Introducción

Distintos factores ambientales pueden causar estrés en la avicultura. La temperatura ambiental es un factor importante en la producción avícola, ya que afecta el rendimiento del animal y causa problemas económicos^1-4. En general, se ha reportado que la temperatura termoneutral es de 16-25 °C en aves de corral⁵. Se ha informado que el estrés fisiológico se produce si la temperatura ambiental permanece por encima de la temperatura termoneutral⁶. Cuando se expone al estrés, la hormona adrenocorticotrópica (ACTH, por sus siglas en inglés) se secreta dependiendo de la hormona (CRH) que secreta corticotropina del hipotálamo. La ACTH proporciona la secreción de corticosteroides y adrenalina. Así, los metabolismos de glucosa, lípidos y proteínas son regulados por la secreción de altas cantidades de corticosteroides en el ambiente como adaptación metabólica durante el estrés por calor^7-9. El metabolismo, la nutrición y las condiciones ambientales son eficaces en el equilibrio ácido-base del cuerpo. Los parámetros más importantes que indican el estado ácido-base de la sangre son el pH sanguíneo, el bicarbonato (HCO₃ ^-) y las concentraciones de iones de sodio (Na⁺), potasio (K⁺) y cloro (Cl^-). Los minerales monovalentes juegan un papel importante para el equilibrio ácido-base^10-12. Los animales mantienen la homeostasis bajo condiciones de estrés por calor a través de la vasodilatación, convección y evaporación¹³. Inicialmente, los factores de estrés ambiental alteran el funcionamiento metabólico en las aves de corral y hacen que la producción de glucosa mantenga la homeostasis durante la presencia de factores estresantes. Bajo estrés por calor, los sacos aéreos juegan un papel importante en el intercambio de gases, ya que aumentan la circulación de aire hacia la superficie, lo que resulta en una evaporación que hace que el calor se propague¹⁴.

Debido al estrés, se produce oxidación en la estructura de las proteínas y el ADN en la sangre y los tejidos. Como resultado del estrés por calor, se observa un aumento de las proteínas de choque térmico¹⁵. Las proteínas de choque térmico (HSP, por sus siglas en inglés) son una familia de proteínas producidas por las células en respuesta a factores estresantes que están o no relacionados con la temperatura¹⁶. Las HSP son una familia importante de proteínas que se han conservado a lo largo de la evolución y se expresan en todos los seres vivos, desde procariontes hasta eucariontes. Las HSP han realizado tareas como el plegamiento de proteínas recién sintetizadas en la célula, la prevención de la agregación de proteínas, la estabilización de proteínas y la eliminación de proteínas mal plegadas. Las HSP se dividen en cinco clases principales según su masa molecular: HSP pequeñas (<40 kDa), HSP60 (60 kDa), Hsp70 (70 kDa), HSP90 (90 kDa) y HSP100 (100 kDa). Cada HSP tiene diferentes isoformas, y se localizan en diferentes partes de la célula. La chaperona molecular Hsp70 juega un papel central en el control de calidad de las proteínas. Al unirse a los sustratos de proteína Hsp70, les ayudan a plegarse, descomponerse, transferirse, regular y prevenir la agrupación. El sustrato de Hsp70 se une a regiones hidrofóbicas en las proteínas y ayuda a las proteínas recién sintetizadas y a las proteínas parcialmente plegadas a plegarse correctamente^17-21.

Estudios previos informaron que el estrés por calor causa bajo rendimiento en el animal y suprime el sistema inmunológico²². Después del estrés por calor; disminución del peso vivo, palidez en el color de la carne²³, baja inmunidad, bajo equilibrio líquido-electrolítico e irregularidad en el pH sanguíneo²⁴, incluso se pueden observar casos como muerte súbita en pollos de engorda. Cuando el estrés por calor ocurre en pollos de engorda, se puede producir alteración del equilibrio ácido-base y alcalosis respiratoria²⁵.

