Introducción
El cierre de heridas cutáneas está compuesto por una compleja organización de los tejidos, que incluyen la hemorragia, inflamación, re-epiteliziación, formación de tejido de granulación y las fases finales de la reparación y la remodelación (Kim et al., 2009). Esta compleja organización incluye la coordinación de docenas de tipos de células y proteínas de la matriz, que son importantes para controlar las etapas del proceso de la reparación. Estudios previos han demostrado que los factores de crecimiento endógenos, tales como factores de crecimiento de los fibroblastos (FGF) (Ornitz y Itoh, 2001),factores de crecimiento derivados de las plaquetas (PDGF) (Heldin y Westermark, 1999), factores de crecimiento β (TGF-β)(Werner y Grose, 2003) y factores de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) (Lauer et al., 2000), son polipéptidos reguladores del proceso de curación, que están relacionados con la liberación de macrófagos, fibroblastos y queratinocitos en el sitio de la lesión que participan en la regulación de la reepitelización, formación de tejido de granulación, síntesis de colágeno y neovascularización (Kim et al., 2009).
El ozono (O3) ha sido ampliamente reconocido como uno de los mejores bactericidas y antifúngicos (Al-Dalain et al., 2001; Valacchi et al., 2005; Elvis y Ekta, 2011) y se ha utilizado empíricamente como un agente terapéutico en el tratamiento de heridas, tales como úlceras tróficas, úlceras isquémicas y en heridas de diabéticos (Martínez-Sánchez et al., 2005; De Monte et al., 2005; Elvis y Ekta, 2011). Los efectos beneficiosos del O3 en la cicatrización de heridas se ha atribuido a la disminución de la carga bacteriana en la herida infectada y al aumento de la tensión de oxígeno por la exposición O3 en el área de la herida (Gajendrareddy et al., 2005; Lim et al., 2006).
El ozono es un fuerte agente oxidante y posee propiedades bactericidas; éste puede actuar como un inductor de citosinas (Bocci et al., 1993), tales como interferón (IFN-γ y β), factor de necrosis tumoral (FNT-α) interleucinas (IL)1β, 2, 4, 6, 8 y 10, factor estimulador de colonia granulocito-macrófago (GM-CSF) y el factor transformador del crecimiento (TGF- β1) (Bocci et al., 1994).
Hoy en día, es práctico y rentable utilizar el O3 en combinación con aceites vegetales, como es el caso del aceite de oliva, obteniendo aceite de oliva ozonizado. Los aceites ozonizados contienen la molécula de O3 estabilizada, como un ozónido entre los enlaces dobles de un ácido graso monoinsaturado como el ácido oleico, que es ideal para el uso tópico del O3 en heridas cutáneas crónicas e infectadas (Valacchi et al., 2005).
El aceite ozonizado se ha utilizado tópicamente para el tratamiento de heridas crónicas, pero ha habido pocos estudios relacionados con los efectos terapéuticos del aceite de oliva ozonizado en la cicatrización aguda (Kim et al., 2009).
Durante la última década, han sido objeto de publicación diversos efectos beneficiosos del pre-condicionamiento oxidativo con Ozono (POO) (Ajamieh et al., 2004; Borrego et al., 2004), el cual, aplicado con un criterio adecuado, se define como una adaptación ante un estrés oxidativo agudo o pre-condicionamiento oxidativo (Bocci, 2006; Zamora et al., 2007; Zamora et al., 2008). También se ha demostrado que la ozonoterapia restablece el balance redox intracelular; incrementando la actividad de las enzimas antioxidantes endógenas, y de esta forma disminuye el estrés oxidativo generado en cualquier proceso patológico (Borrego et al., 2004; Zamora et al., 2005).
Por lo cual, el objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de los aceites vegetales ozonizados sobre la cicatrización en heridas cutáneas agudas en bovinos de engorda.
Material y Métodos
Bovinos de engorda
El presente trabajo se realizó con diez bovinos machos enteros, mestizos, con un peso promedio de 405.85 kilogramos y con una edad promedio de 15 meses.
Ozonización del aceite de oliva
Se empleó aceite de oliva extra virgen comercial, el cual contiene 78.5 % de grasas monoinsaturados (omega 9), 7.1 % de grasas poli instaurados (Omega 3 y 6) y 14% de grasas saturadas. Se ozonizaron 100 ml del aceite de oliva, con un ozonizador de aceite de dos potencias (OzonoBio3, Modelo AO-5); se burbujeó durante 1 h una concentración de ozono de 50 mg/ml, el cual estaba conectado a un generador de oxígeno (Respironics Everflo, Philips) generando un flujo de oxígeno de 2 L/min.
Para dicho estudio se empleó el aceite de oliva ozonizado antes mencionado, además de un aceite de girasol ozonizado comercial OLEOZON®.
