Introducción

En un bosque la mayoría de las plantas se micorrizan de forma natural puesto que encuentran en el suelo propágulos para su micorrización, tales como esporas, esclerocios, micelio, raíces micorrizadas y rizomorfos. Uno de los propágulos más estudiado han sido las esporas, las cuales tienen una longevidad considerable ya que pueden permanecer en el suelo por varios años e incluso décadas antes de germinar (^{Bruns et al., 2009}; ^{Nguyen et al., 2012}). En el caso de la producción de planta en vivero, la planta se encuentra fuera de su hábitat natural y entonces es incapaz de poder acceder a los propágulos fúngicos suficientes para su micorrización, por lo que es necesario llevar a cabo la inoculación en el vivero.

Por lo anterior, es fundamental conocer las técnicas de producción de inóculos con hongos ectomicorrízicos y los costos que implican. Existen tres técnicas de inoculación con hongos ectomicorrízicos en vivero que son: la inoculación con suelo de monte, la inoculación a base de esporas y la inoculación con micelio vegetativo (^{Landis et al., 1989}; ^{Rossi et al., 2007} y ^{Duponnois et al., 2011}). En México la mayoría de viveros tradicionales utilizan el suelo de monte como sustrato para la producción de planta y aprovechan éste como la única fuente de propágulos fúngicos ectomicorrízicos. Sin embargo, este método presenta un conjunto de deficiencias, dentro de las que se incluyen: i) la posibilidad de introducción de patógenos; ii) la carencia de una micorrización controlada por la heterogeneidad de distribución de los propágulos ectomicorrízicos; y iii) la erosión y destrucción de las áreas forestales de las cuales se extrae el suelo.

El segundo método es la inoculación a base de esporas que consiste en la aplicación del inoculante ectomicorrízico en el agua de riego o también puede ser mezclado en el sustrato. Para la preparación de dicho inoculante el hongo ectomicorrízico se deshidrata o se muele en fresco y se aplica al sustrato. Es importante seleccionar una especie ectomicorrízica que se encuentre en abundancia para la preparación de dicho inoculante, dado que se requieren grandes cantidades de hongos frescos, por su alto contenido de humedad. El tercer método de inoculación es por medio de micelio fúngico, éste se basa en la selección, aislamiento, purificación y posterior propagación del hongo ectomicorrízico en un acarreador por ejemplo en una mezcla de turba-vermiculita; el cual se aplica directamente al sustrato que será utilizado en el vivero.

El micelio fúngico también se puede incluir en alginato sódico, con la finalidad de evitar que se deshidrate y pueda conservar en buen estado hasta su aplicación; esta técnica de preparación de inoculantes también ha dado muy buenos resultados (^{Pera et al., 1998}; ^{Oliveira et al., 2006}). Diversos factores deben de ser tomados en cuenta para la selección de la especie de hongo ectomicorrízico para ser utilizado como inoculante ectomicorrizico a base de esporas o micelio, como son: i) la compatibilidad del hongo con la planta huésped; ii) la eficiencia del micobionte para promover una rápida micorrización, mayor crecimiento y supervivencia de la planta; iii) la vida de anaquel del micobionte; iv) el control de calidad en el proceso de producción de inoculantes; y v) la factibilidad metodológica y financiera de producción de los inoculantes (^{Brundrett et al., 1996a}).

Particularmente, este último aspecto ha recibido escasa atención, principalmente en la producción de inoculantes ectomicorrízicos neotropicales. En el presente estudio se describe y se realiza un análisis de los costos de inoculantes a base de esporas en polvo y en líquido. La eficiencia de los inoculantes analizados se evaluaron en Pinus patula. Se eligieron especies de los géneros Laccaria y Hebeloma que de acuerdo a estudios previos los cuales han demostrado su abundancia e importancia biocultural en el centro de México (^{Pérez-Moreno et al., 2008}).

Materiales y métodos

Preparación de inoculantes ectomicorrízicos a base de esporas en polvo. Los esporomas de especies de los hongos ectomicorrízicos comestibles pertenecientes a los géneros Hebeloma y Laccaria (Figura 1a y 2a), fueron adquiridos en el mercado de Ozumba, Estado de México localizado a 19° 02’ 11’ latitud norte y 98° 47’48’ longitud oeste, durante los meses de agosto y septiembre de 2016. Una vez adquiridos los esporomas se procedió a su clasificación por especie, de acuerdo con las características diagnósticas especificadas por ^{Carrasco-Hernández et al. (2010}, ²⁰¹⁵).