La hesperidina es un antioxidante eficaz que reduce el estrés oxidativo. También inhibe la peroxidación lipídica^26,27. Se ha reportado que la concentración de lactato deshidrogenasa y proteína de choque térmico (Hsp70), que son marcadores de estrés por calor, disminuye con la adición de hesperidina a las raciones de aves de corral²⁸. Se ha informado que, para superar los efectos negativos del estrés por calor en codornices japonesas, se debe administrar una buena estrategia de nutrición²⁹. Las dietas suplementadas con hesperidina proporcionan una alternativa al uso de aditivos sintéticos, pueden mejorar el perfil lipídico de la carne de pollo y asegurar una producción de carne de ave de mayor calidad^30,31. Además, estudios recientes han manifestado que el aporte de hesperidina a la ración tiene efectos positivos sobre la calidad de la carne, la calidad del huevo y la microflora intestinal en codornices^32,33.

La industria avícola de los Estados Unidos ha informado que se han perdido $ 2.4 mil millones debido al estrés por calor³⁴. Se ha demostrado que el estrés por calor tiene efectos adversos en los pollos de engorda, incluido un mayor consumo de alimento, así como una reducción de la tasa de crecimiento y la vitalidad de los pollos de engorda³⁵. Además, puede disminuir la calidad de los productos obtenidos de los pollos de engorda al aumentar su grasa abdominal³⁶. En el presente estudio, se determinarán los efectos de la hesperidina, un subproducto de los cítricos, sobre los parámetros sanguíneos y los niveles de Hsp70.

Material y métodos

En el estudio, 160 codornices (Coturnix coturnix japonica, machos) de 6 semanas de edad con un peso vivo de 150-200 g se alojaron en jaulas durante 1 semana de ejercicio y durante 5 semanas de período experimental con 10 codornices por jaula, un total de 42 días. Las codornices se alojaron en jaulas (45 cm de ancho X 20 cm de alto X 90 cm de largo). El diseño del estudio consta de 4 grupos con 40 animales y 4 subgrupos dentro de cada grupo. La agrupación se realizó en forma de 2x2. Los grupos termoneutrales (24 ± 0.1 °C) son NC (0 g de hesperidina/kg de alimento base) y NHES3 (3 g de hesperidina/kg de alimento base) y los grupos bajo estrés por calor (34 ± 0.1 °C) son HC (0 g de hesperidina/kg de alimento base) y HHES3 (3 g de hesperidina/kg de alimento base), y se generaron aleatoriamente. La hesperidina (C28H34015, núm. de cas: 520-26-13, pureza del 91 %, empresa Chem-Impex International, EE.UU.) utilizada en el estudio estaba disponible comercialmente. Las raciones utilizadas en el experimento se formularon de acuerdo con las recomendaciones del NRC³⁷ (Cuadro 1).

En el estudio se suministró alimento granular y agua ad libitum a los animales. Durante el período de estudio hubo una humedad relativa del 50-60 % en las jaulas. Se utilizaron lámparas fluorescentes para la iluminación, y se utilizó un temporizador (Cata CT 9181, China) durante el ensayo para proporcionar 16 h de luz y 8 h de oscuridad junto con luz solar. Para crear estrés por calor en las jaulas, se utilizaron calentadores eléctricos para calentar los compartimentos. La jaula de ensayo se mantuvo a temperatura ambiente, mientras que el grupo sometido a estrés se mantuvo a 34 ± 0.1 °C durante el período del ensayo utilizando los calentadores eléctricos con control de termostato, y las codornices en el grupo termoneutral se mantuvieron a 24 ± 0.1 °C. Durante el período de experimentación, la humedad relativa de la sala de ensayo se midió constantemente con un higrómetro y se mantuvo bajo control. Se utilizaron ventiladores eléctricos para regular la circulación de aire y deshacerse del polvo acumulado y los gases nocivos en las jaulas.

