Los nemátodos del género Meloidogyne, parásitos de plantas, causan pérdidas económicas significativas a nivel mundial (^{Abd-Elgawad y Askary, 2015}). Se han descrito cien especies del género Meloidogyne que parasitan plantas vasculares (^{Moens et al., 2009}). M. incognita es una de las especies con la más amplia distribución, seguida de M. javanica, M. arenaria, y M. hapla (^{Carrillo-Fasio et al., 2019}).

Sin embargo, M. enterolobii (= M. mayaguensis) se ha vuelto una de las especies más importantes del mundo en las últimas décadas debido a su gran agresividad (^{Castagnone-Sereno, 2012}), su potencial reproductivo, su amplia distribución geográfica, su gran rango de hospedantes que incluye tanto a plantas herbáceas como leñosas, y su habilidad de establecerse en plantas con genes de resistencia a otras especies de Meloidogyne spp., como algunos genotipos del tomate (Mi-1), papa (Mh), soya (Mir1) y pimiento morrón (N and Tabasco) (^{Castagnone-Sereno, 2012}). M. enterolobii ha sido reportado en África, Europa, Estados Unidos, Centroamérica y Sudamérica (^{Castagnone-Sereno, 2012}; ^{Moens et al., 2009}). Recientemente, en México, se reportó parasitando sandía (Citrullus lanatus) en Veracruz y chile (Capsicum annuum) en Sinaloa (^{Ramirez-Suarez et al., 2014}; ^{Villar-Luna et al., 2016}). En los estados de Sinaloa y Baja California Sur, M. enterolobii prevalece sobre M. incognita (^{Carrillo-Fasio et al., 2019}; ^{Romero et al., 2019}).

El manejo de Meloidogyne spp. se ha enfocado, sobre todo, en el control químico, la biofumigación del suelo, enmiendas y variedades resistentes (^{Cid del Prado-Vera et al., 2018}). Sin embargo, estos métodos de control no han sido suficientes para M. enterolobii, dadas las características intrínsecas de su biología. Por lo tanto, es importante seguir buscando otras alternativas de manejo para esta especie de nematodo. Una de las alternativas es el uso de compuestos nematicidas que se encuentran en el ambiente (^{Akhtar y Malik, 2000}). Por otra parte, una de las alternativas sustentables es el uso de bacterias endófitas tales como Serratia ureilytica, que ha sido evaluada in vitro contra Nacobbus aberrans (J2) y en plantas de chile infectadas, con resultados alentadores (^{Wong et al., 2021}).

Estos tipos de compuestos con actividad nematicida se han reportado en hongos del género Pleurotus (^{Barron y Thorn, 1987}), además de tener la habilidad de colonizar y degradar una gran veriedad de residuos lignocelulósicos y altos valores medicinales y nutritivos (^{Cohen et al., 2002}). Una toxina fue identificada en este género de hongos como ácido trans-2-decenedioico, con efectos nematicidas contra Panagrellus redivivus (^{Kwok et al., 1992}). También existen estudios con actividad contra fitoparásitos (^{Castañeda-Ramírez et al., 2020}). Además, ^{Heydari et al. (2006}) reportaron la presencia de una toxina en cinco especies de Pleurotus spp. con un efecto contra M. javanica (J2) en agua agar. Asimismo, la actividad proteolítica de P. ostreatus ha sido reportada en el nematodo de vida libre Panagrellus sp. (^{Genier et al., 2015}).

Además, se le ha atribuido propiedades antiparasíticas, principalmente cestocidas (^{Samsam-Shariat et al., 1994}) y nematicidas en el área del ganado (^{Pineda-Alegría et al., 2017}). Sin embargo, en el área agrícola es importante realizar estudios que contribuyan al desarrollo de bionematicidas naturales con base en hongos comestibles. La fracción PdR-2 del hongo comestible P. djamor ha sido reportado con actividad nematicida en larvas infecciosas (L3) en estudios in vitro de Haemonchus contortus (^{González-Cortazar et al., 2020}). Por este motivo, el presente estudio evaluó la actividad nematicida de la fracción PdR-2 de P. djamor contra J2s de M. enterolobii.

El presente estudio se llevó a cabo en el Laboratorio de Helmintología del Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Salud Animal e Inocuidad (CENID-SAI) del Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias (INIFAP), ubicado en Jiutepec, Morelos, México. Se obtuvieron los J2 de las agallas del tomate cv. ‘Rio Grande’ (cultivo monoxeno, población de Ahome, Sinaloa) en el Colegio de Postgraduados, Campus Montecillo, Texcoco. Se extrajeron huevos siguiendo la metodología de ^{Vrain (1977}) y se incubaron a 28±1 °C en cajas Petri con agua estéril destilada para obtener los J2.

Obtención de la fracción PdR-2 de P. djamor. Se obtuvo la fracción PdR-2 del extracto hidroalcohólico (etanol-agua 7:3) de P. djamor cepa ECS-0127 basidiomata. El extracto (30 g) fue adsorbido en 40 g de gel de silicio en fase normal (malla 70-230, Merck) y colocado en una columna cromatográfica de vidrio pre-envasada. El sistema de elución se llevó a cabo con diclorometano:metanol con los siguientes cambios al sistema: 100, 90:10, 70:30, 50:50 y 100%. Se recolectaron muestras que fueron concentradas en un rotavapor. Las fracciones se analizaron por cromatografía en capa fina y se juntaron de acuerdo a su factor de retención y sistema de elución. De este fraccionamiento se obtuvieron 22 fracciones, de las que las fracciones 11 a 18 formaron la fracción PdR-2 (^{González-Cortazar et al., 2020}).

