Arch Neurocien Méx 2004; Vol. 9(1):03-10
ARTÍCULO ORIGINAL

 

INDICADORES DE ESTRÉS OXIDATIVO E INMUNOLÓGICOS EN PACIENTES CON ENFERMEDAD DE ALZHEIMER

 

MARÍA ELENA GONZÁLEZ FRAGUELA
MARÍA DE LOS ANGELES ROBINSON AGRAMANTE
TERESA SERRANO SÁNCHEZ
JUAN J. LIBRE
Centro Internacional de Restauración Neurológica, Laboratorio Neurobioquímica.

 

Correspondencia:
María Elena González Fraguela.
Centro Internacional de Restauración Neurológica, Laboratorio Neurobioquímica.
Ave. 25 No 15805, La Habana 11300,
Cuba.E-mail: rmunoz@infomed.sld.cu

 

Recibido: 9 julio 2003
Aceptado: 1 agosto 2003

 

RESUMEN

 

Introducción: numerosos son los fenómenos de regulación mutua entre el sistema inmune y el sistema nervioso central, cuyos mecanismos no son aún del todo conocidos. Sin embargo, se conoce de la influencia de fenómenos de regulación inmune y del metabolismo oxidativo en los procesos neurodegenerativos que acontecen en la enfermedad de Alzheimer (EA). Objetivos: nos propusimos con este trabajo, evaluar in vivo algunos indicadores inmunológicos y del metabolismo oxidativo en pacientes con el diagnóstico de EA y sujetos controles del mismo rango de edad. Método: las determinaciones incluyeron la estimación cuantitativa, por técnicas convencionales, de la actividad de las enzimas antioxidantes: catalasa (CAT) y superóxido dismutasa (SOD), así como la cuantificación sérica de lipoperóxidos (LPx). La evaluación inmunológica incluyó la estimación cuantitativa de los niveles séricos de interleuquina 1ß (IL 1ß) y del factor de necrosis tumoral
α (FNT α) para lo que se utilizaron kits comerciales (Kit Biosource Int, Bender Medsystem, NIBSC). Resultados: la exploración de los indicadores inmunológicos, mostró una reducción significativa de los niveles de FNTα en los pacientes con EA (t(40), 2.55,p<0.05) comparados con los controles del mismo rango de edad. Las alteraciones del metabolismo oxidativo, mostró un incremento significativo para ambas enzimas en los pacientes con EA con respecto a los sujetos controles, la actividad SOD ( 3.7 ± 2 U/ml vs 0.18 ± 0.7 U/ml ), mientras la actividad CAT (99.4 ± 62.5 KU/l vs 15.2 ± 4.2 KU/l ). Los LPx fueron significativamente más bajo en los pacientes con EA (0.7± 0.1 nmol/l) comparado con los controles (1.5± 0.4 nmol/l). La matriz de correlación de las variablesindividuales para cada paciente permiten inferir la probable influencia integrada de los hallazgos encontrados en los eventos neuropatológicos que acontecen en la enfermedad.

PALABRAS CLAVES: catalasa, enfermedad de Alzheimer, factor de necrosis tumoral, estrés oxidativo.

 

ABSTRACT

The central nervous system and the immune have mutual regulation but not all the mecanisms are known. However the mechanisms between metabolism and immune regulation are well known as are the oxidative process in the neurodegenaration that exist in Alzheimer disease (AD). In this work, we try to evaluate in vivo some immune factors and oxidative process with a control group. The determination included the activiting of antioxidant enzime catalasa (CAT), superoxid dismutase (SOD) and the determination of lipoperidoxins (LPX). The immunologic evaluation included the cuantitative estimation of seric levels of interleukin Iß (IL Iß) and tumor necrotic factor α (FNTα) with the use of comertial kits (Bender Medysistem (HIBSC) Results: the exploration of inmune factors demostrated a reduction of the levels of FNTα in the patients with EA (t(40), 2.55 p< 0.05) in comparation with the controls of the same age. The alterations of the oxidative metabolism demostrated a significant increase in both enzimes in patients with AD in comparation with control group, the SOD activity (3.7 ± 2 v/ml vs 0.18 ± 07 v/ml) while the activity of CAT (99.4± 62.5 kv/1 vs 4.2 kv/ 1) The LPX was lower in patients with EA (0.7± 0.01 nmol/1). The matrix of variations in the patients correlation might be caused by the influence of the different neuropathological changes that occur during the disease.

