Introducción

El ricino (Ricinus communis), también conocido como higuerilla, es un arbusto perenne perteneciente a la familia Euphorbiaceae, ampliamente distribuido en regiones tropicales y subtropicales del mundo. Este arbusto destaca por su adaptabilidad a diversos climas, incluyendo tropicales, subtropicales y temperaturas templadas cálidas. En México, se encuentra en áreas tropicales del sur y semiáridas del norte del país, tanto en estado silvestre como cultivado con fines comerciales (^{Gómez-González et al., 2020}).

La semilla de ricino es rica en aceite con un contenido del 40 al 60 %, la demanda de este aceite de ricino ha mostrado un crecimiento anual del 3 al 5 % por su relevancia económica, ya que, por sus propiedades lubricantes es utilizado en la industria farmacéutica, cosmética, y en la producción de biodiesel (^{Suryaningsih et al., 2025}). Además, es utilizado en la medicina tradicional, por sus propiedades laxante, analgésica, antiinflamatoria y antimicrobiana (^{Kaur y Bhaskar, 2020}; ^{Cheikhyoussef}et al., 2023). Se han identificado metabolitos en el ricino, incluyendo el alcaloide ricinina, ácido ricinoleico, ácido undecilénico, tocoferoles, esteroles, saponinas y flavonoides (Saravena et al., 2022; Suryaningsih et al., 2025). Estos compuestos bioactivos, contribuyen a la actividad antimicrobiana del ricino, la ricinina, ha demostrado ser efectiva contra una variedad de patógenos, tanto en plantas como en humanos, lo que sugiere su aplicación en el control de enfermedades bacterianas (^{El-Naggar et al., 2018}).

Las bacterias fitopatógenas representan una amenaza significativa para la agricultura, afectando a una amplia gama de cultivos, impactando la calidad, rendimiento y producción general de estos. Entre las bacterias más relevantes se encuentran Xanthomonas perforans, Acidovorax citrulli, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis y Ralstonia solanacearum (^{Xhemali et al., 2024}; ^{Tapia-de la Barrera et al., 2023}; ^{Reyes-Tena et al., 2021}). Xanthomonas perforans es conocido por causar manchas en hojas de jitomate, dependiendo de la intensidad de la enfermedad y las condiciones climatológicas puede ocasionar del 23 al 44 % de daño en el cultivo (^{Osdaghi et al., 2021}). Mientras que A. citrulli es responsable de la enfermedad bacteriana del fruto en melón (Cucumis melo) y sandía (Citrullus lanatus), de los cuales en caso de infección puede generar la pérdida total del cultivo (^{Elizalde Jiménez et al., 2011}). Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis provoca la marchitez bacteriana en cultivos de jitomate, con afectaciones en el rendimiento de hasta un 46 %, y R. solanacearum, agente causal de la marchitez bacteriana de una amplia gama de plantas, el impacto económico de ésta depende del cultivo afectado (^{Longoria-Espinoza et al., 2020}; ^{Soto-Caro et al., 2023}).

El uso de extractos de ricino para combatir estas bacterias fitopatógenas ofrece una alternativa prometedora al uso de pesticidas y antibióticos, que se utilizan de manera convencional. La identificación y caracterización de los metabolitos responsables de la actividad antimicrobiana, utilizando técnicas avanzadas como la cromatografía en capa fina de alta resolución (HPTLC), pueden proporcionar información valiosa para el desarrollo de tratamientos alternativos. Por lo anterior, este estudio tuvo el objetivo de cuantificar la ricinina de nueve accesiones de ricino mediante HPTLC, además de evaluar su potencial bactericida frente a las principales bacterias asociadas a enfermedades fitopatógenas.

Desarrollo experimental

Colecta de muestra y elaboración de extractos vegetales. Se evaluaron nueve accesiones de higuerilla naturalizadas de México, colectadas en marzo de 2022 de un germoplasma generado en el campo experimental de Imala, Culiacán, Sinaloa (33° 34' 00.500" S, 70° 38' 00.400" W). El campo de germoplasma se estableció en octubre de 2021 con una accesión por cada dos surcos a una distancia de 25 cm en la línea y 90 cm entre surcos. La maleza se controló manualmente y solo se aplicó composta y biofertilizantes generados con microorganismos de montaña.

