INTRODUCCIÓN

La tortuga verde (Chelonia mydas) se distribuye a nivel mundial y tiene una fauna parasitaria muy abundante y diversificada (^{Santoro et al. 2006}, ^{Greiner 2013}). En Brasil, los estudios sobre la fauna parasitaria de C. mydas revelaron la presencia considerable de helmintos de la clase Digenea (^{Werneck y Silva 2015}, ^{Binoti et al. 2016}, ^{Gomes et al. 2017}). Entre 2004 y 2011, ^{Werneck y Silva (2015)} analizaron la composición de helmintos en tortugas verdes juveniles por primera vez en Brasil, y ^{Binoti et al. (2016)} y ^{Gomes et al. (2017)} caracterizaron estos helmintos y los aspectos ecológicos de la comunidad de helmintos gastrointestinales en juveniles de C. mydas.

El diagnóstico de helmintiasis en tortugas marinas generalmente se realiza durante la necropsia a través de la recolección y el estudio de parásitos adultos (^{Greiner y Mader 2006}, ^{Chapman et al. 2019}); no es común realizar exámenes coproparasitológicos, aunque es posible y justificado su uso como método no invasivo (^{Greiner y Mader 2006}). Considerando que el principal método para diagnosticar endoparásitos en estos animales es a través del examen fecal para la detección de huevos, ^{Marangi et al. (2020)} realizaron el primer estudio coprológico multicéntrico de comunidades de helmintos de tortugas marinas (Caretta caretta) de vida libre.

La identificación de los huevos se basa en su morfología y morfometría, y se consideran las estructuras que se desarrollan dentro del huevo, la forma del huevo, la longitud, el ancho de las espinas o filamentos en los polos, el número de filamentos y la longitud del filamento. Sin embargo, algunos huevos observados en muestras fecales no se pueden identificar a nivel de especie o género. En algunos casos, la dinámica de la eliminación de huevos en las heces ha sido poco explorada. Además, no está claro cómo los adultos de Digenea que se encuentran en lugares fuera del sistema digestivo eliminan sus huevos en las heces del huésped. Para el ciclo de vida de los espirorquidos, se hipotetizaron 3 posibles vías principales de eliminación, que incluyen las heces, la expectoración y la descomposición post mortem o la actividad de carroñeros sobre los cadáveres con dispersión de huevos (^{Chapman et al. 2019}). ^{Santoro et al. (2020)} obtuvieron una enorme cantidad de huevos que contenían miracidio vivo de cadáveres de tortugas marinas que resultaron positivas para la infección por espirorquidos, lo que sugiere que los huevos viables podrían eliminarse a través de las heces o dispersarse después de la descomposición post mortem.

Debido a la falta de artículos sobre la morfología y la morfometría de los huevos de helmintos en tortugas, el objetivo de este estudio fue caracterizar morfológica y morfométricamente huevos de helmintos recuperados en exámenes coproparasitológicos de sedimentación y analizar su relación con especies de helmintos recuperadas durante la necropsia de ejemplares juveniles de tortugas verdes (C. mydas).

MATERIALES Y MÉTODOS

Se realizaron necropsias de 36 ejemplares de juveniles de tortuga verde (C. mydas, Linnaeus 1758) (Testudines, Chelonidae) encontrados muertos en la costa sur del estado de Espírito Santo, Brasil, de marzo a agosto de 2015, y se inspeccionó el contenido del tracto gastrointestinal en busca de parásitos. Los animales fueron rescatados por el Programa de Monitoreo de Playas de las cuencas de Campos y Espírito Santo, en un tramo de aproximadamente 200 km (desde el sur hasta el centro de la costa de Espírito Santo), entre las playas de Nova Almeida/Serra (20°02ʹ20ʺ S, 40°10ʹ50ʺ W) y Marobá/Presidente Kennedy (21°11ʹ45ʺ S, 40°55ʹ54ʺ W).

Los especímenes de parásitos recolectados se fijaron en alcohol de formaldehído acético (AFA) durante 24 h entre 2 portaobjetos de vidrio y luego se envasaron en tubos de plástico que contenían alcohol al 70%. El montaje de los portaobjetos se realizó de acuerdo con el protocolo de laboratorio siguiendo los pasos de clarificación, tinción, deshidratación y diafanización. Los helmintos adultos se identificaron por medio de la evaluación morfológica según ^{Werneck (2007)} y ^{Fernandes y Kohn (2014)}, y se evaluó la morfología y morfometría de los huevos.

Para realizar el examen coproparasitológico, se recolectaron muestras de heces directamente de la ampolla rectal durante la necropsia. Las heces se procesaron según la técnica de sedimentación descrita por ^{Foreyt (2005)}, y los huevos observados se recolectaron y colocaron en portaobjetos, se clasificaron al microscopio óptico según su morfología (^{Greiner 2013}) y se cuantificaron según el morfotipo. Se hizo una comparación entre los huevos de los análisis coprológicos y los huevos observados en los trematodos adultos recolectados.

RESULTADOS

De las 36 tortugas necropsiadas, no fue posible recolectar muestras de 2 de ellas por la ausencia de contenido fecal. De los 34 exámenes coproparasitológicos realizados, 31 dieron resultados positivos para la presencia de huevos de helmintos. Se encontraron 4 tipos diferentes de huevos, y se clasificaron según su morfología (Fig. 1) y morfometría (Tabla 1).

Figura 1 Fotomicrografía de los tipos de huevos recuperados por exámenes coproparasitológicos. (a) huevo tipo 1, (b) huevo tipo 2, (c) huevo tipo 3 y (d) huevo tipo 4. 

