Material vegetativo, tratamientos y diseño experimental

Los mangos “Tommy Atkins” se obtuvieron de una huerta ubicada en Culiacán, Sinaloa, México (24° 46’ 23’’ LN y 107° 32’ 56’’ LO, a 26 m s. n. m.). Los frutos se cosecharon de árboles de entre 15 y 20 años plantados en suelos arenosos y limosos, en clima cálido (30-34 °C). Las plantas se mantuvieron con riego por goteo antes de la temporada de lluvia. Los frutos se seleccionaron en el estadio 2 (8-11 °Brix) (^{Crisosto et al., 2009}) con ausencia de daño físico y peso de 350 a 420 g; posteriormente, se transfirieron al laboratorio de Fisiología y Tecnología Poscosecha en la Universidad Autónoma de Sinaloa.

Los frutos se limpiaron por inmersión en una solución de 300 (L·L^-1 de hipoclorito de sodio durante 3 min, se secaron con aire y se dividieron aleatoriamente en cuatro grupos. Cada grupo recibió uno de los siguientes tratamientos: testigo (sumergidos en agua a temperatura ambiente durante 15 y 30 días), THT₁ (inmersión en agua a 46.1 °C durante 75 min [^{USDA-APHIS, 2014]}), THT₂ (inmersión en agua a 55 °C durante 5 min [^{Ghasemnezhad et al., 2008}]) y THT₁ +THT₂ (tratamiento secuencial bajo las condiciones antes mencionadas, aplicado uno después del otro).

Los THT se realizaron usando un baño (1266-02, Cole-Parmer®, Thermo Scientific, EUA) con recirculación continua de agua caliente. Los frutos de cada tratamiento se almacenaron a 5 °C (85 a 90 % de humedad relativa) durante 15 y 30 días. Después del almacenamiento de 30 días a 5 °C, los frutos se dejaron madurar durante 4 y 8 días a 21 °C ± 1 °C.

Parámetros evaluados

Análisis estadístico

Los datos se sometieron a un análisis de varianza de dos vías utilizando el programa Stat-graphics Plus 5.1 (Statistical Graphics, Rockville, MD). El efecto de los tratamientos (testigo, THT₁, THT₂ y THT₁+THT₂) y los días de almacenamiento (0, 15, 30, 30+4 y 30+8 días) fueron los factores analizados. Las diferencias significativas (P < 0.05) entre las medias se establecieron usando la prueba de diferencias mínimas significativas (DMS) de Fisher. A menos que otro número se indique, se utilizaron tres muestras con cinco repeticiones para el análisis.

Índice de daño por frío

La aplicación de THT y el tiempo de almacenamiento tuvieron un efecto significativo en la presencia de síntomas de DF como picado, desarrollo irregular de color y descomposición en mangos “Tommy Atkins” (Figura 1). La aplicación de THT₁, THT₂ o THT₁ + THT₂ redujo significativamente la susceptibilidad al DF en comparación con el testigo después de 30 días a 5 °C (Figura 1a). Cuando los frutos se llevaron a maduración, la presencia de síntomas aumentó a medida que avanzó el periodo de almacenamiento (30+8 días) (Figura 1b). Los mangos tratados con THT₂ y THT₁ + THT₂ presentaron un menor IDF (1.72). Al realizar un análisis de regresión lineal, el THT₂ mostró el menor índice en la aparición de síntomas durante el almacenamiento a 5 °C (coeficiente de término lineal de 0.053 y coeficiente de determinación de R² de 0.999), mientras que el THT₁ + THT₂ presentó este comportamiento durante el almacenamiento a 21 °C (coeficiente de término lineal de 0.080 y coeficiente de determinación de R² de 0.955). Este resultado está relacionado con el tratamiento hidrotérmico poscosecha, ya que genera cambios fisiológicos y bioquímicos en el fruto. Estos cambios están relacionados con factores como el tipo de tratamiento térmico, el tiempo de exposición y el genotipo del fruto (^{Ummarat, Matsumoto, Wall, & Seraypheap, 2011}).