Se colectaron hojas de las accesiones identificadas con la clave 1+, 2+, 4+, 5+, 6+, 7+, 8+, 9+ y 10+, se secaron a temperatura ambiente, después se molieron con un molino para foliares con limpieza entre accesiones para evitar contaminación cruzada, después se tamizó el polvo con un tamiz No. 40. Se pesaron 10 g de cada muestra molida y tamizada, y se colocó en un matraz con 100 mL de metanol (grado HPLC) por separado; posteriormente, se dejaron en agitación constante en un agitador orbital por 48 h, a temperatura ambiente. Transcurrido el tiempo, se filtró con tela organza y papel filtro No. 1. El extracto se concentró en un rotavapor y se almacenó en un vial ámbar a 4 °C hasta su uso.

Cuantificación de ricinina por HPTLC. Con el aplicador semi-automático (Limonat 5, CAMAG), se aplicaron 10 µL de cada extracto en bandas de 8 mm de longitud sobre placas de aluminio TLC Sílica Gel 60 F254 de 20 x 10 cm (por triplicado). Las placas fueron desarrolladas en una cámara cromatográfica (CAMAG) previamente saturada por 10 min. Como fase móvil se utilizó tolueno-étil acetato 9:1 (v/v). Una vez alcanzado el frente de solvente (75 a 80 mm), la placa se dejó secar con aire frío por 5 minutos. Las placas se visualizaron empleando un escáner (TLC Scanner 4, CAMAG) a 254 y 366 nm de longitud de onda. Tanto la aplicación como el escaneo fueron controlados por el software visión CATS, versión 2.4 (CAMAG, Suiza). Se realizó una curva de calibración con diferentes concentraciones de Ricinina (metil-D3), 2, 0.2, 0.02, 0.002 y 0.0002 mg mL-1, disuelta en metanol HPLC. Se realizaron tres aplicaciones de cada concentración en una placa de silica gel F254 de 20 x10 cm, la fase móvil utilizada fue 9 mL de tolueno: 1 mL de acetato de etilo.

Reactivación de bacterias. Se emplearon cepas de Xanthomonas perforans, Acidovorax citrulli, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis y Ralstonia solanacearum proporcionadas del cepario del Laboratorio de Fitopatología del Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo (CIAD) Subsede Culiacán. Las cepas proporcionadas fueron aisladas de diferentes cultivos asociadas a diferentes sintomatologías. Se utilizó medio de cultivo Agar nutritivo para la reactivación de las cepas y éstas se incubaron a 27 °C hasta observar su desarrollo. Después se llevó a cabo un subcultivo de una sola colonia para asegurar la pureza de cada cepa.

Determinación de la inhibición del crecimiento bacteriano. Los extractos 2+ y 5+, se seleccionaron de una prueba preliminar de los nueve extractos vegetales (datos no mostrados). Los extractos fueron diluidos en agua destilada a concentraciones de 100, 75, 50 y 25 %. Se incluyó el bactericida Finalbacter® (Sulfato de Gentamicina y Clorhidrato de Oxitetraciclina), como testigo, para evaluar su efecto inhibitorio en comparación con los extractos vegetales.

En el procedimiento, se prepararon cultivos bacterianos de A. citrulli en agar B de King y agar nutritivo, C. michiganensis subsp. michiganensis en agar Mueller-Hinton, R. solanacearum en agar B de King y agar CPG, y X. perforans en agar nutritivo; posteriormente, se prepararon suspensiones bacterianas raspando las colonias del medio de cultivo y se agregaron en tubos de ensayo conteniendo agua destilada estéril hasta ajustar la turbidez al nivel 3 de la escala de McFarland (concentración 9 X 108 UFC). Se sembraron las cepas bacterianas (100 μL de suspensión) en las placas conteniendo los medios de cultivo mencionados previamente, y se distribuyó la muestra uniformemente con perlas de cristal. Seguido de esto, se aplicaron 5 μL de cada dilución de los extractos en tres puntos específicos de la placa por triplicado. Las placas fueron incubadas a 27 °C durante 48 horas para evaluar la inhibición del crecimiento bacteriano.

Análisis estadístico. Los datos obtenidos se analizaron mediante la prueba estadística ANOVA de una vía con un nivel de significancia de p < 0.05 y comparación de medias por Tukey utilizando el programa estadístico MINITAB 17.

