Resumo

ANTONIO-PEREZ, A.; ALDAZ-MARTINEZ, L. M.; MENESES-ACOSTA, A.  e  ORTEGA-LOPEZ, J.. Replegamiento de lizosima asistida por chaperonas moleculares inmovilizados en celulosa: las condiciones operativas que afectan los rendimientos de replegamiento. Rev. Mex. Ing. Quím [online]. 2014, vol.13, n.1, pp.83-91. ISSN 1665-2738.

Las proteínas recombinantes expresadas en Escherichia coli en muchas ocasiones se acumulan en forma de cuerpos de inclusión (IBs) por lo que para recuperar la actividad biológica de éstas, es necesario solubilizarlas de los IBs y llevar a cabo su replegamiento, proceso que representa una etapa limitante en la producción de proteínas recombinantes. Metodologías como la diálisis, dilución, uso de chaperones moleculares y técnicas cromatográficas, se han implementado con éxito en el laboratorio. Recientemente, para facilitar el uso de chaperones, se demostró que el dominio apical de GroEL (AD), y las oxidoreductasas DsbA y DsbC inmovilizadas en celulosa, asistieron eficientemente el replegamiento de rodanasa y lisozima. Sin embargo, para mejorar su potencial uso a una escala de producción, se requiere conocer cómo afectan las condiciones de operación y aditivos en los rendimientos de plegamiento. En este trabajo, evaluamos la cinética de replegamiento de lisozima asistida por dominio apical de GroEL (AD), y las oxidoreductasas DsbA y DsbC, solubles o inmovilizadas en celulosa usando diferentes concentraciones de lisozima, glicerol, GdnHCl y β-mercaptoethanol (β-ME), así como diferentes relaciones molares de chaperón: lisozima y la ausencia de un par redox. Estos resultados reportados pueden contribuir al diseño de estrategias para mejorar el uso de los chaperones molecular en el replegamiento de proteínas expresadas como cuerpos de inclusión.

Palavras-chave : replegamiento de proteínas; cuerpos de inclusión; chaperones inmovilizados; celulosa; lisozima.

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