Figura 1 a) Índice de daño por frío (IDF) de mango “Tommy Atkins” durante almacenamiento a 5 °C más 4 y 8 días a 21 °C y b) imágenes representativas de mangos de cada tratamiento después de 30 días a 5 °C más 8 días a 21 °C. THT = tratamientos hidrotérmicos. Los datos son la media de cinco muestras con la diferencia mínima significativa (DMS = 0.17) como barras verticales. Barras con letras iguales entre los tratamientos no difieren estadísticamente (Fisher, P < 0.05). 

El aumento de la tolerancia al DF, favorecido por un tratamiento térmico individual corto o largo, se ha reportado previamente en mango “Tuu Shien” y “Keitt” (^{Le et al., 2010}; ^{Díaz-Corona et al., 2020}), plátano “Hom Thong” (^{Ummarat et al., 2011}) y kiwi “Hongyang” (^{Ma et al., 2014}). También se observó esta tolerancia cuando se aplicó un tratamiento térmico secuencial en papaya “Frangi” (^{Shadmani et al., 2015}). La capacidad del THT₂ y del tratamiento secuencial para reducir el IDF se puede atribuir al mantenimiento de la integridad de la membrana celular (menor contenido de MDA) y a una reducción de la permeabilidad de la membrana (menor PE; Figura 2a), así como a un aumento del sistema enzimático antioxidante que protege a las células del estrés oxidativo en los frutos sometidos a THT₁ + THT₂.

Figura 2 a) Pérdida de electrolitos y b) contenido de malodialdehido (MDA) en mango “Tommy Atkins” durante almacenamiento a 5 °C más 4 y 8 días de maduración a 21 °C. THT = tratamientos hidrotérmicos. Los datos son la media de cinco muestras con la diferencia mínima significativa (DMS = 0.17) como barras verticales. Barras con letras iguales entre los tratamientos no difieren estadísticamente (Fisher, P < 0.05).  

La reducción de la susceptibilidad al DF en los frutos del THT₁ respecto al testigo se relacionó con una mayor actividad enzimática, pero no con una reducción del daño en la membrana celular, ya que el THT₁ presentó valores de MDA y PE más elevados que el testigo. Así, el uso de estrés térmico secuencial permite una mayor activación del sistema antioxidante en el fruto, preparándolo para un estrés mayor como el causado por frío a largo plazo (30 días a 5 °C).

Pérdida de electrolitos y malondialdehído

La PE aumentó en diferentes proporciones durante el almacenamiento a 5 °C y a temperatura ambiente en todos los tratamientos. En el día 15, el mango tratado con el THT₂ y THT₁ + THT₂ presentó menor PE que el THT₁ y el testigo, mientras que después de 30 días de almacenamiento en frío sólo el THT₁ + THT₂ mantuvo la menor PE. Sin embargo, durante el almacenamiento a 21 °C, todos los tratamientos presentaron una PE similar (Figura 2a). En el análisis de regresión a 5 °C, el THT₁ + THT₂ mostró la menor tasa de liberación de electrolitos, con un coeficiente de término lineal de 0.437 (coeficiente de determinación de 0.983). Por el contrario, en el análisis de varianza a 21 °C, el THT₁ presentó la menor tasa en la PE (coeficiente de término lineal de 0.141 y coeficiente de determinación R² de 0.826).