KEY WORDS: catalase, Alzheimer disease, tumor necrotic factor, oxidative stress.

 

La enfermedad de Alzheimer es la principal causa de demencia senil y afecta a un 7 % de la población mayor de 65 años por lo que, dado el envejecimiento de la población mundial, constituye uno de los problemas de salud más importantes en la actualidad. Esta enfermedad es un trastorno neurodegenerativo complejo y heterogéneo del sistema nervioso central, desde el punto de vista clínico los pacientes presentan síntomas neuropsiquiátricos tales como demencia, confusión, irritabilidad, deterioro del lenguaje y de la memoria espacial ¹ . Se caracteriza neuropatológicamente por pérdida neuronal en varias áreas corticales, sobre todo del lóbulo temporal y la corteza entorrinal, así como en el complejo colinérgico del cerebro basal anterior. Este patrón topográfico de cambios provoca la interrupción de las principales aferencias y eferencias del hipocampo, donde también se produce una marcada pérdida neuronal en el área CAl y el subiculum. Se ha sugerido que este aislamiento anatómico del hipocampo es el causante de los déficits cognitivos (demencia) asociados a esta enfermedad ^2-4.

El papel de las especies reactivas de oxígeno (ERO) referido en la patogénia de la EA parece involucrar un incremento del estado pro-oxidante en el cerebro de estos pacientes ⁵ , avalado por un cúmulo importante de evidencias clínicas y experimentales que sustentan su papel como causa de los cambios del estado redox que ocurren en el cerebro envejecido y en la EA ⁶ . Varias han sido las alteraciones del metabolismo oxidativo referidas en la EA, así se señalan cambios en la peroxidación lipídica con afectaciones de las membranas celulares en cerebros de pacientes, se han encontrado déficits en la respiración mitocondrial y se afecta en especial la actividad del complejo IV (citocromo oxidasa) en la corteza cerebral de los enfermos de Alzheimer ⁷ . Mutaciones en el ADN mitocondrial que conduzcan a una disfunción de la cadena respiratoria, se han propuesto como posibles causas de la forma esporádica de la enfermedad ⁸.

Por otra parte, se ha denominado excitotoxicidad lenta al aumento en la concentración extracelular de aminoácidos excitatorios que tiene lugar como consecuencia de un fallo energético ^9,10 para diferenciada de la causada por excitotoxinas exógenas. Así, la excitotoxicidad lenta puede estar presente en la neurodegeneración asociada a la enfermedad Alzheimer, teniendo en cuenta las deficiencias energéticas descritas.

Desde hace muchos años se ha argumentado la participación del sistema inmune en la neuropatología de la enfermedad de Alzheimer, basado en estudios que evidencian la presencia de un proceso inflamatorio crónico activo en el cerebro de estos enfermos ^11,12 . El proceso de activación del Sistema Inmune, induce la síntesis de mediadores solubles por células mononucleares inmunocompetentes, este fenómeno que tiene lugar durante el desarrollo de una respuesta auto inmune^13,14 . En este sentido, niveles elevados de IL-l e interlequina 6 (IL-6) han sido reportados en el cerebro de estos enfermos, del mismo modo que se señalan la presencia o no de modificaciones en los niveles circulantes de otros mediadores solubles como el FNTα, IL-l, IL-2 e IL-6 ^15-19.

En los últimos años, se ha postulado por varios autores que los efectos beneficiosos del tratamiento con factores neurotróficos en modelos experimentales de neurodegeneración pueden estar mediados por una modulación de las defensas antioxidantes ^20,21 , y que una de las dianas finales de la acción neurotrófica lo constituyen los sistemas de defensa antioxidante ^22,23 . Al mismo tiempo, las ERO forman parte de mecanismos fisiológicos de señalización intracelular como es el caso de factores de transcripción como el NFκB y la AP-l, un factor de transcripción del gen del factor de crecimiento nervioso ^24-26 , como una vía, en que pudieran estar involucradas en la muerte neuronal causante del trastorno cognitivo que acompaña a la enfermedad.