Figura 1 a) señora recolectora de hongos comestibles silvestres en el mercado de Ozumba, Estado de México; b) hongos en fresco de Hebeloma spp. en el deshidratador; c) hongos del género Hebeloma spp. deshidratados; d) molino utilizado para el deshidratado de hongos; e) inoculante deshidratado de Hebeloma spp.; f. Inoculación de Pinus greggii con Hebeloma sp. 

Figura 2 a) recolectoras de hongos comestibles silvestres en el mercado de Ozumba, Estado de México, denominadas también “hongueras”; b) molienda de L. proxima para preparación de inoculante ectomicorrízico en líquido; c) inoculante en líquido de Laccaria proxima. d) aplicación de inoculante líquido de L. proxima; e) cuadrantes de la cámara Neubauer; f) micelio externo de L. proxima en Pinus patula. 

Se cortó el estípite y solo se deshidrató el píleo en un deshidratador tipo charolas con vapor (marca JERSA) a una temperatura de 33 ±2 °C por un período de 16 horas (Figuras 1b y 1c). El inóculo ya deshidratado se molió en un molino industrial (Figura 1d), con una lámina de apertura de 1 mm en la salida, para permitir la homogenización del inóculo así producido. El inóculo obtenido se colocó en bolsas de plástico de capacidad de 500 g y en tubos Eppendorf de 1.5 mL (Figuras 1e y 1f). El inoculante se almacenó a 3 °C hasta su uso. El peso en fresco y seco se registraron, y dichos datos se utilizaron para el análisis de costos.

Resultados y discusión

Uno de los mayores impactos de la explotación forestal es el cambio en la composición de la comunidad de hongos ectomicorrízicos, ya que estos se ven alterados por los cambios químicos y biológicos que acontecen en el suelo después de la deforestación (^{Bradley, 2001}; ^{Jones et al., 2003}). Cabe señalar que la asociación micorrízica de acuerdo a Dupponnois et al. (2011), se encuentra presente 95% de áreas de vegetación nativa que no han sido perturbadas, mientras que esta se encuentra en menos de 1% en sitios perturbados.

Por lo anterior es fundamental que en vivero se introduzcan las ectomicorrízas adecuadas que se adapten a la especie vegetal y también a las nuevas condiciones del área que se pretende regenerar sobre todo en áreas altamente degradadas. En este sentido es de suma importancia conocer las tecnologías de preparación de inoculantes ectomicorrízicos y los costos que implicarían para su aplicación en vivero a gran escala.

En las especies estudiadas el porcentaje de humedad en promedio varió de 89 a 91% para el caso de Laccaria y de 91.6 a 94.4% para las especies de Hebeloma. El porcentaje restante corresponde a materia seca. En el caso de Laccaria se obtuvo en promedio de 4.8 a 5.5% para el píleo y 2.6 a 5.3% para el estípite de materia seca. En cuanto a las especies de Hebeloma el porcentaje de píleo de materia seca fue de 4.3 a 5% y de 1.2 a 2.7% para el estípite. En ambos casos el mayor porcentaje de materia seca se registró en el píleo.

Cabe señalar que solo se aprovecha el píleo para preparación de inoculante ectomicorrízico de Laccaria spp. y Hebeloma spp. debido a que en las láminas es donde se encuentran las esporas, las cuales son las estructuras reproductoras a partir de las cuales se produce el micelio con capacidad de colonización ectomicorrízica. Los datos del Cuadro 1 y 2 muestran la cantidad de hongos en fresco recolectados para Laccaria spp. y Hebeloma spp. respectivamente, así como las cantidades de píleo seco (inóculo) utilizados para el análisis de costos. El costo final de la producción del inoculante ectomicorrízico en polvo para las especies evaluadas fue de $2 pesos por gramo de inoculante ectomicorrízico.

En previos trabajos se ha aplicado este tipo de inoculante (3 g plántula^-1), en P. greggii, P. patula y P. pseudostrobus a una concentración de esporas de 10⁶ a 10⁸ por cada gramo y se han obtenido resultados de alta eficiencia con porcentajes altos de micorrización que han variado de 70 a 90% (^{Carrasco-Hernández, 2011}; ^{Méndez-Neri et al., 2011}; ^{Martínez-Reyes, 2012}). Si se aplican 3 g de inoculante a base de esporas en polvo por planta el costo de inoculación por planta es de $6 El costo de producción de un kilo de incoculante ectomicorrízico en polvo es de $2 000, si se considera aplicar 3 g por planta este alcanzaría para inocular 333 plantas. Sin embargo, si se reduce la dosis a la mitad 1.5 g por plántula el costo del inoculante sería de $3, lo cual también ha demostrado su efectividad (^{Rendón et al., 2014}). El costo de producción de P. greggii y P. pseudostrobus es de $2.72 y de $2.98 pesos respectivamente en el vivero de la Universidad Autónoma Chapingo.