El contenido de MDA aumentó con el tiempo de almacenamiento en ambas temperaturas de almacenaje (Figura 2b). La fruta tratada con el THT₂ mostró el menor contenido de MDA al final del almacenamiento a 5 °C, seguida por la fruta del tratamiento secuencial, mientras que la aplicación del THT₁ promovió un mayor contenido de MDA, incluso por encima del testigo. Durante la maduración, los frutos tratados con los distintos THT presentaron un mayor contenido de MDA que el testigo, pero el uso del THT₁ + THT₂ permitió una menor peroxidación lipídica. Un comportamiento similar fue observado en el análisis de regresión lineal, ya que el THT₂ presentó la menor tasa de producción de MDA con un coeficiente de regresión de 0.052 y un coeficiente de determinación R² de 0.989 a 5 °C. Por otro lado, a 21 °C, este análisis mostró que el THT₁ presentó la tasa de producción de MDA más baja, con un coeficiente de regresión de 0.398 y un coeficiente de determinación R² de 0.999, lo cual difiere del análisis de varianza. Lo anterior debido, posiblemente, a la variabilidad en la producción de MDA.

El estrés abiótico producido por las bajas temperaturas promueve el daño oxidativo en el fruto y la senescencia rápida. Por lo tanto, la acumulación de especies reactivas de oxígeno (ERO) en las células debida al estrés puede provocar el deterioro de la membrana y un aumento de la PE y del contenido de MDA (^{Nasef, 2018}). El uso de THT₂ y THT₁ + THT₂ protegió a la membrana celular, con lo cual se redujeron los niveles de PE y MDA durante el almacenamiento en frío. Sin embargo, después de retirar de los 5 °C, la fruta del THT presentó incrementos significativos en dichos parámetros. Resultados similares fueron reportados con anterioridad en diferentes frutas (granada, mandarina, plátano y pepino) tratadas con THT durante un tiempo corto (40 a 55 °C, de 4 a 10 min), donde el tratamiento térmico redujo el daño de la membrana (^{Mirdehghan et al., 2007}; ^{Ghasemnezhad et al., 2008}; ^{Ummarat et al., 2011}; Nasef, 2018).

^{Nasef (2018}) señala que el tratamiento térmico (55 °C durante 5 min) disminuye el DF en pepinos debido a una reducción de la PE y a la conservación de la integridad de la membrana. Asimismo, el comportamiento del tratamiento secuencial del presente estudio fue similar al de la combinación de dos THT (36.5 °C durante 75 min más 46.5 °C durante 61 min) en mango “Tommy Atkins” almacenado a 4 y 9 °C (^{Nyanjage et al., 1999}). Lo anterior debido a que el tratamiento térmico secuencial puede retrasar la maduración y el ablandamiento y, por tanto, reducir la PE. La aplicación individual de THT presentó una PE similar al testigo. Este incremento en la permeabilidad de la membrana celular se atribuye a los efectos del estrés térmico, ya que induce la activación de las proteínas de choque térmico, la vía de la arginina y el metabolismo de la glucosa. Además, aumenta las enzimas y los compuestos antioxidantes, como el ácido ascórbico y el glutatión, los cuales inhiben el daño peroxidativo (^{Zhang et al., 2019}).

Pérdida de peso

Todos los tratamientos presentaron un incremento en la PP durante el almacenamiento a 5 °C, alcanzando valores de 2.98 % (THT₁ + THT₂) a 3.92 % (THT₁) al final del almacenamiento (Figura 3). El mango tratado con un tratamiento secuencial presentó la menor PP (2.98 %), mostrando diferencias significativas (P < 0.05) con la fruta de los otros tratamientos después de 36 días a 5 °C. La fruta del THT₁ y el testigo tuvieron valores similares y produjeron los porcentajes más altos de PP. Asimismo, este estudio reveló que el THT₁ + THT₂ fue más eficaz en la reducción de la PP que la aplicación individual de cada tratamiento térmico, lo cual sugiere que el tratamiento térmico secuencial podría reducir las alteraciones en la piel del fruto, la transpiración y la respiración durante el almacenamiento en frío, sin inhibir la maduración cuando se transfiere a temperatura ambiente (^{Shadmani et al., 2015}).