El siguiente trabajo dirige su atención a la determinación de los niveles circulantes de citoquinas proinflamatorias, y a la evaluación indirecta del estado de estrés oxidativo en pacientes con el diagnóstico de EA probable y controles normales (CN) del mismo rango de edad, en interés de evaluar la interacción probable de estas variables y su implicación en la neuroptología de la enfermedad.

 

MATERIAL Y MÉTODOS

El diagnóstico de EA fue designado como "EA probable de acuerdo con los criterios internacionalmente aceptados del Grupo de trabajo de la NINCDSADRDA" ²⁷ . Pacientes o controles con historia de, trastornos psiquiátricos o enfermedad orgánica crónica (enfermedades sistémicas severas, mal nutrición, cáncer, infecciones, hepatopatías crónicas) con repercusión sobre el sistema nervioso central o niveles elevados de proteína C reactiva, fueron excluidos del estudio. Al mismo tiempo, todos los sujetos fueron sometidos al exámen mínimo del estado mental "MM-SE" ²⁸ . Los pacientes fueron clasificados de acuerdo al grado de severidad de la demencia, como EA ligera, moderada y severa.

El comité de ética del Centro Internacional de Restauración Neurológica ClREN aprobó el estudio.

Obtención de las muestras
Sangre periférica:

Se tomaron 10 ml de sangre por punción venosa en la región antecubital previa asepsia de la región. Se dejó coagular y luego se extrajo el suero, el cual se guardó a -70 grados Celcios (C) hasta su uso.

Determinación de la actividad enzimática de la CAT

La actividad enzimática se realizó por el método de Aebi, H ²⁹ . Se utilizaron como soluciones de trabajo el buffer fosfato de potasio a 0.06 M a pH 7.4 Y a partir de esta solución se establecerán 3 blancos: blanco 1 : buffer fosfato a 0.06M y H202 a pH 7.4 (buffer sustrato), blanco 2: buffer sustrato, molibdato de amonio y buffer fosfato de potasio a 0.06 M pH 7.4, blanco 3: buffer fosfato de potasio 0.06 M a pH 7, molibdato de amonio y fosfato de potasio a 0.06 M pH 7.4. Seguidamente, se incubó 1 hora a 37 ^º C y pasado este tiempo, se detuvo la reacción de la enzima presente en la muestra. Se realizó la lectura en el espectrofotómetro (405 nm). Los valores se expresaron en U/ml, según la siguiente ecuación:

Am = absorbancia de la muestra, ABl= absorbancia blanco 1, AB2 = absorbancia blanco 2, AB3 = absorbancia blanco 3.

Determinación de la actividad enzimática de la SOD

La actividad de la SOD se realizo por el método de Marklund ³⁰ . La autooxidación del pirogalol en soluciones aeróbicas se lleva a cabo por el anión superoóxido (O^2-), un proceso que es inhibido por la SOD. El grado de inhibición puede ser usado para evaluar la cantidad de SOD en la muestra.

Desarrollo del ensayo: A 900 μl de la solución A (50 mM de buffer tris acetato y 1mM EDTA a pH 8.2) se le añaden 50 μ-ll de agua o suero o el estándar de SOD. La reacción se inició por la adición de los 50 μl de pirogalol. Se mezcló y se transfirió inmediatamente a una cubeta, se monitoreó el cambio de la absorbancia a 420 nm durante 1 min. La diferencia de absorbancia entre el blanco y las muestras que contienen SOD se expresó como el porciento de inhibición de auto-oxidación. La cantidad de SOD por milílitro de la solución muestra que resulta de un 50 % de inhibición se definió como una unidad de actividad enzimática.