La planta que se ofrece a este precio es una planta de 10 meses para P. greggii y de 12 meses para P. pseudostrobus y se producen en tubetes de plástico (envases de polipropileno virgen negro con capacidad de 140 mL) en un sustrato de turba-vermiculita-perlita en una proporción de 50, 30 y 20 respectivamente. A dichas plantas se les aplicaron ocho fertilizaciones y cuatro fumigaciones por mes. Los fertilizantes utilizados y las dosis de N variaron en función de la etapa del pino y fueron los siguientes: como iniciador: 9-45-15 a 50 ppm de N, en su etapa de crecimiento: nitrato de calcio combinado con 20-20-20 a 200 ppm de N y como finalizador: 4-25-35 a 50 ppm de N.

De lo anterior se deduce que el costo de una planta micorrizada con el inóculo en polvo, tendría un precio de $5.72 para P. greggii y de $5.98 para P. pseudostrobus a una dosis de 1.5 g de inóculo por planta. Es importante mencionar que hacen falta estudios relacionados con las dosis mínimas de inoculante ectomicorrízico en polvo, los cuales puedan alcanzar niveles de micorrización abundantes (superiores de 70%) y reducir costos. Cabe señalar, que la ^{CONAFOR (2010)} toma en cuenta la micorriza como un índice de calidad importante y esta debe de cubrir al menos 40% de cobertura del cepellón para que se considere una planta de calidad óptima para llevarse a campo.

Una forma alternativa de preparación de inoculante ectomicorrízico es tomar el píleo en fresco y molerlo para su aplicación como inoculante líquido. El costo por ml de inoculante ectomicorrízico líquido fue de $ 0.05 por mL y de $50 por litro. Las concentraciones de esporas variaron de acuerdo a la especie (Cuadro 3). El inoculante ectomicorrízico a base de esporas en líquido preparado en el presente estudio se inoculó en Pinus patula para probar su efectividad. Los hongos inoculados fueron: L. proxima, H. mesophaeum y S. pseudobrevipes y la mayoría de pinos presentaron altos porcentajes de micorrización (75% al 100%), lo que demuestra su efectividad (Cuadro 4).

De acuerdo a evaluaciones desarrolladas en el presente trabajo con 10 mL de inóculo líquido por planta se obtienen valores óptimos de micorrización y el precio sería de un $0.50 por planta, lo que reduce substancialmente el costo comparado con el inoculante ectomicorrízico en polvo.

El costo del inoculante ectomicorrízico en polvo evaluado en el presente trabajo fue de $2 000 kg^-1, el cual es menor comparado con el producto Ecto-Rhyza de la empresa PHC, aunque si se considera la cantidad de inóculo necesario por planta, el producto es más costoso con respecto a los que maneja esta empresa (Cuadro 5). Cabe señalar, que el inóculo evaluado en el presente trabajo no se ha probado en cantidades menores lo cual reduciría substancialmente el costo por planta. Aunado a esto la empresa PHC, no muestra en la etiqueta de sus productos bioensayos en invernadero donde se pueda corroborar que a las concentraciones que manejan puedan alcanzar porcentajes de micorrización altos (superiores a 70%).

El costo de producción del inóculo en líquido evaluado fue de $0.05 mL^-1 y de $50 pesos por litro, que alcanzaría para 100 plantas en una dosis de 10 mL por planta. Este precio fue similar al producto Mycogrow soluble y PHC Ectorhyza y menor en costo al producto Ectoplant riego (Cuadro 5).

Conclusiones

El inoculante ectomicorrízico a base de esporas líquido tiene un costo menor al compararse con el inoculante ecomicorrízico a base de esporas en polvo.

El inoculante ectomicorrízico a base de esporas en líquido es efectivo y también tiene el potencial de originar porcentajes altos de micorrización al igual que con el inoculante ectomicorrízico a base de esporas en polvo.

Se demuestra la viabilidad económica, comparable con los precios actuales de inoculantes comerciales existentes en el mercado internacional, de la producción de inoculantes a base de esporas en polvo o en líquido producidos para especies de árboles neotropicales.

Es necesario fomentar la creación de empresas nacionales que produzcan inoculantes ectomicorrízicos basados en hongos nativos de México, ya que el adquirir e introducir especies de otros países conlleva el riesgo de serias consecuencias ecológicas, como el posible desplazamiento de especies nativas del país y beneficios económicos y sociales como la creación de empleos locales y regionales.