Cuantificación de ricinina por HPTLC. De acuerdo con los resultados del análisis de ricinina mediante HPTLC, no se observó diferencia estadística significativa entre las distintas concentraciones (p=0.066). Se detectaron concentraciones que oscilaron entre 0.88 (4+) y 2.14 mg g⁻¹ (1+) (Cuadro 1). Estos resultados son consistentes con los reportados para la variedad Guanajuatoil de Ricinus communis (^{Zavala-Gómez et al., 2021}), aunque difieren el tejido de la planta utilizada para la extracción; la ricinina se encuentra en todas las partes de la planta (^{Nour et al., 2023}).

La cuantificación de ricinina es esencial para identificar las variedades potenciales con mayores concentraciones de este compuesto bioactivo y seleccionar las más efectivas para la producción de extractos y productos derivados, optimizando su uso en agricultura y medicina (^{Zheng et al., 2023}). Esta información también es valiosa para los programas de mejoramiento genético, el ajuste de prácticas de cultivo y maximización del valor comercial (^{Acosta-Navarrete et al., 2023}; ^{Leal et al., 2022}); además, garantiza la seguridad y eficacia en la aplicación de la ricinina, ya que su alta concentración puede ser tóxica (^{Staňková et al., 2020}).

Actividad antimicrobiana de los extractos metanólicos de higuerilla. El análisis estadístico permitió identificar diferencias significativas en los parámetros evaluados, como se observa en la gráfica de efectos principales (Figura 1).

Figura 1 Gráfica de efectos principales de los extractos metanólicos de hojas de higuerilla, bacterias (Xanthomonas perforans, Acidovorax citrulli, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis y Ralstonia solanacearum) y concentraciones de los extractos. Letras diferentes entre secciones significa diferencia estadística. 

De acuerdo con los resultados preliminares, los extractos de las accesiones 2+ y 5+ se destacaron por su mayor efectividad antimicrobiana. En contraste, el extracto 1+, a pesar de presentar la mayor concentración de ricinina, no mostró actividad antimicrobiana significativa, lo que sugiere que este alcaloide, de forma aislada, no es el principal responsable del efecto antimicrobiano. Esto sugiere, que otros compuestos bioactivos en los extractos pueden estar involucrados en la actividad antimicrobiana. Investigaciones de ^{Hussein et al. (2018}) y ^{Abomughaid et al. (2024}), han reportado que los extractos alcohólicos de hojas de R. communis contienen fitoquímicos como flavonoides, terpenos y taninos, los cuales poseen reconocida actividad antimicrobiana y mecanismos de acción bien definidos. Por tanto, es posible que la eficacia de los extractos 2+ y 5+ puede atribuirse a la presencia combinada o sinérgica de estos metabolitos secundarios. Por ello, es importante realizar más estudios de sus compuestos.

Se encontró diferencia estadística entre los extractos evaluados frente a los aislados bacterianos. En promedio el extracto 2+ generó el mayor halo de inhibición (19.31 mm) en comparación al extracto 5+ que obtuvo un halo de inhibición de 17.92 mm. La actividad antibacteriana se evidenció por la presencia de halos de inhibición definidos en las diferentes concentraciones analizadas (Figura 2). De igual manera, se encontró diferencia significativa entre las bacterias en estudio, donde R. solanacearum fue la que presentó mayor inhibición con un 21.36 mm, le siguen las bacterias A. citrulli y X. perforans con

18.5 mm respectivamente. Finalmente, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis obtuvo una inhibición de 13.48 mm. Dichos resultados coinciden con lo expresado por otros autores donde mencionan que los extractos metanólicos de hojas muestran la mejor actividad antimicrobiana sobre todo en bacterias Gram negativas (^{Hussein et al., 2018}; ^{Abd-Ulgadir et al., 2015}; ^{Al-Kuraishy et al., 2012}), tal como se observó en este estudio.