La cuantificación de los niveles de LPx en suero

Este procedimiento ³¹ se establece a partir de una curva estándar con malonildialdehido (MDA) y se contó para el estudio con una tabla de lectura de absorbancias según un patrón de MDA de concentración conocida. La muestra y el blanco, se prepararon por triplicado, a 100 μl de suero se le añadió, 1500 μl de ácido sulfúrico a 0.08 N y 250 μl de ácido fosfotúngstico al 10 %, se mezclaron y se dejaron reposar por 5 min, luego se centrifugó a 3000 rpm, 10 min. Se recuperó el precipitado y se le añadió 1000μl de ácido sulfúrico a 0.08 N Y 250 μl de ácido fosfotúngtico al 10%, se realizó una segunda centrifugación en iguales condiciones y se desechó el sobrenadante, al precipitado se le añadió 1500 μl de agua destilada y 1000 μl de ácido tiobarbitúrico (TBA) al 0.67 %, se mezclaron y se incubaron a 100 ^oC por una hora, para concluir se añadió a las muestras, previo enfriamiento, 2000 μl de n-butanol, se centrifugaron a 3000 rpm por 20 min. La lectura se realizó en el espetrofotómetro a 532 nm. La concentración de MDA se calculó según la ecuación que sigue y los resultados se expresaron en nmol\ L:

DOm = Densidad Óptica de la muestra, Cp = Concentración del patrón de MDA, DÓp = Densidad Óptica del patrón de MDA.

Determinación cuantitativa de citoquinas circulantes

Las muestras de suero fueron evaluadas para la determinación cuantitativa de los niveles de IL 1ß y FNTα, aplicando un método inmunoenzimático de doble sitio, "ELISA", utilizando kits comerciales (Kit Biosource Int, Bender Medsystem, NIBSC). Los resultados se expresan como el valor de la media ± el error estándar de la media.

Procesamiento estadístico

Los datos fueron recogidos en tablas confeccionadas al efecto. El análisis estadístico se realizó utilizando el programa Statistica (versión 4.5), windows 98. Primero se verificó la distribución normal de losdatos mediante la prueba de Kolmogorov-Smirnov. Para el análisis de las diferencias entre los grupos se aplicó el análisis de varianza ANOVA. Para la evaluación de las diferencias significativas entre los grupos para los niveles de citoquinas se aplicó la prueba de t de student, y para el análisis de las diferencias con respecto a la actividad enzimática se aplicó la prueba de Mann- Whitney ¹ . El nivel de significación para las variables evaluadas fue de p<= 0.05, el nivel de interacción entre las variables se analizó mediante la prueba de correlación de Spearman. Los resultados se presentan en gráficos. Estos últimos confeccionados por el programa Graph Pad Sofware Inc (Prism versión 3.6).

 

RESULTADOS

Los resultados de la estimación de la actividad enzimática antioxidante en los sujetos con EA reveló la existencia de diferencias significativas entre los dos grupos experimentales para todas las variables estudiadas, demostrando la existencia de una mayor actividad de las enzimas antioxidantes de forma significativa en los pacientes con respecto a los CN, en el caso de la SOD los enfermos mostraron valores de 3.7 ± 2 U/ml con respecto al valor control de 0.18± 0.7 U/ml, la actividad de la CAT presentó un aumentode 99.4 ± 62.5 KU/l en comparación con los controles de 15.2 ± 4.2 KU/l, y una disminución significativa de las concentraciones de MDA en los pacientes (0.7±0.1 nmol/l) al compararlos con los individuos controles
1.5 ± 0.4 nmol/l) (figura 1).

El indicador que tuvo la mayor diferencia entre ambos grupos fue la cuantificación de la actividad enzimática de la CAT. No se observaron diferencias significativas entre los indicadores de estrés oxidativo y las variables clínicas consideradas.

El análisis de interacción entre las variables se muestran en la figura 2. El valor significativo de la interacción entre las enzimas SOD y CAT en sujetos controles en contraste con una interacción no significativa de las mismas en los pacientes con EA está en correspondencia con un desbalance del metabolismo oxidativo existente en estos enfermos.

Los resultados de los niveles circulantes de IL 1ß y FNTα. (figura 3) no mostraron diferencias significativas entre los grupos para la IL 1ß. Si se observó una disminución significativa en los niveles circulantes del FNTα en el grupo de pacientes con EA comparado con los CN del mismo rango de edad (t (40), 2.55,p<0.05). Los niveles circulantes del FNTα mostró una tendencia a la reducción de los niveles de esta variable no relacionada con la severidad de la enfermedad, pacientes con EA ligera (MMSE>20) mostraron una reducción mayor de este factor (0.256±0.12pg1ml) que aquellos con EA moderada (MMSE 19-10) (0.385±0.07pg/ml), comparado con los CN (0.57 ± pg/.11ml).

