Material vegetal

Los embriones se obtuvieron de frutos maduros de A. aculeata, cosechados entre los meses de febrero y marzo del 2014. Los frutos se recolectaron en 10 individuos de una población nativa, próxima a la ciudad de San Lorenzo, Departamento Central (25° 21' 54.80" S y 57° 30' 8.77" O) en Paraguay. De cada planta madre se colectaron 20 frutos por racimo haciendo un total de 100 frutos por individuo.

Las semillas se mezclaron y se secaron a temperatura ambiente durante 20 días, facilitando la eliminación del pericarpio. Una vez eliminado, se procedió a la ruptura del endocarpio con la ayuda de una prensa manual y se obtuvieron las almendras (semillas) que contienen los embriones cigóticos. Las almendras con síntomas de infecciones fúngicas, bacterianas o con ataques de insectos se eliminaron.

Estudio morfoanatómico

Caracterización morfoanatómica del embrión de A. aculeata

El embrión de A. aculeata es pequeño de color amarillo verdoso con forma lanceolada. Presenta una región proximal, situada de forma periférica respecto a la semilla, que corresponde al peciolo del cotiledón; y una región distal, en forma de protuberancia, en el limbo o haustorio cotiledonar. La estructura del embrión tiene el patrón general observado en otras especies de palmas, con una protuberancia y las invaginaciones pronunciadas del haustorio. La Figura 1 muestra el corte longitudinal del embrión de A. aculeata, en el cual se distinguen tres regiones: limbo cotiledonar, constricción y peciolo cotiledonar.

Figura 1 Corte longitudinal del embrión de Acrocomia aculeata. Se observan el limbo cotiledonar (lc), la zona de constricción (c) y el peciolo cotiledonar (pc). 

El peciolo cotiledonar tiene longitud promedio de 4.5 mm y diámetro de 1.5 mm; está formado por una protodermis externa, un meristema fundamental y haces procambiales. El eje embrionario se inserta en una cavidad en el tercio proximal del peciolo cotiledonar y está alineado de forma oblicua respecto al resto del embrión. En la Figura 2 se observan los tejidos meristemático primario, meristemo fundamental y procambium.

Figura 2 Tejidos meristemático primario (MP), meristemo fundamental (MF) y procambium (Prc) en el corte longitudinal del embrión de Acrocomia aculeata. 

En los cortes transversales y longitudinales de los embriones se observó la plúmula bien diferenciada, situada en ángulo con respecto al eje longitudinal del embrión. En forma opuesta se encuentra la zona meristemática, donde se desarrollará la radícula. La plúmula consta de dos primordios foliares y un ápice, con el esbozo de un tercer primordio (Figura 3). Todas estas estructuras están encerradas por el coleóptilo.

Figura 3 Corte longitudinal de un embrión de Acrocomia aculeata, donde se observan la plúmula (PL) y zona meristemática radical (ZM). Dentro de la plúmula se encuentran el ápice (A) y los primordios foliares (Pf). 

Externamente, el embrión presenta una hendidura longitudinal o ventana cotiledonar, al nivel de la plántula; la capa de células protodérmicas que recubre dicha ventana continúa con la del coleóptilo. En la Figura 4 se observa el corte transversal de un embrión, mostrando la ventana cotiledonar que permitirá la emergencia de la plántula (radícula y plúmula).

Figura 4 Corte transversal de embrión de Acrocomia aculeata, al nivel del peciolo cotiledonario, mostrando la ventana cotiledonar (vc) que permitirá la emergencia de la plántula (PL). 

Según ^{Cabello (2008)}, la fase de plántula inicia con la reactivación del embrión y su emergencia de la semilla, mediante la emisión de la radícula y de la plúmula. Cuando la germinación se produce, el embrión se elonga desprendiendo el opérculo, del cual emerge al exterior la vaina cotiledonaria o lígula, a través del poro germinativo. Posteriormente, la lígula se engloba, se hiende y surgen la radícula y la plúmula. A partir del limbo cotiledonar del embrión se desarrolla el haustorio, que ocupará la cavidad interna de la semilla. El haustorio presenta una superficie invaginada, con una epidermis formada por células rectangulares en sentido radial, con citoplasma muy denso y núcleos prominentes. La capa subepidérmica, monoestratificada, presenta células de forma y tamaño regulares. Hacia el interior, las células parenquimáticas son irregulares y aumentan gradualmente de tamaño, dejando grandes espacios intercelulares.