Evaluación in vitro de la fracción PdR-2 de P. djamor contra J2 de M. enterolobii. Diferentes concentraciones de la fracción PdR-2 y 100 especímenes J2 de M. enterolobii se colocaron en una microplaca con 96 pocillos. Las concentraciones finales de la fracción fueron de 0.039, 0.078, 0.156, 0.132, 0.625 y 1.25 mg mL^-1 y los controles, que consistían en agua destilada y Levamisol (antihelmíntico comercial 5 mg mL^-1) en un volumen de 100 µL (n=4). Los J2 fueron expuestos por 24 h, después de lo cual se tomaron 10 alicuotas de 10 µL de cada repetición, y se contabilizó el número de individuos muertos y vivos. El número de individuos muertos se usó para calcular el porcentaje de mortalidad con la siguiente fórmula:

%mortalidad de nematodos=nematodos muertosnematodos muertos+ nematodos vivos×100

Los datos se analizaron con un análisis de varianza (ANDEVA) con el modelo linear general y una comparación de medias con la prueba de Tukey (*p ≤ 0.05). El software STATGRAPHICS Centurion XV, V. 15.2.06 se usó para los procedimientos estadísticos.

La mortalidad de los J2 de M. enterolobii aparece en el Cuadro 1. No se registraron individuos muertos al usar agua destilada y presentaron movimiento, tal como lo ilustra la Figura 1A. No obstante, con el antihelmíntico (Levamisol) se registró una mortalidad de 100% tras 24 h de exposición (Figura 1B) con diferencias estadísticamente significativas (*p ≤ 0. 05) con respecto a las concentraciones más bajas de la fracción PdR-2 (0.039, 0.078 y 0.156 mg mL^-1) y agua. La mortalidad para las concentraciones más bajas fueron de 40.3 a 65%. Por otro lado, las concentraciones de 0.156, 0.132, 0.625 y 1.25 mg mL^-1 de la fracción PdR-2 presentaron porcentajes de mortalidad más altos (76.8-86.3%) y éstos fueron significativamente diferentes al control de agua (*P≤ 0.05).

Figura 1. J2 de Meloidogyne enterolobii expuesto a H ₂ O y levamisol por 24 h, observados bajo un microscopio óptico (20X). A) J2 expuesto a H ₂ O y B) J2 expuesto a levamisol. 

Investigaciones recientes para el control de M. enterolobii se ha concentrado en la búsqueda de cultivos resistentes a este fitonemátodo, dado que esta especie puede reproducirse en diferentes cultivos que poseen los genes de resistencia disponibles en la actualidad para las especies principales de Meloidogyne. Algunos de estos genes son Me1-Me6, Mech1 y Mech2. Sin embargo, se ha reportado que M. enterolobii puede infectar a plantas con estos genes resistentes a Meloidogyne (^{Carrillo-Fasio et al., 2020}; ^{Philbrick et al., 2020}). Por lo tanto, otra alternativa sustentable para el control de este nemátodo podría ser el uso de compuestos aislados de hongos comestibles.

Varias especies de hongos comestibles pertenecientes al género Pleurotus han demostrado tener propiedades nematicidas. Tales estudios han sido desarrollados principalmente en el área ganadera, con el uso de modelos de nemátodos gastrointestinales de rumiantes pequeños, con lo que se reporta una nueva línea de investigación a ser tratada para demostrar su efectividad en el control sustentable de estos parásitos (^{Castañeda-Ramírez et al., 2020}). La actividad nematicida se atribuye a metabolitos secundarios tales como ácidos grasos aislados de especies de P. djamor (p. ej., ácido linoleico) (^{Pineda-Alegría et al., 2017}). Otros metabolitos secundarios, tales como polioles, trehalosa, manitol, escualeno, ácido esteárico y β-sitosterol, han sido aislados de P. eryngii (^{Cruz-Arévalo et al., 2020}). Con respecto a la fracción de PdR-2 obtenida de P. djamor (ECS-0127) en un estudio de ^{González-Cortázar et al. (2020)}, se reportó una actividad nematicida de 100% contra huevos y larvas infecciosas (L3) de H. contortus en experimentos in vitro. De manera similar, una evaluación in vivo de la fracción PdR-2 alcanzó una reducción de hasta 80% de la carga parasitaria de H. contortus, usando como modelo de estudio el jerbo Meriones unguiculatus. Por último, el compuesto responsable de la actividad nematicida de la fracción PdR-2 se identificó como alitol y un terpeno en proporción 9:1 por análisis espectroscópico de protón (1^H) y carbón (13^C) de resonancia magnética nuclear (RMN).

La mayoría de los trabajos de investigación en los que se ha explorado el uso de los metabolitos del hongo Pleurotus se han concentrado en Meloidogyne spp., tales como M. javanica (^{Heydari et al., 2006}; ^{Oka, 2001}). Por otra parte, para la especie reportada de manera reciente en México, M. enterolobii, se requiere investigación para su manejo. Por lo tanto, la presente investigación brinda información relevante. A una concentración de 0.132 mg mL^-1, los porcentajes de mortalidad mayores a 84% se obtuvieron en J2s de M. enterolobii. Resultados similares fueron reportados por ^{Li et al. (2007}), quienes aislaron tres metabolitos de extractos de P. ferulae con un efecto nematicida sobre Bursaphelenchus xylophilus y Panagrellus redivivus. De éstos, solo cheimonophyllon E registró una mortalidad de 84% sobre B. xylophilus a las 72 h, mientras que la fracción evaluada en este trabajo registró un porcentaje similar a las 24 h. Por lo tanto, la fracción PdR2 podría ser usada para el control sustentable de nematodos de importancia agrícola, ya que presentó un efecto nematicida sobre juveniles del segundo estadio de M. enterolobii.