Tratamientos y diseño experimental.

Se evaluaron seis tratamientos: dos tipos de cosecha y tres variedades de Jamaica (factorial 2 x 3). Los tipos de cosecha fueron la cosecha continua con seis cortes, con intervalos de siete días, con el primero a los 25 días del inicio de floración y la cosecha única al final del ciclo. Las variedades de Jamaica utilizadas fueron: China; UAN6, y UAN8. Se utilizó un diseño experimental de bloques completos al azar con cinco repeticiones.

El experimento se estableció bajo condiciones de temporal, la siembra de la semilla se hizo a chorrillo y posteriormente se realizó el raleo a una distancia de 1 metro entre planta y planta. La separación entre surcos fue de 1 metro, para una densidad aproximada de 10 mil plantas por hectárea. La unidad experimental fue de tres surcos de 5 metros cada uno y el surco central se tomó como parcela útil.

Etiquetado de Flor.

Una vez que inició la floración se colocó una etiqueta por cada flor que fue apareciendo para establecer la fecha de corte tanto para cosecha continua (CH) como para cosecha única (UH).

Variables de rendimiento.

Numero de cáliz y longitud de cáliz. En cada tratamiento se contaron los cálices cosechados, por planta y por corte para llevar un control; posteriormente se les retiró la cápsula u ovario a los cálices para medir su longitud con un vernier digital marca Mitutoyo con escala de 130 mm y sensibilidad de 0.01 mm.

Peso fresco de cáliz y Peso seco de cáliz. A los cálices recién cosechados, de cada tratamiento, se les retiro la capsula y fueron pesados en una balanza digital de la marca: SCIENTECH modelo: ZSA210, posteriormente se almacenaron en bolsas de papel, para ser deshidratados en un horno de secado marca: Lumistel, modelo HTP-42; a 60 °C durante 24 horas.

Análisis químicos.

Acidez titulable. Se utilizaron 3 gramos de cálices frescos, depositados en 50 mL de agua destilada puesta a ebullición por tres minutos; a la extracción obtenida se le midió la acidez con NaOH al 0.08 N Valorado. En cada muestra se agregaron tres gotas de fenolftaleína como indicador y los resultados se reportaron en meq/100 g de muestra fresca, con una lectura de pH específica de 8.3; la acidez titulable se estimó con base en la ecuación:

Donde: TA = Acidez Titulable (meq/100 g muestra fresca).

V_NaOH= Normalidad del _NaOH (0.08 meq/mL).

W= Peso de la muestra (g).

pH. Al extracto de jamaica, obtenido por cada muestra, se le midió el pH con un potenciómetro marca Corning modelo 350, el cual se calibró con soluciones buffers de pH 7 y 4.

Solidos Solubles Totales (TSS) . Se utilizó un refractómetro digital marca Abbe monocular TPM-2WAJ. Para la extracción se seleccionaron seis cálices por tratamiento, se partieron por mitad los cálices y molieron para sacar la muestra a la que se le determinó el porciento de solidos solubles.

Análisis Microbiológicos.

Los indicadores microbiológicos utilizados fueron coliformes totales, mesófilos aerobios, mohos y levaduras, los cuales, se reportaron como CFU/g de cáliz deshidratado. Antes de realizar los análisis, los cálices fueron almacenados en bolsas de celofán, durante cuatro meses, con el propósito de determinar las condiciones microbiológicas después de ese tiempo. Estos análisis se realizaron con base a las normas oficiales: NOM-SSA1-1994, bienes y servicios. Preparación y dilución de muestras de alimentos para su análisis microbiológico; y la norma mexicana: ^{NMX-FF-115-SCFI-2010}, productos agrícolas destinados para consumo humano - flor (cáliz) de jamaica (Hibiscus sabdariffa L.)- Especificaciones y métodos de prueba.

