se muestran en el Cuadro 6, en el cual se aprecia que con la dosis de 0.1% se registró mortalidad de 65 a 100%, con la dosis de 0.01% de 0 a 13.3% de mortalidad y con la dosis de 0.001% un rango de 0 a 6.7% de mortalidad.
]]>
DISCUSIÓN
Los resultados obtenidos en esta investigación, al igual que la revisión de Grainge & Ahmed (1988) y las investigaciones de Rodríguez & Lagunes (1989), demuestran que la proporción de especies de plantas que presentan acción larvicida es baja como extractos acuosos y que no pertenecen a un grupo taxonómico en especial. Sin embargo, con este tipo de investigaciones se conoce el potencial real de varias especies de plantas y se hacen aportaciones importantes para la integración de una lista de plantas con propiedades larvicidas sobre diferentes especies de mosquitos.
La metodología y la técnica de evaluación en esta investigación, permiten explorar rápida y fácilmente una gran cantidad de especies de plantas con posibilidades de detectar alguna especie, extracto o compuesto que tenga efectividad en el control de larvas de mosquitos.
No obstante que especies como el ajo (A. sativum), el chile (C. frutescens), la higuerilla (R. communis), el nim (A. indica) y el paraíso (M. azedarach) que son materia prima de diversos insecticidas comerciales (Rodríguez 2001), no mostraron acción larvicida como extractos acuosos a las dosis del 5 al 25% en esta investigación.
En estos bioensayos el extracto acuoso al 15% de flor-hoja de A. muricata ocasionó 10% de mortalidad y el de la semilla de A. squamosa 15%. Sin embargo, con el extracto acetónico a una dosis de 0.01% se obtuvo mortalidad total de Cx. quinquefasciatus, indicando la presencia de principios activos en estas especies contra larvas de mosquito. Así como también lo informan, Sánchez et al. (1997) quienes con la aplicación del extracto acuoso de A. muricata a una dosis de 66%, determinaron 100% de mortalidad de larvas de Ae. aegypti y Rodríguez (2000), quien menciona que A. bullata, A. densicoma, A. glabra, A. muricata y A. squamosa han demostrado actividad contra larvas de mosquito Ae. aegypti.
El extracto acuoso de flor-hoja de A. muricata mostró una leve mortalidad, la cual probablemente se incremente con el extracto acuoso de la semilla, debido a que ésta contiene anonacina, asimicina y bulatacina ingredientes activos insecticidas contra larvas de mosquitos (Rodríguez 2000).
El aceite de pino ocasionó 20% de mortalidad a la dosis de 0.1%; resultado que difiere con los reportados por Ho et al. (1992), quienes al evaluar Kitz, un producto formulado con aceite de pino, ácido oleíco y un agente humectante a dosis de 1.0, 0.2 y 0.1%, provocaron mortalidad total de huevos, de larvas de primero a cuarto estadio y pupas de Ae. aegypti. Esta diferencia en efectividad probablemente se deba a los demás componentes del producto, y/o a la especie de mosquito, debido a que ellos evaluaron sobre Ae. aegypti y estos bioensayos fueron sobre Cx. quinquefasciatus. De igual manera, el aceite de citronela no presentó un nivel importante de mortalidad; no obstante que este producto tiene reconocido efecto de repelencia de mosquitos adultos de diferentes especies (Curtis et al. 1990, Rodríguez 1998).
]]> Las 11 esencias vegetales evaluadas presentaron altos niveles de mortalidad a la dosis 0.1%, indicando la presencia de un compuesto toxico a las larvas; sin embargo, se considera necesario verificar su toxicidad sin solvente, debido a que se evaluaron formulaciones comerciales.Los resultados de la presente investigación demuestran el potencial de A. squamosa para el control de larvas del mosquito Cx. quinquefasciatus, razón por la cual es importante tomar en cuenta esta alternativa natural en los programas de manejo integrado y bioracional de mosquitos.
