Resumo

MARTINEZ-HERNANDEZ, Aída; MENA-ESPINO, Ma. Esther; HERRERA-ESTRELLA, Alfredo H.  e  MARTINEZ-HERNANDEZ, Pedro. Construcción de bibliotecas de ADNc y análisis de expresión génica por RT-PCR en agaves. Rev. latinoam. quím [online]. 2010, vol.38, n.1, pp.21-44. ISSN 0370-5943.

México es el centro de origen y diversificación de los agaves, un cultivo agroindustrial con enorme valor cultural en este país. Los agaves poseen relevantes características biológicas como su gran tolerancia a estrés abiótico, que les permite desarrollarse bajo condiciones ambientales extremas; o su metabolismo secundario, mediante el cual producen moléculas de interés biotecnológico. Sin embargo, las herramientas necesarias para realizar estudios de fisiología molecular, o para determinar las bases moleculares sobre las que subyacen las particulares capacidades metabólicas de los agaves, no han sido desarrolladas. En este trabajo evaluamos la efectividad de métodos comerciales de extracción de ARN total y purificación de ARNm para la construcción de bibliotecas de ADNc a partir de diferentes tejidos de A. tequilana, proceso que describimos en detalle. También reportamos secuencias y métodos para análisis de expresión por RT-PCR de genes de agave importantes para su fisiología como rbcS, codificante de la sub-unidad pequeña de la RuBisCO; el de la enzima málica dependiente de NADP+; de la 1-SST fructosiltransferasa; y un gen de proteínas de estrés abiótico tipo LEA. Los métodos aquí reportados, y las bibliotecas generadas, podrán ser utilizados en estudios de fisiología molecular, genómica funcional, y análisis transcriptómico en agaves.

Palavras-chave : Agave tequilana; extracción de ARN; bibliotecas de ADNc; expresión génica; RT-PCR.

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