En un segundo análisis de interacción entre las variables bioquímicas e inmunológicas se observó una correlación inversa estadísticamente significativa entre la CAT y el FNTα entre pacientes y controles.

 

DISCUSIÓN

Como se sabe la existencia de altas concentraciones de O₂μ y de peróxido de hidrógeno (H₂ O₂₎ han sido descritas para los pacientes con EA ³² . La CAT, involucrada en la destrucción protectora del H₂ O₂ generado durante el metabolismo celular, se caracteriza por su alta capacidad de reacción y una baja afinidad por el sustrato ³³ , de ahí que se requieran de altas concentraciones de H₂ O₂ para su máxima actividad. El aumento de la actividad de esta enzima en este estudio sugiere un estado de defensa frente a las altas concentraciones de H₂O₂ existentes en estos pacientes y demuestra además un profundo estado de estrés oxidativo en estos enfermos. El aumento significativo de la SOD en los pacientes con respecto a los controles coincide con las altas concentraciones de H₂O₂ halladas en nuestro estudio.

Nuestro trabajo muestra además un efecto concertado de las enzimas antioxidantes SOD y CAT dado por un incremento simultáneo de sus actividades enzimáticas, útil para el mantenimiento de la homeostasis antioxidante ³⁴ , a favor de la no observación de este nivel de correspondencia de la actividad enzimática en sujetos con EA. Es de vital importancia la acción concertada entre ambas enzimas para mantener las concentraciones "fisiológicas" de estas especies iónicas inestables, generadas en diversos procesos metabólicos y fundamentalmente en la respiración celular ³⁵ . La no existencia de esta correlación en la actividad de las mismas en los enfermos de Alzheimer apunta a una probable implicación de este hallazgo en la neuropatología de la enfermedad, este análisis en esta entidad, poco abordada en la literatura, confirma la probable contribución de estos factores en la disregulación del metabolismo oxidativo atribuídos a la neuropatología de la EA.

Las citoquinas, sustancias que actúan autorregulándose unas con otras, inducen o inhiben el proceso de inflamación a través de un sistema de señales, al tiempo que forman una vía compleja interactiva que ejerce un efecto inmunomodulatorio no mutuamente excluyente en la fisiopatología de enfermedades diversas ^36,37 . La reducción de los niveles de FNTα observada en estos enfermos está en concordancia con estudios que refieren una disminución de los niveles circulantes de citoquinas proinflamatorias en la EA del mismo modo que se ha referido también la no modificación en estos enfermos de estos mediadores solubles a nivel sistémico ^38-41 . Los resultados obtenidos apoyan la hipótesis acerca de la disregulación del FNTα a nivel sistémico en la EA al tiempo que corroboran la contribución probable de las citoquinas inflamatorias en la neuropatología de la EA.

Tanto el O₂μ como el H₂O₂ através de la formación del radical OH, pueden afectar de manera directa o indirecta los procesos de síntesis de proteínas y también desde el punto de vista molecular las ERO, y específicamente el H₂O₂ , inducen cambios en la expresión de genes que modulan la actividad de moléculas como el FNTα, la IL- 1 y el interferon γ en condiciones de estrés oxidativo ⁴² , lo que permite inferir en primer lugar que la disminución en las concentraciones de FNTα encontrados en los pacientes estudiados esta en correspondencia con un aumento significativo de la actividad enzimática CAT que presupone altas concentraciones de H₂O₂ y la eficiente eliminación enzimática de esta especie reactiva, lo que pudiera explicar al menos por esta vía la disminución en las concentraciones de esta citoquina y la interacción significativa existente entre estas variables en nuestro estudio (figura 4).

A su vez, el H₂O₂ incrementado en estos pacientes podría afectar la unión y/o viabilidad de factores de transcripción (NFκB) que regulan la expresión y síntesis de enzimas antioxidantes y modular por tanto la actividad de la SOD, la CAT y también de la glutatión reductasa ⁴³ . Por último los altos niveles de actividad enzimática antioxidante observados en los pacientes con EA en comparación con los sujetos controles, apoya la hipótesis que presupone a las ERO como mensajeros celulares y no como simples agentes deletéreos ^44,45.

