Composición del aceite esencial de orégano

Los compuestos del aceite de orégano se identificaron con un cromatógrafo de gases (CG; Hewlett Packard P-6890, California, EUA) acoplado a un espectrómetro de masas (EM; Hewlett Packard 7953, California, EUA). La temperatura del puerto de inyección fue de 240 °C; se utilizó una columna capilar Hewlett Packard 5ms® (30 m de longitud, 0.25 mm de diámetro interno y 0.25 µm de espesor de la película, California, EUA). La temperatura inicial del horno fue de 50 °C, por 5 min, después incrementó 10 °C por minuto hasta llegar a 260 °C; se utilizó helio como gas acarreador. El EM se operó en modo scan (rango m/z: 30-550) con ionización electrónica (70 eV) y flujo de 1.0 ml/min.

Cantidad de flavonoides, fenoles y capacidad antioxidante de los propóleos

El contenido de flavonoides se realizó con el método cloruro de aluminio, el de fenoles totales con el método de folin-ciocalteu y la capacidad antioxidante se realizó con el radical 2,2-Difenyl-1-picrilhidrazil (DPPH)²⁰.

Ubicación del experimento

La investigación se realizó en la granja avícola de la Unidad Académica de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Autónoma de Nayarit ubicada en el km. 3.5 de la carretera Compostela - Chapalilla, Municipio de Compostela, Estado de Nayarit, México.

Aves y dietas experimentales

Se utilizaron 480 pollos de la línea Ross de un día de edad distribuidos aleatoriamente en cuatro tratamientos con cuatro repeticiones de 30 pollos (TES= testigo, P= 100 mg de propóleos, A= 100 mg de aceite de orégano y PA= 50 mg de propóleos más 50 mg de aceite de orégano por kilo de alimento). La dieta se elaboró a base de maíz - pasta de soya en harina para iniciación y finalización (Cuadro 1) proporcionada ad libitum a las aves durante los 42 días; los dos aditivos se adicionaron a la fuente concentrada de energía durante la elaboración del alimento.

Parámetros productivos y muestras de sangre

Los parámetros productivos se midieron cada siete días y la mortalidad cuando sucedió, además, se tomó una muestra de sangre en la vena braquial a dos aves por repetición a los 21 y los 42 días (1.8 mg de ácido etilendiaminotetraácetico por mililitro) para hacer las extensiones de sangre, teñirlas con tinción Wright y medir los metabolitos de la sangre (Easy-Vet, Desego).

Sacrificio de aves y colecta de carne

A dos aves por repetición se les retiró el alimento para tener un ayuno de 6 h antes de sacrificarlas seccionando su vena yugular y arteria carótida, cumpliendo con la Norma Oficial Mexicana NOM-033-SAG/ZOO-2014²¹; se desangraron durante 2 min y se colocaron en agua (60 °C) durante 120 seg para retirar sus plumas manualmente. La canal se enfrió en agua con hielo durante una hora (0 °C), a la pechuga se le quitó la piel y grasa visible para envasarla en alto vacío y mantenerla congelada (-20 °C) durante ~1 mes.

Estabilidad oxidativa de la carne

A una muestra de 30 g de carne se le adicionan 30 ml de agua destilada y 0.2 ml de BHT al 7% (2,6-di-ter-butyl-4-methyl-phenol, Sigma-Aldrich, Toluca, México) diluido en alcohol metílico al 96% (CH₃CH₂OH). La muestra se trituró durante 30 seg (Licuadora Oster, M4655-813/465-42) y filtró a través de una malla plástica de 0.84 mm para reposar 30 min a 25 ºC en la oscuridad. Se tomó 1 ml de la capa superior de la muestra y se adicionan 2 ml de ácido tiobarbitúrico 0.02 M (Sigma-Aldrich, Toluca, México) combinado con ácido tricloroacético (TCA) al 15% en agua destilada. La solución se agitó 10 seg, se mantuvo en agua a 80 °C durante 10 min, finalmente se colocó a 0 °C (10 min). Se mide la absorbancia de la muestra a 532 nm (Biotek, Epoch, EUA), los valores obtenidos se multiplicaron por 7.8 para expresar mg de malondialdehído por kilo de carne²².

Análisis estadístico

Los datos obtenidos se analizaron con un diseño experimental completamente al azar usando el Procedimiento Lineal Generalizado (GLM) de SAS; las medias se compararon con la prueba Tukey y los efectos se consideraron significativos a una P≤0.05. Los datos de mortalidad se transformaron usando la función arco seno y se presentaron en porcentaje. El modelo estadístico usado fue:

Donde:

Y_ij consumo de alimento, ganancia de peso, conversión alimenticia, mortalidad de las aves, leucocitos, variables químicas y malondialdehído (MDA) por kilo de carne;

µ es la media general;

Ƭ _i es el efecto del aceite de orégano, de propóleos, aceite de orégano más propóleos;

Ε _ij es el error aleatorio.

Aceite de orégano

Los compuestos más abundantes en el aceite de orégano fueron timol (43.47 %), carvacrol (29.16 %), eucaliptol (6.96 %), cariofileno (5.38 %) y tetrametil (2.96 %). El aceite de orégano disminuye el crecimiento de bacterias debido al timol y carvacrol contenido, compuestos variables de acuerdo a su lugar de origen, época de corte y madurez de la planta. Sin embargo, en todas las etapas fenológicas de la planta de orégano son los compuestos más abundantes; el aceite de orégano puede contener hasta el 80 % de ambos compuestos^(23,24). La cantidad de timol y carvacrol en el aceite fue del 72 %, aceite de orégano de buena calidad comparado con otros que sólo contienen el 30 % de ambos compuestos^25,26.