LITERATURA CITADA
Abbott, W. S. 1925. A method of computing the effectiveness of an insecticide. J. Econ. Entomol., 18: 265-267. [ Links ]
Ansari, M. A., R. K. Razdan, M. Tandon & P. Vasudevan. 2000a. Larvicidal and repellent actions of Dalbergia sissoo (F. Leguminosae) oil against mosquitoes. Bioresource Tech., 73: 207-211. [ Links ]
Ansari, M. A., P. Vasudevan, M. Tandon & R. K. Razdan. 2000b. Larvicidal and mosquito repellent action of peppermint (Mentha piperita) oil. Bioresource Tech., 71: 267-271. [ Links ]
]]>Barnard, D. R. 1999. Repellency of essential oils to mosquitoes (Diptera: Culicidae). J. Med. Entomol., 36(5): 625-629. [ Links ]
Bowers, W. S., B. Sener, P. H. Evans, F. Bingol & I. Erdogan. 1995. Activity of Turkish medicinal plants against mosquitoes Aedes aegypti and Anopheles gambiae. Insect Sci. Appl., 16(3-4): 339-342. [ Links ]
Curtis, C. F., J. D. Lines, L. Baolin & A. Renz. 1990. Natural and synthetic repellent. In: Curtís C. F. (Ed.). Appropiate technology in vector control. CRC press. Boca Ratón, Florida, USA. p75-92. [ Links ]
Espinosa, P. J. 1985. Búsqueda de plantas del área del lago de Texcoco con actividad tóxica contra mosquito casero Culex quinquefasciatus. Tesis de licenciatura. Parasitología Agrícola, UACH. Chapingo, México. 68p. [ Links ]
Fradin, M. S. & J. F. Day. 2002. Comparative efficacy of insect repellents against mosquito bites. New England J. Med., 347(1):13-18. [ Links ]
]]>Grainge, M. & S. Ahmed. 1988. Handbook of plants with pest-control properties. John Wiley & Sons. New York, USA. 470p. [ Links ]
Ho, S. H., P. M. Goh & K. M. Lee. 1992. Evaluation of two pine oil-based formulations of Kitz against various life stages of Aedes aegypti. Inter. Pest Cont., 34(6): 180-181. [ Links ]
Jantan, I. & Z. Mohd. 1999. Development of environment-friendly insect repellents from the leaf oils of selected Malaysian plants. Asian Rev. Biodiv. Envir. Conserv., (1):1-7. [ Links ]
Kumul, D. E. 1983. Búsqueda de plantas silvestres del estado de Veracruz con propiedades toxicas contra gusano cogollero del maíz Spodoptera frugiperda y mosquito casero Culex quinquefasciatus. Tesis de licenciatura. Parasitología Agrícola, UACH. Chapingo, México. 76p. [ Links ]
Latha, C. & A. Joseph. 1999. Evaluation of the larvicidal potential of Glycosmis pantaphylla against four important mosquito species of Kerala, India. Inter. Pest Cont., 48(3):50-1. [ Links ]
]]>Martínez, M. 1979. Catálogo de nombres vulgares y científicos de plantas mexicanas. Fondo de Cultura Económica. México, D.F. 1247pp. [ Links ]
Pacheco, C. J. J. 1983. Búsqueda de sustancias toxicas en plantas medicinales, contra larvas de mosquito casero: Culex quinquefasciatus. Tesis de licenciatura. Parasitología Agrícola, UACH. Chapingo, México. 63p. [ Links ]
Pushpalatha, E. & J. Muthukrishnan. 1995. Larvicidal activity of a few plant extracts against Culex quinquefasciatus and Anopheles stephensi. Indian J. Malariology, 32 (1): 14-23. [ Links ]
Raymond, M. 1985. Presentation d' un programme "Basic" d' analyse log-probit pour microordinater. Cah. ORSTOM. Serie Entom. Méd. Paras., 28:117-121. [ Links ]