Coliformes totales. Se usó el método del número más probable con base en las normas: NOM-109-SSA1-1994; NOM-110-SSA1-1994; NOM-113-SSA1-1994. Estas normas oficiales establecen los procedimientos para la toma, el manejo y transporte de las muestras, la preparación y dilución de las muestras, así como el método para la cuenta de coliformes totales en placa.

Mesófilos aerobios. Se identificaron siguiendo la Norma oficial mexicana NOM-092-SSA1-1994, bienes y servicios. Método para la cuenta de bacterias aerobias en placa.

Mohos y levaduras. La determinación de los mohos y levaduras se realizaron mediante lecturas a los 3, 4 y 5 días, como lo dice la norma oficial mexicana NOM-111-SSA1-1994.

Variables de rendimiento.

El análisis de varianza de las características de rendimiento, número de cáliz, peso fresco de cáliz, longitud de cáliz y peso seco de cáliz, detectó diferencias significativas entre variedades. En la interacción tipo de cosecha por variedad, solo la variable longitud de cáliz fue significativa. No hubo diferencias significativas, en ninguna de las variables de rendimiento, al comparar el tipo de cosecha (Tabla 1).

Numero de cáliz y longitud de cáliz. Al comparar el método de cosecha sobre la longitud de cáliz se observó que no hubo diferencias significativas, mientras en la comparación de las variedades, la UAN8 es la que tiene mayor longitud de cáliz (Tabla 2). Según ^{Elsadig et al. (2013)} el número de frutos por rama/planta, así como el número de cápsulas del tallo principal y el peso de frutos son características importantes que influyen en el rendimiento de cálices por planta.

Peso fresco de cáliz y peso seco de cáliz. No hubo diferencias significativas entre los métodos de cosecha. Al comparar las tres variedades de jamaica, en la variable peso fresco de cálices y peso seco de cálices, la variedad UAN8 fue diferente a la UAN6 y China. El rendimiento en peso seco, promedio de las tres variedades, para la cosecha total, fue de 1130 kg ha^-1, mientras que en la cosecha continua se tuvo un rendimiento de 1160 kg ha^-1 (Tabla 2). ^{Castro (2004)} evaluó la productividad y calidad de los cálices de jamaica, en cuatro fechas de plantación (octubre 18, noviembre 15, diciembre 18 y enero 15), con dos métodos de cosecha (cosecha final única y en rangos de 15 días, con el primer corte a los 138 días después de la plantación). Los rendimientos obtenidos fueron diferentes para las fechas de siembra, pero similares entre los métodos de cosecha, esto último es coincidente con lo obtenido en este estudio.

La variedad UAN8 obtuvo el mejor rendimiento con 1,410 kg ha^-1, en comparación con la variedad UAN6 y China, con 900 kg ha^-1 y 1,120 kg ha^-1, respectivamente (Tabla 2). Estos rendimientos son elevados si se comparan con el rendimiento promedio nacional que es de 291 kg ha^-1 (^{FAO, 2004}). Sin embargo, el potencial de rendimiento es aún mayor, ya que se han reportado rendimientos superiores a 1,500 kg ha^-1 (^{Castro et al., 2004}). Es conocido que el rendimiento de los cultivos está en función de varios factores (clima, suelo, variedad, manejo) como lo demuestran los resultados reportados en jamaica sobre densidades de siembra (^{Terán & Soto, 2004}); fertilización (^{Ruíz-González & Victorino-Ramírez, 2015}); variedades (^{Ariza-Flores et al., 2014}); factores que deben ser evaluados en las regiones productoras para optimizar el rendimiento y calidad de los cálices de jamaica.

Variables químicas.

Las propiedades químicas evaluadas fueron estadísticamente significativas entre el tipo de cosecha, las variedades, así como la interacción cosecha por variedad, con excepción de los valores de acidez titulable en el tipo de cosecha. Para las variables microbiológicas, en el tipo de cosecha, hubo diferencias significativas para coliformes totales y mohos. No hubo diferencias entre variedades, sin embargo, si se presentaron diferencias para mesófilos aeróbicos en la interacción tipo de cosecha por variedad (Tabla 1).