Figura 3 Pérdida de peso de mango “Tommy Atkins” durante el almacenamiento a 5 °C. Los datos son la media de nueve muestras. Las barras verticales representan la diferencia mínima significativa (DMS) de Fisher = 0.33. 

La aplicación del tratamiento térmico secuencial en mango podría aumentar las propiedades protectoras de la cutícula y la cera epicuticular, manteniendo la integridad del tejido (^{Shadmani et al., 2015}). Contrario a estos resultados, el mango “Kensington” sometido a tratamiento secuencial por largo tiempo (calor de vapor a 40 °C por 8 h más THT a 47 °C por 15 min) y almacenado a temperatura de maduración presentó un incremento de PP (2.29 %), mayor tasa de respiración, maduración acelerada (11.43 N en firmeza, 13.92 °Brix y 0.96 acidez titulable) e incremento en transpiración y deshidratación, comparado con fruta testigo (^{Jacobi, Macrae, & Hetherington, 2000}). Por otro lado, ^{Nasef (2018}) señala que la PP en pepinos se ve afectada por la temperatura del tratamiento (45 o 55 °C durante 5 min), el periodo de almacenamiento (7, 14 y 21 días a 5 °C, más 2 y 4 días a 20 °C) y su interacción. El uso de 55 °C durante 5 min podría potenciar las funciones de protección de la membrana y la pared celular, incluso durante la maduración. El uso de un tratamiento cuarentenario más un tratamiento térmico de corta duración no se había reportado anteriormente.

Color

Los parámetros de color (L* y ángulo Hue) se presentan en el Cuadro 1. La fruta mostró una coloración inicial rojo y verde brillante, con valores promedio de 41.18 y 18.23 para L* y °Hue, respectivamente. El tiempo de almacenamiento tuvo un efecto significativo sobre la pérdida de luminosidad (-9.67 % en promedio), sin distinción del tratamiento, la cual se mantuvo cuando los frutos se llevaron a maduración a 21 °C en THT₁ + THT₂ y el testigo. El THT₂ presentó la reducción más baja en los valores de L* después de 30 días de almacenamiento frío, así como después de 8 días de maduración con respecto a otros tratamientos. Los tratamientos THT₁ y THT₁ + THT₂ presentaron las pérdidas más altas en los valores de L* durante el almacenamiento frío (-13.91 %) y la maduración (-16.51 %), respectivamente.

Por otro lado, se observó una reducción significativa (P < 0.05) en los valores del °Hue durante el almacenamiento en frío en la fruta del THT₁, mientras que los valores en los otros tratamientos permanecieron prácticamente constantes. Después de 8 días adicionales a 21 °C, sólo el testigo presentó una reducción significativa del °Hue (-13.42 %). El THT₂ y el THT₁ + THT₂ preservaron la calidad del mango, y mantuvieron buena apariencia y color (luminosidad y °Hue). Este comportamiento se puede asociar a una reducción de los síntomas del IDF y de la PP, a la estabilización de la membrana celular y a un retraso en la maduración, lo cual redujo los cambios en el color de la piel (^{López-López et al., 2018}).

Se observaron resultados similares en pepino “Dahshan”, ya que el uso de THT durante 5 min mantuvo buen color y buena apariencia, lo cual se atribuye a un retraso en la degradación de la clorofila por la reducción de las actividades de la clorofila oxidasa y peroxidasa, inducción de la proteína de choque térmico, estabilización de la membrana celular y reducción de la PP (^{Nasef, 2018}). Asimismo, el índice de color de la cáscara no cambió significativamente en mango sumergido en tratamientos con calor durante un tiempo prolongado (75 min y 20 min) (^{Dea et al., 2010}; ^{Alvindia & Acda, 2015}) o tratamiento con calor secuencial (3 min más 40 min) (^{Le et al., 2010}), pero sí lo hacen cuando los frutos son expuestos a irradiación (^{Cruz, Soares, Fabbri, Cordenunsi, & Sabato, 2012}).