Resultados

Dentro del alcance del experimento, existe una diferencia estadísticamente significativa entre los grupos termoneutrales y los grupos bajo estrés por calor en términos de las concentraciones de pCO₂, pO₂, pH, HCO₃, Na, K y Cl entre los parámetros sanguíneos (P<0.05); sin embargo, todos los grupos arrojaron los mismos resultados en términos de hematocrito y hemoglobina (P>0.05). En los parámetros de gases en sangre, la pCO₂ fue menor en el grupo bajo estrés por calor HC; fue mayor en el grupo HHES3 (P<0.05). La pO₂ fue mayor en el grupo HC, que es el grupo bajo estrés por calor, y menor en el grupo HHES3 (P<0.05). El pH sanguíneo fue más bajo en el grupo HHES3; fue mayor en el grupo HC (P<0.05). Las concentraciones sanguíneas de Na y Cl fueron menores en los grupos bajo estrés por calor; fueron mayores en los grupos termoneutrales (P<0.05). La concentración de K fue menor en el grupo HC y fue mayor en el grupo HHES3 (P<0.05) (Cuadro 2).

Además, la concentración sérica de la enzima fosfatasa alcalina (ALP, por sus siglas en inglés) en los parámetros séricos sanguíneos fue menor en el grupo HHES3; fue mayor en el grupo HC (P<0.05); no obstante, todos los grupos son similares en términos de otros parámetros (Cuadro 3).

En cuanto al parámetro HSP 70, fue más bajo en el tejido del pecho en los grupos termoneutrales (P>0.05). La concentración fue similar en todos los tejidos en los grupos termoneutrales (P>0.05). En los grupos bajo estrés por calor, la concentración sérica fue más alta en el grupo HC, pero más baja en el grupo HHES3 (P<0.05). La concentración en los tejidos hepáticos y renales fue alta en el grupo HC bajo estrés por calor, mientras que fue significativamente menor en el grupo HHES3. Además, en los grupos bajo estrés por calor, la concentración de Hsp70 en el tejido hepático fue más baja en el grupo HHES3 (P<0.05) (Figura 1).

Figura 1 Nivel de expresión de proteína de Hsp70 en los grupos experimentales 

Discusión

Existen muchos estudios sobre el efecto del estrés por calor en la adición de vitaminas, aminoácidos y minerales en el alimento de las aves de corral^3,5. El presente estudio se realizó para observar los efectos de la hesperidina, un flavonoide incluido en la dieta, sobre la bioquímica sanguínea y la expresión de Hsp70 en codornices expuestas a estrés por calor.

Dependiendo del aumento de la temperatura ambiental, se producen algunos cambios en la sangre y el metabolismo. En caso de respiración rápida, se produce una alta pérdida de dióxido de carbono, una disminución de la presión parcial de CO₂ (pCO₂) en la sangre y un aumento del pH de la sangre. La hiperventilación altera el equilibrio ácido-base en las aves de corral a través del desarrollo de alcalosis respiratoria³⁹. En el presente estudio la presión pCO₂ fue menor en el grupo HC, mientras que la presión pO₂ fue mayor. Mientras que la presión pCO₂ más alta se observó en el grupo HHES3, la presión pO₂ fue más baja. Mientras que las presiones pCO₂ y pO₂, que fueron similares en el grupo termoneutral, aumentaron en los grupos bajo estrés por calor, la pCO₂ aumentó; como era de esperar, la pO₂ disminuyó. Attia et al³ informaron que con la adición de aminoácidos a la ración en pollos de engorda bajo estrés por calor, el pH sanguíneo fue ligeramente mayor en el grupo de control bajo estrés por calor. Dependiendo de la temperatura ambiental, el mayor pH en el grupo HC y la disminución del pH en el grupo HHES3 pueden estar asociados con la suplementación con hesperidina. En el presente estudio una disminución en el nivel de pH sanguíneo por debajo del nivel de pH neutro (7.35), un aumento en pCO₂ a 48 mmHg y una disminución en pO₂ a 40 mmHg en el grupo HHES3 bajo estrés por calor se considera un cuadro de acidosis respiratoria. Además, la concentración de HCO₃ en sangre es más alta en el grupo HC, mientras que está en el nivel de los grupos termoneutrales en el grupo HHES3. No se ha observado ningún efecto de compensación sobre el pH de la sangre debido a la adición de hesperidina.

Si bien la concentración de hemoglobina en sangre fue más baja en el grupo HC, se acercó a la de los grupos termoneutrales en el grupo HHES3. En estudios previos, también se ha reportado que la concentración de hemoglobina en la sangre que ocurre a temperatura normal tiende a disminuir debido a un aumento del estrés por calor^40,41.