Rivera, R. I. 1992. Toxicidad de extractos acuosos vegetales en larvas de Aedes aegypti (Diptera: Culicidae). Tesis de licenciatura. Parasitología Agrícola, UACH. Chapingo, México. 59p. [ Links ]
]]>Rodríguez, H. C. 1998. Repelentes naturales contra mosquitos. Seminario-Taller Participación ciudadana y alternativas al uso del DDT para el control del paludismo. Puerto escondido, Oaxaca, México. pp. 54-64. [ Links ]
----------. 2000. Plantas contra plagas; potencial práctico de ajo, anona, nim, chile y tabaco. Editado por la Red de Acción sobre Plaguicidas y Alternativas en México. Texcoco, Estado de México. 133p. [ Links ]
----------. 2001. El uso de insecticidas vegetales en el manejo de plagas en la floricultura. 5º Seminario Internacional de Flor de Corte. Ixtapan de la Sal, Estado de México, México. pp.1-8. [ Links ]
Rodríguez, H. C. & A. Lagunes T. 1987. Actividad tóxica de Cestrum spp. (Solanaceae) en larvas del mosquito casero Culex quinquefasciatus Say (Diptera: Culicidae). Agrociencia (México), 67:147-159. [ Links ]
----------. 1989. Combate de los mosquitos Aedes aegypti y Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) con sustancias acuosas vegetales. 1er. Encuentro Estatal sobre Entomología Medica y Veterinaria. Cuernavaca, Morelos. pp.133-142. [ Links ]
]]>Rodríguez, H. C. & D. Nieto A. 1997. Anonáceas con propiedades insecticidas. In. Anonáceas, producâo e mercado (pinha, graviola, atemóia e cherimólia). A. Reboucas Sâo Jose, I. Vilas Boas S., O. Magalhaes M. e T.N. Hojo R. (Eds). Bahia, Brasil. Pp.229-239. [ Links ]
Rodríguez, H. C., A. Lagunes T., R. Domínguez R. & L. Bermúdez V. 1982. Búsqueda de plantas nativas del estado de México con propiedades tóxicas contra gusano cogollero, Spodoptera frugiperda J. E. Smith, y mosquito casero Culex quinquefasciatus Say. Rev. Chapingo, 7(37-38):35-39. [ Links ]
Sagar, S. K. & S. S. Sehgal. 1997. Toxicity of neem seed coat extract against mosquitoes. Indian J. Entomol., 59 (2):215-223. [ Links ]
Salcedo, B. A. 1985. Búsqueda de plantas nativas de Morelos con propiedades tóxicas contra gusano cogollero Spodoptera frugiperda, y mosquito casero Culex quinquefasciatus. Tesis de licenciatura. Universidad Autónoma de Morelos. Cuernavaca, Morelos, México. 85p. [ Links ]
Sánchez, L. G. 1987. Toxicidad de extractos acuosos de plantas ornamentales del área de influencia de Chapingo, Edo. de México, sobre larvas del mosquito de la fiebre amarilla Aedes aegypti. Tesis de licenciatura. Parasitología Agrícola, UACH. Chapingo, México. 65p. [ Links ]
]]>Sánchez, M. C., N. González & E. González. 1997. Efecto larvicida de extractos acuosos vegetales sobre Aedes aegypti. Manejo Integrado de Plagas, 45: 30- 33. [ Links ]
Subramonia, T. T. & K. Kathiresan. 1992. Mosquito larvicidal activity of manglove plant extracts against Aedes aegypti. Intern. Pest Cont., 34(4):116-119. [ Links ]
----------. 1993. Mosquito larvicidal activity of seaweed extracts against Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus. Intern. Pest Cont., 45(4):94-95. [ Links ]
Tawatsin, A., S. D. Wratten, S. R. Roderic, U. Thavara & Y. Techadamrongsin. 2001. Repellency of volatile oils from plants against three mosquito vectors. J. Vector Ecol. 26(1):76-82. [ Links ]
]]>