Firmeza

Respecto a la firmeza, todos los tratamientos presentaron una reducción significativa durante el almacenamiento a 5 y 21 °C (Cuadro 1). Los valores iniciales de firmeza variaron de 123 a 137 N, y después de 30 días de almacenamiento en frío variaron de 112.95 a 97.67 N. La fruta testigo mostró la menor disminución de firmeza (-16.75 %). La aplicación del THT₁ promovió la mayor pérdida de firmeza (-24.08 %), seguido del THT₂ (-23.80 %) y el tratamiento secuencial (-20.93 %). Sin embargo, cuando los frutos se transfirieron a maduración, los del THT₂ mostraron la menor pérdida de firmeza, seguidos por los de THT₁ + THT₂, mientras que los frutos testigo y del THT₁ mostraron mayor pérdida de firmeza sin diferencias significativas (P > 0.05) entre ellos.

El uso del THT₁ + THT₂ originó una reducción significativa de la firmeza en comparación con los tratamientos por separado al inicio del estudio, lo cual se podría deber a un aumento de la tasa de respiración y de la síntesis de etileno que provocan la degradación del almidón en azúcares, o a una activación de las enzimas degradativas que afectan a la pared celular (^{Hossain, Rana, Kimura, & Roslan, 2014}). Aunque el THT₁ + THT₂ presentó los valores de firmeza más bajos al final del periodo de almacenamiento a 5 °C, también presentó el menor cambio con respecto al día inicial. Por lo tanto, cuando se combina el tratamiento térmico secuencial con el almacenamiento a temperaturas frías, la degradación de la pared celular se reduce. De acuerdo con ^{Mirdehghan et al. (2007}), un doble estrés podría causar una menor despolimerización y solubilización de las sustancias pécticas (poliurónido), lo cual llevaría a una reducción de la pectina soluble y de la maduración, así como a una disminución de la fuerza de compresión y de la actividad enzimática, lo que mantendría la integridad celular, y reducir la pérdida de firmeza y la descomposición celular (^{Le et al., 2010}; ^{Mahto & Das, 2013}).

Durante la maduración, la inmersión de la fruta en el THT₂ redujo el ablandamiento al día 30 a 5 °C más 8 días a 21 °C, lo cual se podría deber a que el corto tiempo de inmersión no tuvo efecto sobre la actividad de las enzimas poligalacturonasa y (-galactosidasa (^{Chávez-Sánchez, Carrillo-López, Vega-García, & Yahia, 2013}). Resultados similares con tratamientos secuenciales fueron reportados por ^{Jacobi et al. (2000}) en mango “Tuu Shein” tratado con aire caliente por 8 h más THT por 15 min, y ^{Le et al. (2010}) en mango tratado con THT más vapor de calor por 40 min, donde observaron un ablandamiento reducido debido a una menor degradación de la pared celular y cambios en el contenido de pectina soluble.

Metabolismo oxidativo (actividad enzimática)

La actividad de la SOD aumentó en todos los tratamientos durante el almacenamiento a 5 °C. En el día 30, el tratamiento secuencial mostró la actividad más alta, seguido del THT₁, mientras que el THT₂ y el testigo mostraron una menor actividad de la SOD sin diferencias significativas (P > 0.05) entre ellos (Figura 4a). En el día 30+8, todos los tratamientos presentaron una reducción significativa de la SOD; sin embargo, el THT₁ + THT₂ mantuvo la actividad más alta con diferencias significativas respecto a los otros tratamientos. La enzima SOD contribuye en la etapa inicial de la eliminación de las ERO y cataliza la transformación del ion superóxido (O₂ ^-) en H₂O₂ (^{Alscher, Erturk, & Heat, 2002}; ^{Soleimani-Aghdam, Jannatizadeh, Sheikh-Assadi, & Malekzadeh, 2016}). En este estudio, la aplicación de THT durante un tiempo prolongado (THT₁ y THT₁ + THT₂) mejoró la actividad de la SOD; no obstante, el tratamiento secuencial presentó una mayor actividad en ambas temperaturas de almacenamiento (5 y 21 °C).

