Localización y características de los rebaños

Se realizó un estudio transversal seleccionándose 128 rebaños localizados en el noreste de México, en los estados de Coahuila, Nuevo León y Tamaulipas. El sistema de manejo de los rebaños en su mayoría era semi-extensivo. En general, los animales mostraban complicaciones de tipo nutricional, reproductivo y sanitario.

Número de rebaños y animales muestreados

Un total de 768 animales fueron muestreados a partir de 71 rebaños caprinos, 32 ovinos y 25 mixtos (n=128 rebaños). Para el estado de Nuevo León, el muestreo consideró al número total de ranchos registrados en el padrón de beneficiarios del 2017 del Programa de Producción Pecuaria Sustentable y Ordenamiento Ganadero y Apícola obtenidos por la Secretaría de Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación de México. Para los estados de Coahuila (Región de la Laguna) y Tamaulipas, los animales muestreados fueron rebaños de ganaderos que manifestaron su deseo de cooperar en entrevista directa.

El tamaño de muestra de 128 rebaños y 768 animales, se calculó mediante el programa computacional EpiMuestra²⁸. Debido a que no existía información de infecciones por SRLV para caprinos y ovinos en el noreste de México, se consideró una prevalencia esperada de 50 %, un nivel de confianza del 95 % y precisión absoluta del 5 %. El muestreo fue dos etapas seleccionándose primero los rebaños y posteriormente los animales dentro de cada rebaño, considerándose arbitrariamente, un efecto de diseño de 2²⁸. La unidad de muestreo para análisis fue el rebaño. Los análisis serológicos se analizaron por grupos que correspondían a una mezcla homogénea de 4 a 5 sueros por rebaño²⁹ a razón de 200 µl por animal. Se consideró como positivo el rebaño cuya mezcla de sueros resultó positiva a la prueba de ELISA comercial.

Muestras de suero y su manejo

Las muestras de suero se obtuvieron entre otoño del 2019 y finales de primavera del 2020. La sangre se obtuvo mediante punción de la vena yugular y tubos al vacío con gel activador de coagulación (Becton Dickinson, www.bd.com). Las muestras fueron identificadas y transportadas al laboratorio bajo condiciones de refrigeración a 7 °C (±3) en un contenedor de poliestireno. En el laboratorio los sueros se separaron del coagulo después de centrifugar los tubos a 2,500 rpm durante 5 min. Cada muestra de suero se depositó en tubos de plástico nuevos estériles de 2 ml. Cada tubo se etiquetó con su clave individual, fecha y procedencia. Todas las muestras se almacenaron a -20 °C en el banco de sueros del Laboratorio de Virología de la FMVZ-UANL, hasta su uso en la prueba de ELISA.

Colecta de información de campo

La identificación de posibles factores de riesgo se realizó a partir de las respuestas de los productores en una encuesta aplicada individualmente. La encuesta consistió en 30 preguntas e incluían aspectos del tipo de explotación, aspectos sanitarios y de salud animal, así como la identificación y localización del rebaño.

Detección de anticuerpos anti-SRLV

La detección de anticuerpos anti-SRLV se realizó mediante ELISA de competencia con el estuche comercial “Small Ruminat Lentivirus Antibody Test Kit, cELISA”, (WMRD Inc., Pullamn, WA, USA). Esta prueba, detecta anticuerpos dirigidos contra sitios antigénicos altamente conservados de la glucoproteína 135 de virus de la artritis encefalomielitis caprina. La sensibilidad y especificidad reportada para la prueba fue de 100 % y 96.4 %, respectivamente³⁰. La lectura de la reacción en cada pocillo se realizó a una densidad óptica de 650 nm en el lector de ELISA (ELx800, Bio-Tek®) y empleando el paquete computacional “KC Junior software” (www.biotek.com).

La presencia de anticuerpos fue derivada del cálculo de porcentaje de inhibición acorde a lo recomendado por el fabricante mediante la fórmula:

I = 100 {1 - (DO de la muestra/ DO del CN)}

Donde: I es el porcentaje de inhibición; DO es la densidad óptica detectada; CN es control negativo.

Para la validación de la prueba se consideró una media de DO del CN ≥ 0.300. Si el valor del I de la muestra fue ≥ 35 % se consideró como positivos, mientras que un I <35 % como negativo³⁰.

Análisis estadístico

De las reacciones positivas en la prueba de ELISA de cada rebaño se estimó la seroprevalencia real del SRLV mediante la herramienta en línea WinEpi versión 2.0 ⁽³¹. Para la estimación de proporciones e intervalos de confianza al 95% (IC _95% ) se incluyó la sensibilidad y especificidad reportada por el fabricante de estuche de ELISA³⁰. Para determinar la asociación entre los factores de riesgo y la seropositividad a SRLV inicialmente, los posibles factores de riesgo se identificaron en un análisis univariado mediante la prueba de Ji cuadrada o la prueba exacta de Fisher (PROC FREQ). Aquellos factores con una (P>0.20) fueron sometidos a un análisis multivariado de regresión logística (Cuadro 1) mediante el procedimiento LOGISTIC. Los factores significativos a la prueba exacta de Fisher con menos de 5 observaciones no se incluyeron en el análisis de regresión logística. Todos los análisis se hicieron mediante el paquete estadístico SAS de 2010.