En las palmas, según ^{Tomlinson (1990)}, el embrión es siempre diminuto en relación con el tamaño total de la semilla y del endosperma. El embrión de A. aculeata no es la excepción y las observaciones realizadas en este trabajo confirman las afirmaciones de ^{Cabello (2008)}, quien indica que el embrión de las palmas está desarrollado incompletamente. Esto concuerda con lo afirmado por ^{Nikolaeva (1969)}, quien señala que los individuos del grupo Arecaceae presentan latencia endógena morfológica, ya que poseen un embrión que no ha alcanzado su desarrollo morfológico en el tiempo de maduración de la semilla.

En general, el embrión de A. aculeata es semejante al de otras palmas del mismo grupo, en cuanto a forma e inclusión en el endosperma. La disposición del endosperma de Cocos nucifera L. y Jubebaea chilensis (Molina) es similar, al igual que la ubicación del embrión bajo el poro germinativo (^{Heathcock & Chapman, 1983}; ^{Sugimura & Murakami, 1990}) en su forma cilíndrica. La mayor parte del tejido del embrión corresponde al cotiledón con la presencia de una pequeña constricción que lo divide en dos partes. Lo mismo ocurre con el embrión de Elaeis guineensis fo. dura Becc., que también es cilíndrico-cónico (^{Quero, 1992}). El embrión de Acrocomia mexicana Karwinky ex Mart. es opuesto a uno de los polos, en tanto que Bactris mexicana Martius, otra especie del grupo de las Arecaceae, puede ser basal o dorsal (^{Quero, 1992}).

Los embriones de A. aculeata constan de protoderma, plúmula y hebras procambiales bien definidas (^{Moura et al., 2008}). El protoderma presenta invaginaciones y, por debajo, células del meristema fundamental. Los granos de almidón se acumulan en las células del meristema fundamental bajo intensa división (Moura et al., 2008), especialmente en las que tienen menos citoplasma denso. En el caso de A. aculeata, una ventana cotiledonar aparece ubicada en sentido longitudinal del embrión, la cual simula un ojal en corte tangencial, similar a la de E. guineensis (^{Vallade, 1966a}). Acrocomia aculeata, al igual que E. guineensis fo. dura y J. chilensis, presenta la plúmula del embrión en posición lateral y se encuentra bien diferenciada en dos hojas y un ápice, que porta sobre sus flancos el esbozo de la tercera hoja. Esta plúmula se encuentra encerrada completamente en un repliegue del cotiledón, cuyos labios son completamente visibles al nivel de la abertura cotiledonar. La raíz no se encuentra individualizada; en el parénquima fundamental, existe una región de aptitud radicular que participará en la formación de la raíz, al momento de la germinación (^{Vallade, 1966a}).

La epidermis de las estructuras anatómicas de A. aculeata presenta una capa compuesta de células cúbicas alargadas con paredes delgadas, presentando células meristemáticas de apariencia globosa en la región externa del mesófilo, intercaladas con haces de pilas alargadas radialmente. La región media del mesófilo se compone predominantemente de células parenquimatosas (^{Reis, Mercadante-Simões, & Ribeiro, 2012}).

Algunas células de la parte interior de los embriones de A. aculeata son más grandes que las células de la periferia con citoplasma denso, por lo general, las divisiones celulares se producen en la región distal tanto en la periferia como en el interior. Esas divisiones celulares se producen principalmente en el meristemo fundamental, cerca de las hebras procambiales. En estos tejidos se concentran grupos de células que presentan pared con engrosamiento aparente y aspecto mucilaginoso. El engrosamiento aparente puede ser el resultado de la pared celular desintegrada, almacenamiento de pectina y formación de mucílago (^{Moura et al., 2008}).