Figura 4 Actividad enzimática antioxidante en mango “Tommy Atkins” durante almacenamiento a 5 °C (líneas continuas) más 4 y 8 días a 21 °C (líneas punteadas): a) superóxido dismutasa (SOD), b) catalasa (CAT) y c) ascorbato peroxidasa (APX). Los datos son la media de cinco muestras con la diferencia mínima significativa (DMS) como barras verticales.  

El THT₂ no mostró ningún efecto sobre la actividad de la SOD debido al bajo daño de la membrana y a la reducción del contenido de ERO. Estos resultados sugieren que el efecto del THT₁ + THT₂ sobre la reducción del DF puede estar asociado a un incremento de la SOD, el cual impidió la acumulación de O₂ ^- y, por tanto, el daño oxidativo, disminuyendo la PE y el contenido de MDA durante el almacenamiento en frío. No se observaron diferencias significativas en la actividad de la SOD entre la fruta del THT₂ y el testigo. Por el contrario, ^{Fogelman, Kaplan, Tanami, y Ginzberg (2011}) y ^{Wang et al. (2016}) señalan que el aumento de la actividad de la SOD en melón “Hami” se debió al efecto del THT a 59 °C durante 30 s más 55 °C durante 3 min; sin embargo, la actividad de la SOD no tuvo efecto sobre la reducción del IDF, ya que aumentó el contenido de O₂ ^- y H₂O₂, lo cual provocó peroxidación lipídica y daños en las membranas.

Los resultados obtenidos en este estudio fueron similares a los reportados por ^{López-López et al. (2018}) en mango “Keitt” sumergido en tratamiento cuarentenario y almacenado a 5 °C, ya que un incremento en la actividad de la SOD se relacionó con la tolerancia al DF y a la reducción del daño de la membrana. Además, el uso de THT secuencial (42 °C durante 30 min más 49 °C durante 20 min) en papaya “Frangi” no aumentó significativamente la actividad de la SOD durante el almacenamiento a 6 °C; por lo tanto, no se correlacionó con la tolerancia al DF (^{Shadmani et al., 2015}). Esto es contrario a nuestros resultados con el tratamiento secuencial, y puede estar asociado con las diferencias en el tiempo de exposición a ambas temperaturas.

Los tratamientos THT₁ + THT₂ y THT₁ presentaron una mayor actividad de la CAT durante el almacenamiento en frío al mostrar incrementos de 38.80 y 27.67 %, respectivamente, en el día 30 (Figura 4b), mientras que el THT₂ y el testigo mostraron una menor actividad (19.80 y 11.68 %, respectivamente). Cuando los frutos se transfirieron a 21 °C, los tratados con THT₁ presentaron la máxima reducción de la actividad de la CAT en el día 30+4, mientras que los tratados con THT₁ + THT₂ mantuvieron la actividad más alta con diferencias significativas respecto a los otros tratamientos. Al final del almacenamiento de maduración, la actividad de la CAT se redujo en todos los tratamientos, y no se observaron diferencias significativas entre ellos. La CAT reduce el H₂O₂ a agua y oxígeno, con lo cual protega a la membrana celular del daño oxidativo (^{Nasef, 2018}).

La actividad de la CAT mostró un comportamiento similar a la actividad SOD. El THT₁ y THT₁ + THT₂ presentaron un aumento significativo de la actividad de la CAT al final del almacenamiento a 5 °C. El tratamiento cuarentenario puede inducir estrés oxidativo, pero también induce defensas frente al estrés oxidativo (^{López-López et al., 2018}). El THT₂ indujo una actividad CAT mínima, similar al testigo, pero con la diferencia de que el THT₂ reduce el daño de la membrana y la producción de ERO. Durante la maduración, el aumento de los síntomas de DF se asoció con la reducción de la CAT y la acumulación de H₂O₂, una molécula que permea fácilmente la membrana celular y reacciona con los iones metálicos intracelulares, lo cual produce radicales de hidroxilo que causan daños en la estructura de las proteínas y el ADN, así como pérdida de la integridad de la membrana (^{Sala & Lafuente, 2000}).