Seroprevalencia de rebaño

El valor de seroprevalencia de rebaño contra SRLV obtenido en el presente estudio de 50.6 % (Cuadro 1) concuerda con las obtenidas en otras partes del mundo^30,31,32, pero contrasta con los estudios previos realizados en México^21,33,34,35. Recientemente, Martínez-Herrera et al³³ usando una prueba de ELISA indirecta reportaron una menor seroprevalencia a nivel de rebaño en caprinos criollos de Veracruz, México con 6.4 %. También, Torres-Acosta et al²¹ usando inmunodifusión en gel agar (IDGA), en el año 2003 reportaron una seroprevalencia aparente de 3.6 % en rebaños caprinos en su mayoría criollos del estado de Yucatán, México. Anteriormente, en 1984 Adams et al³⁴ empleando IDGA, reportaron a nivel individual en caprinos del estado de México y Guanajuato frecuencias serológicas de 22.1 % y 6.3 %, respectivamente. Estos mismos investigadores mencionaron no encontrar anticuerpos en rebaños de caprinos criollos nativos³⁴. Santiago et al³⁵ empleando la misma prueba de ELISA del presente trabajo, encontraron una seropositividad a nivel de rebaño de 41.3 % en muestras de caprinos del estado de Guanajuato, México. Acorde a lo anterior, el diseño del estudio, el manejo, tipo y propósito de los rebaños, así como la carencia de medidas de bioseguridad contra SRLV probablemente influyeron sobre los parámetros de seropositividad del presente y de cada uno de los anteriores estudios. En los años 1984 y 1985 se reportó elevada seropositividad en caprinos de razas lecheras importados hacia México y ausencia de seropositividad en caprinos criollos nativos^17,34. Estas observaciones y los datos del presente estudio sugieren que el SRLV ingresó hacia los rebaños criollos nativos del noreste de México, tal vez mediante el contacto con caprinos de raza importados con el propósito de mejorar la productividad. En el presente estudio, no se encontró diferencia significativa³⁶⁾ entre la seroprevalencia de los tipos rebaños caprinos (63.0 %), ovinos (25.4 %) o mixto (50.2 %). Estos datos contrastan con los obtenidos en rebaños similares de otros países^30,31,32 en la cuales los índices de seropositividad son relativamente bajos comparados a los del presente trabajo. No obstante, esto coincide con lo reportado en estudios previos para el manejo de una sola especie ya sea ovinos o caprinos^32,36,37 y cuando se manejan en condiciones mixtas³⁶. El tipo de prueba serológica empleada, el manejo y características del medio ambiente podrían explicar las diferencias encontradas.

Factores de riesgo asociados a la serología a nivel de rebaños

Después del análisis en tablas de contingencia se seleccionaron un total de 21 factores de 30 para evaluar su asociación con la seropositividad hacia SRLV en los rebaños caprinos y ovinos. Los factores de riesgo que contribuyeron significativamente a la explicación de la seropositividad hacia SRLV fueron: tipo de rebaño, asistencia veterinaria, uso múltiple de agujas, bajo índice de preñez, presencia de animales con artritis, reporte de alteraciones nerviosas y animales con mastitis; estas tres últimas alteraciones asociadas a procesos inflamatorios crónicos (Cuadro 2). El análisis de regresión logística mostró efecto significativo de los mismos factores que en las pruebas de Ji-cuadrada o exacta de Fisher; pero no se incluyeron los factores: tamaño del rebaño, introducción de animales, cuarentena, bioseguridad y hatos mixtos por tener cada una de ellas ≤5 observaciones. Diversos reportes^32,33,36, han señalado estas últimas variables como factores de riesgo por lo que fueron incluidos en la discusión. En el Cuadro 2 se muestran los factores de riesgo asociados a la seropositividad hacia SRLV en rebaños caprinos y ovinos del noreste de México. En el noreste de México, es relativamente común encontrar rebaños mixtos caprinos-ovinos. La coexistencia de ambas especies podría facilitar la trasmisión del SRLV no solo a través del contacto directo sino también a través de la ingesta de calostro o leche^37,38 y mediante otras prácticas de manejo como el uso de agujas en varios animales durante la aplicación de medicamentos, vacunas o aretes de identificación^6,37,39).