Propóleos

En los propóleos el contenido de flavonoides fue de 5.6 mg equivalentes de quercetina, de fenoles 840 µg equivalentes de ácido cafeínico y 138 µg equivalentes de Trolox® determinados por el radical DPPH• (2,2-difenil-1-picrilhidrazilo) por gramo de propóleo. Los compuestos de los propóleos varían de acuerdo a su región de origen, existen reportes de China, India, Macedonia e Irán indicando contenidos de 8 a 188 mg de flavonoides y de 42.9 a 329.0 mg de fenoles por gramo of propóleos^10,24,25. En México se han reportado propóleos con 379.2 mg de flavonoides, 500.9 mg de fenoles y 54.4 mg equivalentes de Trolox por gramo de propóleo²⁰. Usando estos valores como referencia, el propóleo usado en la investigación contenía una limitada cantidad de compuestos activos comparado con propóleos de otras regiones de México y el mundo.

Parámetros productivos

En parámetros productivos no hubo efecto de los tratamientos sobre consumo de alimento, ganancia de peso, conversión alimenticia y mortalidad (Cuadro 2). Los resultados al adicionar aceite de orégano o propóleos en las dietas de aves son variables. Existen reportes que adicionan 25, 50, 300 y 600 ppm de propóleos por kilo de alimento sin tener efectos en las aves^27,28. Sólo adicionando 15,000 y 20,000 ppm de aceite de orégano las aves aumentaron sus rendimientos productivos²⁹. Las aves no aumentaron sus parámetros productivos debido a las dosis de propóleos que no aportaron suficientes compuestos activos para estimular secreciones de enzimas digestivas. Sólo dosis altas o cantidades mayores de compuestos activos pueden estimular las secreciones digestivas, por lo tanto, las aves pueden aprovechar los nutrientes y aumentar su rendimiento³⁰. Generalmente las investigaciones no reportan la cantidad de compuestos activos contenidos en los propóleos o aceites usados y esta información es esencial para comparar los resultados obtenidos en otras investigaciones.

Leucocitos

En aves de tres semanas disminuyó la cantidad de linfocitos con el tratamiento P comparado con el TES (P≤0.05), aumentaron los eosinófilos con el tratamiento combinado AP (P≤0.05), seguido por el tratamiento P (P≤0.05), los tratamientos TES y A fueron similares (Cuadro 3). Los linfocitos mantienen la respuesta inmune al enfrentarse a microorganismos invasores del cuerpo. Reportes de investigación indican menos linfocitos en aves cuando adicionaron propóleos a la dieta^31,32 como sucedió en nuestro experimento, los compuestos activos de los propóleos inhiben el desarrollo de los linfocitos T. En una investigación indican que 5 µg de propóleos por mililitro tienen efectos negativos in vitro y los flavonoides son los compuestos responsables³³.

Los eosinófilos son células vinculadas con el desarrollo de linfocitos T, sus poblaciones disminuyen cuando la edad de las aves incrementa³⁴. Sin embargo, cuando mejora el desarrollo del aparato digestivo la cantidad de eosinófilos aumenta; aves alimentadas con aceite de orégano o propóleos mejoran su flora intestinal y estimulan citosinas que inducen la proliferación de los eosinófilos³⁵.

Metabolitos en sangre

En aves de seis semanas de edad aumentó la cantidad de triglicéridos con el tratamiento A (P≤0.05) comparado con AP, los tratamientos TES y P fueron iguales (Cuadro 4). Los componentes químicos en sangre indican el estado general de salud. Existen reportes indicando niveles bajos de colesterol y triglicéridos cuando adicionan 300 ppm de propóleos a la dieta³⁶, sin embargo, no siempre se obtienen los mismos resultados³⁷. Por ejemplo, cuando los animales consumen dietas con niveles de grasa del 6 % y se adicionan propóleos a la dieta, se reportan bajos niveles de colesterol y triglicéridos³⁸. En ensayos con niveles de energía menores no es posible observar hipocolesterolemia e hipolipidemía adicionando propóleos o aceite de orégano a la dieta como sucedió en este experimento.

Estabilidad oxidativa de la carne de pechuga

La oxidación de la carne de pechuga aumentó al combinar los aditivos AP (P≤0.05) comparado con los tratamientos A, P y TES (Cuadro 5). Los propóleos y el aceite de orégano tienen capacidad antioxidante in vitro e in vivo^16,39. Sin embargo, su efecto puede variar al mezclarse con otros ingredientes de la dieta; por ejemplo, el aceite de orégano combinado con aceite de soya acidulado no tiene efecto antioxidante³⁹. Existen reportes indicando que 200 ppm de propóleos disminuyen la cantidad de MDA en la carne de pollo⁴⁰. Los propóleos al ingerirse a través de los alimentos se distribuyen en el cuerpo y se acumulan en las membranas celulares para protegerlas de la oxidación^33,36. Efecto no observado debido a que el aceite de orégano y propóleos no son compatibles, su combinación acelera el proceso oxidativo en la carne, al administrarse de forma independiente no presentaron niveles altos de MDA.