Abstract

ACATZI, Abraham; GALVEZ, Amanda; PLASENCIA, Javier  and  QUIRASCO, Maricarmen. Evaluación de métodos de extracción de ADN para el análisis de OGM en el monitoreo de granos en México: Parte II: cuantificación por PCR en tiempo real. Agrociencia [online]. 2014, vol.48, n.1, pp.35-52. ISSN 2521-9766.

Por su especificidad y alta capacidad de procesamiento, los métodos basados en PCR en tiempo real son adecuados para el monitoreo de los organismos genéticamente modificados (GM) en el campo o en el comercio de granos, para cumplir con las regulaciones federales sobre bioseguridad. En la primera parte de este estudio, el ADN extraído de diferentes tejidos de maíz (Zea mays L.) mediante varios protocolos de purificación comerciales disponibles en México, se evaluó en términos de calidad como sustrato molde para PCR en punto final. En esta segunda parte, las preparaciones de ADN obtenidas de granos, por medio de los mismos protocolos comerciales, se probaron en PCR cuantitativa (qPCR) usando las técnicas TaqMan y SYBR Green. El rango dinámico lineal, la eficiencia de amplificación y la precisión se evaluaron usando criterios qPCR recomendados para validación. Los resultados mostraron que la complejidad química de los tejidos vegetales, como los granos, requiere un protocolo de purificación eficaz para la cuantificación consistente y confiable por PCR. La relación A₂₆₀/₂₈₀ y el análisis del ADN en geles de agarosa se recomiendan como criterios preliminares -pero no exclusivos- de la calidad del ADN porque la capacidad de amplificación del ADN no se evidencia con estos procedimientos. Dos de los métodos probados produjeron ADN de buena calidad como lo revela el análisis de rango dinámico lineal. El tercer método analizado dio resultados inexactos debido a la presencia de inhibidores de la PCR endógenos de los granos que impidieron una cuantificación adecuada del ADN. Como conclusión, la química TaqMan mostró ser más susceptible a la presencia de impurezas que SYBR Green, a pesar de que la amplificación podría lograrse con esta última, la cuantificación puede ser inexacta. Las membranas de unión al ADN de sílica generaron las preparaciones de ADN más adecuadas para la cuantificación por PCR de los granos de maíz GM.

Keywords : PCR cuantitativa; inhibición de PCR; maíz GM; organismos genéticamente modificados (OGM); calidad de ADN.

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