Se encontró fuerte asociación entre el tipo de rebaño caprino (OR 5.4; IC _95% = 1.0-28.2) o mixto (caprinos + ovinos) (OR 2.1; IC _95% = 0.3-12.3) con la seropositividad hacia SRLV. Similares observaciones han reportado que la presencia de los caprinos es un factor de riesgo que contribuye a la seropositividad hacia SRLV en ovinos^39,40. El tamaño del rebaño se ha reportado como otro factor importante que influye en la seropositividad hacia el SRLV, debido a que una de las vías de transmisión de este virus es por contacto directo entre animales infectados^36,39,40. No obstante, esta variable fue excluida del análisis de regresión logística debido a la baja cantidad de observaciones y para cumplir con los criterios de calidad de datos para análisis. En el presente trabajo, se encontró fuerte asociación entre la presencia de animales con artritis (OR 31.2; IC _95% = 6.7-142.8) y con mastitis (OR 4.8; IC _95% = 1.3-17.8) en los rebaños seropositivos. Las infecciones por SRLV se caracterizan por estar fuertemente relacionadas a estas condiciones clínico-patológicas^40,41,42. Para ovinos se ha reportado una alta asociación entre la ocurrencia de mastitis con la infección de SRLV en rebaños endémicos^9,39,40. En un estudio reciente se determinó que cuando el caprinocultor reconoce la presencia de artritis la infección por SRLV está muy diseminada en el rebaño⁴². También se ha propuesto que el desarrollo de artritis depende de las características genéticas de la cepa SRLV infectante⁴³. Lo observado en el presente estudio indica que animales con artritis crónica se presentan con alta frecuencia en rebaños seropositivos independientemente de la especie animal y el tipo de manejo.

Se encontró asociación entre problemas reproductivos y la seropositividad hacia SRLV. En los rebaños en los cuales el productor anotó baja tasa de preñez (≤50 %) tuvieron más probabilidad de resultar seropositivos que aquellos con tasas de preñez ≥50 %. Pocos estudios se han enfocado a conocer las repercusiones del SRLV sobre la reproducción en rumiantes pequeños. Recientemente se reportó la habilidad de este virus para inducir infecciones intrauterinas en pequeños rumiantes y transmitirse vía semen ya sea con inseminación artificial o monta natural⁴⁴. Sin embargo, no se encontró asociación entre la presencia de abortos o animales de bajo peso al nacimiento en el rebaño lo cual contrasta con estudios previos en los cuales se asoció el retraso del desarrollo de los cabritos recién nacidos con la seropositividad de la madre^37,39. Probablemente, las diferencias entre ambas observaciones se expliquen debido a la naturaleza de ambos estudios o al sesgo en las respuestas emitidas por los productores en la presente investigación. Interesantemente, se encontró asociación (P<0.0001) entre la seropositividad hacia SRLV y la asistencia del veterinario (OR=11.9; IC95%= 1.0-142.8). Una forma importante en la transmisión horizontal del SRLV es el contacto con humanos, particularmente el movimiento de veterinarios y trabajadores entre y dentro de los rebaños³⁹. Es posible considerar que la asistencia veterinaria jugaría un papel importante para controlar la infección por SRLV; se ha reportado el aumento de la seropositividad en rebaños de pequeños rumiantes con la vectorización por parte del veterinario de un rebaño a otro en sus visitas³⁹. Los datos obtenidos en el presente trabajo probablemente reflejen que un mismo veterinario asiste a diferentes rebaños. Lo anterior no fue incluido en las encuestas, posibilitando la transferencia horizontal del virus en la región estudiada debido al desconocimiento de la presencia del virus en la región, sus consecuencias y formas de dispersión. Un estudio señala que, la presencia del humano, así como el número de empleados y años de experiencia en el manejo dentro de los rebaños están relacionados con la presencia y circulación del virus³⁹.

Por otra parte, la ausencia de medidas de bioseguridad, higiene y desinfección aumenta en gran medida la presencia de la infección por SRLV⁴². Por lo tanto, es necesario concientizar a los productores sobre este agente, así como darles a conocer las pautas de bioseguridad para evitar la circulación del virus en sus rebaños. Con base en lo anterior, se confirman y amplían las observaciones epidemiológicas señaladas desde hace más de 25 años para SRLV en caprinos de México^17,19,34. Aunado a esto, el presente trabajo es el primer reporte serológico de la infección por SRLV en ovinos del noreste de México.

SRLV es considerado como un solo virus con variantes genéticas adaptadas a caprinos u ovinos^8,9. También se ha reportado la posibilidad de infecciones cruzadas^10,11 y el aislamiento de recombinantes entre las variantes genéticas del virus⁴¹. Dado lo anterior, resulta interesante determinar si la respuesta serológica encontrada en los pequeños rumiantes está dirigida hacia variantes genéticas de SRLV adaptadas a caprinos u ovinos²². Así mismo, poder precisar si en la zona noreste de México circulan SRLV recombinantes^8,10, que hayan logrado adaptarse tanto a los ovinos como a caprinos de la zona¹¹.