Otro aspecto que pudiera estar relacionado con las bajas concentraciones de FNTα en los pacientes con EA es la existencia de bajas concentraciones de MDA en los mismos, este hallazgo pudiera estar relacionado también con la elevada actividad CAT que disminuye las posibilidades de H₂O₂ "libre" evitando así la formación del radical OH, principal promotor del daño oxidativo a las membranas proceso muy conocido como peroxidación lipídica.

El radical OH genera peroxidación lipídica por ataque a los ácidos grasos insaturados, dando inicio a una cascada compleja de eventos que conducen a la formación de reactivos oxidantes inestables, subproductos tóxicos de larga duración como algunos hidroperóxidos y aldehídos y mediadores inflamatorios biológicamente activos como el FNTα ⁴⁶.

La peroxidación lipídica produce modificaciones de enzimas, receptores y proteínas formadoras de canales causando alteraciones en los sistemas transportadores que provocan una elevada permeabilidad para el calcio, lo que activa la fosfolipasa A2 y se genera la liberación del ácido araquidónico de fosfolípidos de membrana, el exceso de este factor provoca daño celular, en el caso de las neuronas está vinculado con la recaptación del glutamato, neurotrasmisor implicado en la generación de EO a través de una cascada de activación de receptores específicos ⁴⁷ . El FNTα esta muy relacionado con el metabolismo oxidativo a través de la activación de la fosfolipasa A2, donde se generan hidropéroxidos alquilícos a través de las lipoxigenasas en una reacción análoga a la de Fenton, los cuales son tan dañinos como el radical OH y también producen peroxidación lipídica de las membranas ⁴⁸.

 

CONCLUSIONES

1. Existen diferencias entre los niveles de actividad enzimática SOD y CAT, así como los niveles de MDA y FNTα entre pacientes con EA y controles del mismo rango de edad.

2. En los individuos controles se observó un efecto concertado de la actividad de las enzimas antioxidantes que se pierde en los pacientes con EA, hallazgo que corrobora la existencia de un desbalance del metabolismo oxidativo en esta enfermedad.

3. En los pacientes con EA existe una correlación inversa significativa entre la actividad enzimática CAT y las concentraciones del FNTα lo que apunta a una posible modulación inmune por el estrés oxidativo, estrechamente ligado a los procesos de degeneración neuronal que acontecen en esta enfermedad.

 

REFERENCIAS

1. Henderson AS. Alzheimer's disease in its epidemiological contex. Acta Neurol Scand 1993; Suppl 149: 1-3.         [ Links ]

2. Price DL. Aging of the brain dementia of the Alzheimer type. In: ER. Kandel, JH, Schwartz, TM. Jessell (Eds.) PrincipIes of neural science. McGraw Hill, New York, 2000.         [ Links ]

3. Selkoe DJ, Lansbury PJ. Biochemistry of Alzheimer's and prion diseases. In: G.J. Siegel, BW. Agranoff, R Wayne Albers, SK Fisher Uhler (Eds.) Basic neurochemistry: molecular, cellular and medical aspects, Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1999.         [ Links ]

4. Walsh TJ, Opello KD. Neuroplasticity, the aging brain and Alzheimer's disease. Neurotoxicology 1992;101-10.         [ Links ]

5. Sohal RS. 1:he free radical hypothesis of aging: an appraisal of the current status. Aging Clin Exp Res 1993; 5: 3-17.         [ Links ]

6. Sohal RS. The free radical hypothesis of aging: an appraisal of the current status. Aging Clin Exp Res 1993; 5: 3-17.         [ Links ]

7. Parker WD, Parks J, Filley CM. Electron transport chain defects in Alzheimer's disease brain. Neurology 1994; 44:1090-96.         [ Links ]

8. Harman D. Free radical theory of aging. Age 1996;18: 97-119.         [ Links ]

9. González-Fraguela ME. Estrés oxidativo en las neurodegeneraciones. Rev Neurol 1999;28(5):504-11.         [ Links ]

10. Broulliet E, Hantraye P, Ferrante RJ, Dolan, R, Leroy-Willig A, Beal MF. Chronic mitochondrial energy impairment produces selective striatal degeneration and abnormal choreiform movements in primates. Proc Natl Acad Sci 1995; 92: 7105-9.         [ Links ]