La evaluación de extractos de accesiones de higuerilla permite identificar compuestos bioactivos específicos con potencial antimicrobiano frente a bacterias fitopatógenas. En este sentido, los resultados de este trabajo abren la posibilidad de explorar, en futuras investigaciones, su incorporación en nuevos productos agrícolas como bioinsecticidas, biofungicidas o antimicrobianos naturales. Estos productos pueden ser formulados junto con otros ingredientes activos con eficacia comprobado como el ajo (Allium sativum), aceites esenciales (^{Hussein et al., 2025}), e incluso agentes microbianos como Trichoderma spp., y Bacillus spp. (^{Elhaj et al., 2021}) para generar una gama más amplia de soluciones en el mercado agrícola. Ejemplo de esto, es el estudio realizado por ^{Ramadass y Thiagarajam (2021}), donde evaluaron la actividad antibacterial de una formulación de higuerilla para el control de Xhantomonas oryzae demostrando su potencial bioactivo. Adicionalmente, se han evaluado extractos de higuerilla en otros fitopatógenos como el nematodo Pratylenchus brachyurus (^{Izidoro et al., 2021}).

Los extractos de higuerilla han sido evaluados in vitro en Ralstonia solanacearum aislada de chile pimiento, generando halos de inhibición de 11.88 mm en concentraciones del 100 % (^{Mayanglambam et al., 2020}). De manera similar, en este estudio se encontró diferencia estadística entre las concentraciones de los extractos y se observó que la concentración del 100 y 75 % (Cuadro 2) mostraron el mayor halo de inhibición con 21.27 y 20.45 mm, respectivamente. En las pruebas con la concentración del 50 % y el control químico presentaron una inhibición de 18.54 y 17.55 mm y, por último, la concentración del 25 % fue la que menor halo de inhibición presentó (15.27 mm). Dichos resultados sugieren una relación directa entre la concentración del extracto y la efectividad antimicrobiana, ya que las concentraciones más bajas y el control químico mostraron halos de inhibición menores, destacando la importancia de utilizar concentraciones adecuadas para maximizar la actividad antimicrobiana.

Figura 2 Actividad antibacteriana del extracto 2+ contra Ralstonia solanacearum. Se observaron zonas claras de inhibición a diferentes concentraciones del extracto (25, 50, 75 y 100 %), en comparación con el control químico. 

Es importante evaluar los extractos de hojas de higuerilla (Ricinus communis) por su actividad antimicrobiana y sus propiedades medicinales, ya que se ha documentado que contienen compuestos bioactivos, como ricinina, flavonoides, ácidos fenólicos y terpenoides (^{Martínez-Mora et al., 2023}), efectivos en el tratamiento de infecciones cutáneas como leishmaniasis y candidiasis (^{Ghani et al., 2023}; ^{Kebede y Shibeshi, 2022}; ^{Suurbaar et al., 2017}). Aunque en el presente estudio se evaluó únicamente la actividad frente a bacterias asociadas a enfermedades en plantas (Xanthomonas perforans, Acidovorax citrulli, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis y Ralstonia solanacearum), investigaciones previas han demostrado que dichos extractos también pueden ejercer efectos insecticidas y antifúngicos sobre plagas de interés agronómico (^{Manzoor et al., 2025}; Kebede y Shibeshi, 2022; ^{Sotelo-Leyva et al., 2020}).

Este estudio representa una contribución importante al campo de la fitopatología, pues no solo confirma el potencial de R. communis como fuente de compuestos bioactivos antimicrobianos, sino que también abre la puerta al desarrollo de bioinsumos agrícolas alternativos, sustentables y menos dependientes de agroquímicos sintéticos. Se recomienda profundizar en la caracterización de los metabolitos responsables de la actividad antimicrobiana, estudiar su efecto en condiciones de invernadero o campo y, ampliar los estudios a otros patógenos, así como modalidades de aplicación para validar su potencial en el manejo integrado de plagas y enfermedades, contribuyendo a la sostenibilidad en los sectores agrícola y sanitario.

Conclusiones

Los extractos metanólicos de hojas de Ricinus communis evaluados en este estudio demostraron una actividad antimicrobiana significativa contra bacterias clave en la agricultura, como Ralstonia solanacearum, Acidovorax citrulli y Xanthomonas perforans. Las accesiones 2+ y 5+ destacaron por su mayor efectividad, con un promedio de 19.31 mm y 17.92 mm de halo de inhibición, lo que evidencia su potencial como agentes bactericidas naturales para el manejo integrado de estas fitobacterias. La cuantificación de ricinina mediante HPTLC mostró variaciones en la concentración de este alcaloide entre accesiones, pero la falta de correlación directa con la actividad antibacteriana sugiere la probable participación de otros metabolitos secundarios en la inhibición bacteriana, aportando una visión novedosa sobre la complejidad del perfil bioactivo del ricino.