Para el tipo de cosecha las variables de pH y sólidos solubles totales fueron diferentes significativamente, el resultado de la acidez titulable fue no significativo. Hubo diferencias significativas de las variables evaluadas en las tres variedades (Tabla 1).

La variedad que resultó con mayor acidez titulable fue la UAN8 con 40.70 meq/100 g de muestra fresca, mientras las otras dos variedades resultaron con una acidez menor sin diferencias significativas entre ellas (Tabla 2).

En el caso de los sólidos solubles, la variedad con mayor porcentaje resultó ser la China con 11.52, mientras las otras variedades obtuvieron valores menores sin diferencias significativas entre ellas (Tabla 3).

pH. Hubo diferencias significativas en los resultados de pH de la comparación de métodos de cosecha, la cosecha continua obtuvo el pH más bajo con 2.55 en comparación con el valor de cosecha única con 2.76. De las tres variedades, la variedad UAN6 tuvo el pH más bajo (2.55) y diferente de la variedad China (2.70) y la variedad UAN8 (2.72), las cuales fueron similares entre sí. Los resultados reportados del pH, en extractos de jamaica provenientes de distintas variedades varían entre el rango de 2.29 a 2.81 (^{Galicia-Flores et al., 2008}; ^{Abdallah et al., 2011}; ^{Ramírez-Cortéz et al., 2011}; ^{Salinas-Moreno et al., 2012}). Aunque se han reportado valores de pH mayores (3.3 a 3.4) de extractos acuosos de jamaica (González-Palomares et al., 2009), es deseable que los valores sean menores de 3.0 (^{Salinas-Moreno et al., 2012}).

Acidez titulable. No hubo diferencias entre tipo de cosecha, para esta variable. Sin embargo, entre variedades esta característica fue diferente. La variedad UAN8 tuvo la mayor acidez titulable con 40.7 meq/100 g. Valores en unidades diferentes fueron reportados por ^{Abdallah et al. (2011)} en variedades de jamaica roja y blanca, con 9 y 11 mg/100 g, respectivamente. Otros estudios han reportado valores de acidez titulable, como porciento de ácido cítrico, entre el rango de 13.9 a 23.7 (^{Salinas-Moreno et al., 2012}). Para poder equiparar estos valores, las evaluaciones se tendrían que haber realizado en condiciones similares de variedades y técnicas de análisis, además de reportarlas en unidades iguales.

La acidez de los extractos está relacionada con la cantidad de ácidos presentes, y en jamaica se han encontrado: ácido hibiscus, ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido esteárico, ácido benzoico, ácido clorogénico, ácido 4-hidroxibenzoico, ácido salicílico, ácido vanillico y ácido protocatecuico, entre otros (^{Ariza-Flores et al., 2014}; ^{Ramírez-Rodríguez et al., 2011}).

Solidos Solubles totales. El análisis de varianza detectó diferencias significativas en el contenido de sólidos solubles totales (°Brix), entre tipo de cosecha y entre variedades. La cosecha continua tuvo el mayor valor. Con respecto a las variedades, la China fue la de mayor contenido. Estos valores estuvieron en el rango de 7.38 a 11.52 %, los cuales fueron superiores a los encontrados por ^{Abdallah et al. (2011)} en una variedad de jamaica blanca (5.5) y una variedad de jamaica roja (5.0).

Análisis microbiológicos.

En cuanto a las variables microbiológicas (coliformes totales, mesófilos aerobios, mohos y levaduras) al hacer la comparación de variedades no hubo diferencia significativas entre ellas; Mientras en comparación de tipos de cosecha se observó diferencias significativas en coliformes totales y mohos, con mayor contaminación en la cosecha única (Tabla 4). Los factores que favorecen el crecimiento de mohos son la humedad, el tipo de sustrato y la temperatura. Estas condiciones son también las que propician la producción de toxinas en la mayoría de los productos agrícolas (^{Ciegler, 1978}; ^{Tola & Kebede, 2016}).