11. Blennow K, Wallin A, Fredman P, Karlsson Gottfries CG, Svennerhdro L. Blood-brain barrier disturbance in patients with Alzheimer' s disease is related to vascular factors. Acta Neurol Scand 1990;81:323-6.         [ Links ]

12. McGeer PL, Akiyama H, Itagaki S, McGeer EG. Immune system response in Alzheimer's disease. Can J Neurol Sci 1989;16:516-27.         [ Links ]

13. Tooyama, Kimura H, Akiyama H, McGeer PL . Reactive microglia express class I and class 11 mayor histocompatibility complex antigens in Alzheimer's disease. Brain Res 1990;523:273-80.         [ Links ]

14. Robinson MA, Contreras D A, Sanchez S T, Mc Rae A. T Activation markers from cerebrospinal fluid of Alzheimer's disease patients. Alzh Dis Rev 1998, 3:113-6.         [ Links ]

15. Griffin WST, Stanley LC, Ling C, White L, MacLeod V, Perrot L.J, et al. Araoz CBrain interleukin 1 and S-lOO immunoreactivity are elevated in Down syndrome and Alzheimer disease. Neurobiology 1989;86: 7611-5.         [ Links ]

16. Fillit H, Ding W, Buce L. Elevated circulating tumor necrosis factor levels in Alzheimer' s disease. Neurosci Lett 1991;129:318-20.         [ Links ]

17. Sing K V, Guthikonda P. Circulating cytokines in Alzheimer's disease. J Psychiat Res 1997;31:657-60.         [ Links ]

18. Cababelos R, Alvarez XA, Franco-Masida A, Femandez-Novoa L, Caamano J. Serum tumor necrosis factor (TNF) in Alzheimer' s disease and multi-infarct dementia. Methods Find. Exp Clin Pharmacol 1994;16:29-35.         [ Links ]

19. Esumi E, Araga S, Takahashi R. Serum interleukin 2 levels in patients with dementia of the Alzheimer's type. Acta Neuropatologica Scandinavica 1991;84: 65-7.         [ Links ]

20. Ficher W, Wictorin K, Biorklund A, Willianms L,R, Varon S, Gage FH. Amelioration of cholinergic neuron atrophy and spatial memory impairment in aged rats by nerve growth factor. Nature 1987; 329:65-8.         [ Links ]

21. Pan Z, Perez-Polo JR. Role of nerve growth factor in oxidant homeostasis: glutathione metabolism. J Neurochem 1993;63: 1713-21.         [ Links ]

22. Jackson GR, Apffel L, Werrbach-Perez K, Perez-Polo, JR. Role of nerve growt factor in oxidant-antioxidant balance and neuronal injury. J Neurosci Res 25;1990: 360-8.         [ Links ]

23. Mattson MP, Lovell MA, Furukawa K, Markesbery WR. Neurotrophic factors attenuate glutamate-induced accumulation of peroxides, elevation of intracelular Ca2+ concentration, and neurotoxicity and increases antioxidant enzyme activities in hippocampal neurons. J Neurochem 1995; 65: 1740-51.         [ Links ]

24. Greenlund LJS, Deckbert TL, Johnson EM. Superoxide dismutase delays neuronal apoptosis: a role for re active oxygen species in programmed neuronal death. Neurol 1995; 14:303-5.         [ Links ]

25. Luo Y, Hattori A, Muñoz J, Qin ZH, Roth GS. Intrastriatal dopamine injection induces apoptosis through oxidation involved activation oftranscription factors AP-1 and NF-kappaB in rats. Mol Pharmacol 1999; 56: 254-2.         [ Links ]

26. Mattson MP, Culmsee C, Yu Z, Camandola S. Roles of nuclear factor kB in neuronal survival and plasticity, J Neurochem 2000; 74: 443-56         [ Links ]

27. McKhann G, Drachman D, Folstein M, Katzman M, Price D, Stadlan EM. Clinical diagnosis of Alzheimer's disease: report of the NINCDS-ADRDA work group under the auspices of department of Health and Human services task force on Alzheimer's disease. Neurology 1998;34: 939-44.         [ Links ]

28. Folstein MF, Folstein SE, McHugh PR, "Mini-Mental state". A practical methods for grading the cognitive state of patients for the clinician. J Psychiatr Res 1975; 12: 189-98.         [ Links ]