El THT₁ + THT₂ mantuvo la actividad enzimática más alta durante los primeros cuatro días de maduración, tal y como se observó para la actividad de la SOD. La CAT y la SOD ayudan a reducir la producción de H₂O₂ y O₂ ^- al limitar el radical hidroxilo intracelular y los síntomas de DF. En concordancia con lo anterior, diversos autores indican que el tratamiento térmico incrementa la actividad de la CAT y reduce la acumulación de H₂O₂ protegiendo a la célula de daños y síntomas de DF. La CAT presentó un mayor efecto antioxidante que la APX, enzima que compite por H₂O₂ durante el almacenamiento en frío (^{Fogelman et al., 2011}; ^{Nasef, 2018}). ^{Shadmani et al. (2015}) informan que el THT secuencial en papaya promovió menos actividad CAT que el testigo a 6 °C, especialmente después de dos semanas. Además, observaron que la acumulación de H₂O₂ en la fruta testigo estaba correlacionada con una actividad CAT más alta y, por lo tanto, no se observó que una mayor actividad CAT se correlacionara con la tolerancia al DF en la fruta de THT (Shadmani et al., 2015).

En cuanto a la actividad de la APX, ésta aumentó durante el almacenamiento en frío en los frutos con diferentes THT, mientras que los frutos testigo no mostraron cambios significativos (Figura 4c). Después de 30 días a 5 °C, el tratamiento secuencial presentó mayor actividad APX, con diferencias significativas respecto al THT₂ y el testigo. Después de 4 días a 21 °C, la actividad de la APX se redujo en todos los THT, pero el THT₁ + THT₂ mantuvo los valores más altos con respecto a los otros tratamientos. Después de 8 días a 21 °C, no se observaron diferencias significativas en la actividad de dicha enzima entre el testigo y todos los THT. En este trabajo, el uso de diferentes THT incrementó la actividad de la APX, especialmente al final del almacenamiento a 5 °C. Durante la maduración, todos los tratamientos redujeron la actividad de la APX de forma similar a las otras enzimas (SOD y CAT), al presentar la mayor actividad con el tratamiento secuencial.

^{Chongchatuporn et al. (2013}) indican que una reducción de la susceptibilidad al DF está relacionada con una reducción de ERO y un incremento de las actividades de la CAT y la APX durante el almacenamiento en frío. Se han observaron resultados similares en fresa (^{Vicente, Martínez, Chaves, & Civello, 2006}), brócoli (^{Zhang et al., 2009}), plátano (^{Ummarat et al., 2011}) y mango (^{López-López et al., 2018}), donde hubo una mayor transcripción y actividad de la APX respecto al testigo, reducción de la acumulación de ERO y el daño celular, así como aumento de la tolerancia al DF. Un aumento sincronizado de las actividades de enzimas antioxidantes como SOD, CAT y APX, promovido por el tratamiento secuencial, es muy importante para la eliminación de ERO con el fin de proteger la membrana celular, inducir la tolerancia al DF y mantener la calidad durante el almacenamiento en frío.

Por lo tanto, el uso de tratamientos térmicos para el equilibrio entre las enzimas antioxidantes es crítico para la supervivencia celular durante el estrés por frío (^{Zhang et al., 2013}; ^{López-López et al., 2018}). Es importante destacar que el efecto observado en el tratamiento secuencial (cuarentena más corto plazo) no ha sido reportado previamente para las actividades de la SOD, la CAT, la APX y la tolerancia al DF en mango.