Se recolectaron helmintos adultos en 34 de las 36 tortugas evaluadas, y se encontraron 18 especies de trematodos pertenecientes a 4 familias (Tabla 2). Los huevos medidos directamente en el interior de los helmintos adultos fijados en lámina mostraron diversidad morfológica con relación al tamaño, con longitudes que oscilaron entre 19.07 y 99.28 μm y anchuras que oscilaron entre 11.35 y 45.66 μm, con una longitud media de 45.52 ± 28.23 μm y una anchura media de 24.81 ± 16.06 μm. Esta variación de tamaño en los huevos medidos dentro de los parásitos adultos puede estar relacionada con los ciclos de maduración de los huevos antes de su oviposición. Las medidas de los huevos de cada especie de helminto se especifican en la Tabla 1. Una especie de parásito (Learedius learedi) no presentó huevos dentro del espécimen, lo que imposibilitó el análisis morfométrico.

DISCUSIÓN

Aunque los huevos son generalmente más abundantes que los parásitos adultos, la identificación microscópica de los huevos es difícil debido a las similitudes en la morfología de los huevos de congéneres o incluso miembros de diferentes géneros dada la frecuencia de infecciones mixtas en el mismo individuo (^{Chapman et al. 2017}, ^{Stacy et al. 2017}). Los huevos encontrados en este estudio son morfológicamente similares a las pocas descripciones existentes en la literatura investigada. En este estudio, la principal limitación fue comparar la relación de la morfometría de los huevos observada en los helmintos adultos recolectados durante la necropsia y correlacionarla con la presencia de los huevos recuperados en los exámenes coproparasitológicos. Anteriormente, ^{Gomes et al. (2017)} describieron a los helmintos adultos encontrados en este trabajo (Tabla 2) en la misma región y observaron una prevalencia importante de Cricocephalus albus, Metacetabulum invaginatum y Neoctangium travassosi (^{Gomes et al. 2017}).

^{Greiner (2013)} utilizó una técnica de sedimentación como principio de diagnóstico, de manera similar a este estudio. También se utilizó la técnica de ^{Foreyt (2005)} para describir las mediciones de huevos de las especies C. albus, Charaxicephalus robustus, Pronochephalus obliquus y Schizamphistomum scleroporum. ^{Marangi et al. (2020)} también realizaron exámenes coprológicos utilizando características morfológicas y morfométricas para identificar huevos, como lo reportó ^{Greiner (2013)}.

La variación de tamaño en los huevos medidos dentro de los parásitos adultos puede estar relacionada con los ciclos de maduración de los huevos antes de su oviposición. En cuanto a la morfometría de los huevos en helmintos adultos, ^{Werneck (2007)} obtuvo resultados similares a los del presente estudio para las medidas de huevos de C. albus, Cricocephalus megastomun, Deuteribaris proteus, M. invaginatum, N. travassosi, Pleurogonius longiusculus, Polyangium linguatula y P. obliquus. ^{Santoro et al. (2007)}, al examinar ejemplares adultos de Pleurogonius tortugueroi aislados de C. mydas, observaron huevos que midieron en promedio 27.00 μm de largo por 14.00 μm de ancho, valores cercanos a los encontrados en este trabajo para parásitos de otras especies del mismo género: Pleurogonius linearis (33.17 × 15.98 μm), Pleurogonius lobatos (25.87 × 12.41 μm) y P. longiusculus (24.67 × 12.29 μm).

En este estudio, los helmintos Deuterobaris intestinalis, D. proteus, N. travassosi y S. scleroporum presentaron huevos de tamaños similares entre sí y morfométricamente similares al huevo tipo 1. ^{Greiner (2013)} identificó huevos similares a estos, de 98.00 × 60.00 μm, como S. scleroporum y D. proteus. Este mismo autor también reportó huevos similares a los tipos 2 y 3, pertenecientes a helmintos de los géneros Carettacola (88.00 × 38.00 μm) y Hapalotrema (414.00 × 36.00 μm), respectivamente, pertenecientes a la familia Spirrorchiidae. ^{Work (2005)} encontró huevos similares a los tipos 2, 3 y 4 con medidas de 135.00 × 67.00 μm, 276.00 × 37.00 μm y 45.00 × 30.00 μm, respectivamente; estos fueron identificados como helmintos pertenecientes a la familia Spirrorchiidae.

Algunos estudios que analizaron microscópicamente muestras de tejidos (bazo, pulmones, intestino, riñones y corazón) (^{Santoro et al. 2007b}) y muestras fecales de C. mydas (^{Santoro et al. 2020}) identificaron huevos similares a los tipos 3 y 4 de este estudio como correspondientes a huevos de helmintos espiroquidos (Digenea: Spirorchiidae) de los géneros Hapalotrema y Neospirorchis, respectivamente. ^{Jerdy et al. (2019)} también registraron la observación de huevos en forma de espiral y apariencia circular, similares a especies del género Neospirorchis, en tejido ocular de C. mydas. El hallazgo de huevos de helmintos de la familia Spirorchiidae en el examen coproparasitológico revela datos importantes para el estudio de la ecología de estos parásitos, ya que su ciclo de vida aún no está bien dilucidado (^{Chapman et al. 2019}).

Se encontraron e identificaron 4 tipos diferentes de huevos según la morfología y la morfometría en el examen coproparasitológico. Los huevos tipo 1 tienen las características de los huevos de helmintos de las familias Microscaphidiidae y Cladorchiidae, y los huevos de los tipos 2, 3 y 4 tienen características de los huevos de helmintos de la familia Spirrorchiidae.