Los cálices de jamaica deshidratados al igual que otros alimentos son susceptibles del deterioro por microorganismos, principalmente hongos que pueden reducir su calidad en términos de color, sabor o nutrición, además pueden esporular y producir micotoxinas que afectan la salud humana (^{Adebayo-Tayo & Samuel, 2009}).

^{Bobadilla-Carrillo (2016)} señala que en el cultivo de jamaica la mayor carga microbiana se presenta cuando el cáliz y fruto aún no han sido separados. Además, encontró que después del lavado de los cálices, se incrementó el número de microorganismos. Menciona que la maduración diferente de los cálices puede influir en la contaminación de los mismos.

Los principales hongos productores de micotoxinas son el género Aspergillus, Fusarium y Penicillium, aunque el potencial para la producción de micotoxinas varía considerablemente entre especies del mismo género (^{Frisvad et al., 2006}). Uno de los problemas de la cadena productiva de jamaica se relaciona con el manejo deficiente de los cálices en postcosecha, el cual puede involucrar un alto contenido de humedad, además del poco cuidado fitosanitario. Resultados de un estudio en hongos asociados a cálices de jamaicas identificaron 16 géneros de hongos, de los cuales los más comunes fueron Aspergillus, Alternaria, Nodulusporium, Chaetomium y Thielaria (^{Ruíz-Ramírez et al., 2015}).

Coliformes totales. Hubo diferencias significativas en el número de coliformes totales entre el método de cosecha. En la cosecha continua existe menor contaminación. Esto se debe a que los cálices de la cosecha continua permanecieron menos tiempo a la exposición de contaminantes en el ambiente. La norma oficial mexicana ^{NOM-112-SSA1-1994} establece como límite la ausencia de coliformes totales, y aunque ningún tratamiento evaluado cumplió esta disposición, es de resaltar, mayor contaminación en el método tradicional de cosecha (Tabla 4). Similares resultados fueron encontrados por Cid-Ortega et al. (2009), quienes reportaron la presencia de coliformes totales en extractos de flor de Jamaica.

Mesófilos aerobios. El bajo pH reduce al mínimo el ataque bacteriano (^{Fasoyiro et al., 2005}), y controla el crecimiento de microorganismos aerobios mesófilos (^{D’Heureux-Calix & Badrie, 2004}). En los resultados se observa que para mesófilos aerobios no hubo diferencias significativas ni en variedades ni en tipo de cosecha. Las CFU/g encontradas de estos microorganismos (Tabla 4), no superaron el limite crítico establecido en la norma mexicana la cual es de 100 CFU/g. En el estudio de Cid-Ortega et al. (2009) se reportaron 130 CFU/g de bacterias mesófilas aerobias, las cuales sobrepasaron los límites de la norma mexicana ya señalada.

Mohos y levaduras. Se encontró mayor número de mohos en la cosecha única en comparación con la cosecha continua. Los mohos crecen mejor en condiciones cálidas y húmedas, en la cosecha única los cálices están expuestos más tiempo a tales condiciones. La cantidad de mohos entre variedades no fueron diferentes. Con relación a las levaduras no hubo diferencias entre tratamientos (Tabla 4). A pesar de lo anterior, los valores de las CFU/g para hongos y levaduras están por encima del límite crítico establecido en la norma mexicana NOM-111-SSA1-1994, que es de 10 CFU/g máximo. Estos resultados coinciden con los obtenidos por Cid-Ortega et al. (2009) quienes reportaron valores altos de estos microorganismos (5,800 CFU/g).

La contaminación de los cálices de flor de jamaica se atribuye al deficiente manejo postcosecha del producto, entre los que se pueden mencionar el secado de los cálices al aire libre, con el consecuente daño de insectos, polvo y excretas de animales.