29. Aebi H. Catalase in vitro. Methods Enzimol1984; 105:121-6         [ Links ]

30. Marklund J. Involvement of superoxide anion radical in autoxidation of pirogallol as a convenient assay for superoxide dismutase. Eur J Biochem 1992;47: 469-74.         [ Links ]

31. Nakata M, Ohkawa H. Enzyme inmunoassay with monoclonalantibody for enviromental contaminants. Tapa Kushitsu Kakusan Koso (Japan) 1996; 41:14; 2132-8.         [ Links ]

32. Harman D. Free radicaltheory ofaging Age18; 1996; 97-119.         [ Links ]

33. Floyd RA, Camey JM. Free radical damageto protein andDNA. Mechanism involved and relevant observation on brain undergoing oxidative stress. Ann Neurol 1992; 32: S22.         [ Links ]

34. Dringen R, Kussmaul L, Gutterer JM, Hirrlinger J, Hamprecht B. The glutathione system of peroxide detoxification is less efficient in neurons than in astroglial cells. J Neurochem 1999; 72: 2523-30.         [ Links ]

35. Coyle JT, Puffarcken P. Oxidative stress, glutamate and neurodegenerative disorders. Science 1992;262: 689-94.         [ Links ]

36. Del Bo R, Angeretti N, Lucca E, De Simoni MG, Forloni G.Reciprocal control of inflammatory cytokines, IL-l and IL- 6, and 1β-amyloid in cultures. Neurosci Lett 1995; 188: 710-4.         [ Links ]

37. Arai K, Lee F, Mijayima A, Scichioro M, Naoko A and Ykota T. Cytokine coordinatorrs of inmune and inflamatory response. Ann Rev Bioche 1990; 59: 783-836.         [ Links ]

38. Venters DH, Dantzer R, Kelley WK. A new mechanism of neurodegeneration: a proinflammatory cytokine inhibits receptor signalling by a survival peptide. Proc Natl Acad Sci U.S.A. 1999; 96:9879-84.         [ Links ]

39. Alvarez XA, Franco A, Fernandez-Novoa L, Cacabelos R. Blood levels of histamine IL - 1 beta and TNF alfa in patients with mild to moderate Alzheimer's disease. Mol Chem Neuropatol 1996;29: 237-55.         [ Links ]

40. Engelborghs S, De Brobander M, De Cree J, D'Huuge R, Goertss H. Unchanged levels of interleukins, neopterin, interferon - y and tumor necrosis factor - a in cerebrospinal fluid of patients with dementia of alzheimer' s type. Neurochem Int 1999; 34: 523-30.         [ Links ]

41. De Simoni MG, De Luigi A, Gemma C, Sironi M, Manfridi A. Modulation of systemic interleukin - 6 induction by central interleukin. Am J Physiol 1993; 265: R739-42.         [ Links ]

42. Storz G, Tartaglia LA, Ames BN. Transcriptional regulator of oxidative stress inducible genes: Direct activation by oxidation. Science 1990; 284:189-94         [ Links ]

43. Desagher S, Glowinski J, Premont J. Astrocytes protect neurons from hydrogen peroxide toxicity. J Neurosci 1996; 16:2553-62.         [ Links ]

44. Sánchez A, Alvarez AM, Benito M, Fabrega. Apoptosis induced by transforming growth factor- in fetal hepatocyte primary cultures. J Biol Chem 1996; 271: 7416-22         [ Links ]

45. Abate C, Patel L, Rauscher FJ, Curran T. Redox regulation of fos and jun binding in vitro. Science 1990; 249:1157-61.         [ Links ]

46. Wong GR, Kaspar RR, Vehar G. Tumor necrosis factor and lymphotoxin: Protection against oxidative stress through induction of Mn SOD. Ed Swizerland U. FeigeBirkhauser Verlag Basel 1996.         [ Links ]

47. Szalhowsfi M, Barbour B, Attwell D. Glutamate release by reversed glutamate uptake is inhibited by arachidonic acid. In Teiehberg - Tursky, ed. Excitatory aminoacid and second messengers systems. Berlin Springer - Verlag, 1994.         [ Links ]

48. Aggarwal BB. Ruman tumor necrosis factor. Production, purification and characterization. J Biol Chem 1985; 260: 2345-54.         [ Links ]