Determinación del índice de peróxidos
El índice de peróxido se determinó empleado la tecina reportada por Farmacopedia Británica (British Parmacopeia, 2000). Se evaluó el índice de peróxido para el aceite de oliva ozonizado y OLEOZON®. Para su realización se colocaron 5g de la muestra en un matraz con 30 ml de una solución ácido acético-cloroformo 2:3. La muestra se agitó hasta disolverse totalmente y se le adicionó 0.5 ml de una solución saturada de yoduro de potasio y se dejó reposar por un minuto. Al finalizar el tiempo se le adicionaron 30 ml de agua destilada y procedió a titularse con tiosulfato de sodio 0.01N hasta obtener una coloración ligeramente amarilla. Después de obtener dicha coloración, se le adicionó 0.5 ml de una solución indicadora de almidón y se continuó titulando hasta la aparición de un color azul. Bajo las mismas condiciones se realizó la titulación de un blanco.
El índice de peróxido se expresó en mili equivalentes de peróxido en un kg de aceite y se calculó empleando la siguiente formula.
donde:
I.P |
- Índice de Peróxido |
A |
- Mililitros de solución de tiosulfato de sodio gastados en la titulación de la muestra. A1- ml de solución de tiosulfato de sodio gastados en la titulación del blanco. |
N |
- Normalidad de la solución de tiosulfato de sodio. |
M |
- Masa de la muestra en gramos. |
El índice de peróxido encontrando para el aceite ozonizado de oliva, estuvo en un rango de 400 to 490 mmol/kg y el aceite ozonizado comercial, OLEOZON® en un rango de 500 to 800 mmol/kg.
Preparación de los animales experimentales
Se realizó un examen físico general a cada uno de los animales experimentales, en el cual no se encontró ninguna anormalidad; enseguida se preparó la tabla del cuello derecha para la intervención quirúrgica. Los animales fueron anestesiados localmente con lidocaína al 2%. A cada paciente se le hicieron tres incisiones quirúrgicas circulares en la tabla del cuello, con un diámetro de 2 cm y una profundidad de 3 mm.
La intervención se realizó con los animales en pie, razón por la que no se utilizaron tranquilizantes para evitar decúbitos accidentales durante la manipulación de los mismos.
Tratamiento experimentales
Las heridas de los bovinos en engorda fueron monitoreadas cada 24 h. Cada una de las heridas realizadas recibió un tratamiento diferente, dos de ellas se trataron de manera tópica con los aceites ozonizados; para el tratamiento 1 (T1) se usó el aceite de oliva ozonizado y para el tratamiento 2 (T2) se usó el aceite ozonizado comercial OLEOZON®. Una de las heridas (control negativo) no recibió ningún tratamiento.
La duración del tratamiento fue de quince días, el cual consistió en la limpieza diaria de cada una de las heridas y la aplicación tópica de estos aceites cada veinticuatro horas.
Resultados y Discusión
En la Tabla 1 se observan lo signos más relevantes de la cicatrización respecto al tiempo y tratamiento.
Se observó de manera general que la cicatrización de heridas fue más rápida cuando se empleó el aceite de oliva ozonizado, esto puede atribuirse a las propiedades germicidas, de restauración de tejido e inmune-estimulantes de los aceites ozonizados (Martínez-Sánchez et al., 2012). Además, cuando se emplearon los aceites ozonizados se observaron que las heridas se encontraban más humectadas respecto al control y se sabe que las heridas en un entorno húmedo, tiene una mayor epitelización, lo cual influye en el tiempo de recuperación (Bigbie et al., 1989). El mecanismo de acción exacto sobre la actividad biológica de los aceites ozonizados es aún desconocido; sin embargo, existen varias hipótesis que intentan explicarlo. Una de ellas plantea que es probable que los triozonidos estables al entrar en contacto con los exudados de las heridas, que se encuentran a una temperatura de aproximada de 37ºC, provoca que se descompongan y generen ozono, el cual forma peróxido de hidrógeno y lipoperóxidos, que son los responsables de los efectos regenerativos y desinfectantes (Bocci, 2005; Martínez-Sánchez, et al., 2012).
También se plantea que la liberación lenta de ozono en las heridas favorece el proceso de cicatrización, no sólo por la desinfección local, sino también por favorecer a nivel local la liberación de citosinas con efectos reparadores (Valacchi et al., 2005; Valacchi et al., 2011).
Conclusión
Los aceites vegetales ozonizados aceleraron el proceso de cicatrización de las heridas cutáneas de los bovinos en engorda. Las heridas tratadas con aceite de oliva ozonizado, mostraron mayor retracción de la epidermis, con respecto a los controles negativos y a los tratados con el aceite comercial. Las heridas tratadas con el aceite ozonizado comercial (OLEOZON®), tuvieron una cicatrización más tardada, con respecto a las tratadas con aceite de oliva ozonizado.