En general, las concentraciones de Na, K y Cl son importantes para el equilibrio ácido-base de la sangre en términos de pH. El pH de la sangre aumenta con la formación de alcalosis respiratoria. En el presente estudio el pH de la sangre fue más alto en el grupo HC de los grupos bajo estrés por calor, como se esperaba, dependiendo del estado de alcalosis. Sin embargo, el pH de la sangre cambió a pH neutro en el grupo HHES3, lo que se pensó que estaba relacionado con el aporte de hesperidina. Contrariamente a los grupos termoneutrales, no se espera que la concentración de Na, que es un catión importante, sea más baja en el grupo HC. Asimismo, la concentración de K en el grupo HC también ha mostrado una disminución. Aunque las concentraciones de Na y K mostraron una similitud general en los grupos normales y de estrés por calor en el presente estudio, se ha observado mayor concentración de K y menor concentración de Cl en sangre en el grupo HHES3 con un pH bajo. Del mismo modo, en un estudio realizado sobre los efectos del estrés por calor en el ganado lechero, se ha informado que una disminución en las concentraciones de Na y K en el líquido ruminal causa excreción urinaria de Na y pérdida de K en la piel⁴². El intervalo normal para la concentración de cloro en la sangre está entre 97 y 107 mEq/L. Se ha reportado que, cuando se produce estrés en el cuerpo, los niveles de electrolitos pueden volverse irregulares; por lo tanto, se produce un aumento de la concentración de cloro en la sangre⁴³. No obstante, en el presente estudio, mientras que la concentración de cloro en la sangre está por encima de los niveles normales en los grupos termoneutrales, se cree que la concentración de cloro en la sangre de un animal bajo estrés por calor ha alcanzado el límite superior como resultado de la compensación.

Se ha informado que la gluconeogénesis se estimula aumentando el número de radicales libres en el ambiente debido al estrés por calor, secretando las hormonas ACTH y cortisol, y evitando la liberación de insulina de las células β en el páncreas; aumentando así los niveles de glucosa sérica⁴⁴. Rudich et al⁴⁵ han informado en su estudio que las condiciones de estrés oxidativo afectan negativamente la secreción de insulina. En el presente estudio también se ha determinado que el nivel de glucosa en sangre es más bajo en los grupos termoneutrales que en el grupo HC. Como resultado, al igual que en estudios previos^46,47, la concentración de glucosa en sangre aumentó en el grupo HC bajo estrés por calor; y hesperidina en el grupo NHES3 y la concentración más baja en el grupo HHES3 bajo estrés por calor en comparación con el grupo HC. Se ha reportado que el estrés causado por la administración de la hormona adrenocorticotrópica (ACTH), una de las hormonas del estrés, aumenta los niveles de glucosa, colesterol y lipoproteínas de alta densidad (HDL, por sus siglas en inglés) en sangre, pero reduce el nivel de triglicéridos⁴⁸. Moeni et al⁴⁹ reportaron que el aporte de cromo a las raciones de pollos de engorda reduce los niveles de triglicéridos, colesterol y LDL en sangre, pero aumenta las concentraciones de colesterol y HDL.

Como se informa en estudios previos, se observó que la concentración de triglicéridos en sangre fue más alta en el grupo HC bajo estrés por calor y cercana en el grupo HHES3, mientras que fue cercana en el grupo NHES3. Eso significa que la concentración de triglicéridos en la sangre ha aumentado debido al estrés por calor. Según Rashidi et al⁴⁷, ese aumento en el nivel de lípidos en la sangre se debe al estrés por calor, a la disminución del consumo de alimento y a la provisión de necesidades energéticas por movilización de recursos lipídicos. Por otro lado, en el presente estudio, informaron que la adición de cromo y selenio orgánico a la ración disminuyó el contenido de lípidos séricos, similar a la disminución en los niveles séricos de colesterol total y triglicéridos en los grupos NHES3 y HHES3 en comparación con el grupo HC. Se observó que la concentración de HDL en sangre en los grupos termoneutrales fue menor en los grupos NHES3 y HHES3 en comparación con el grupo NC bajo estrés por calor, en comparación con el grupo HC. Como resultado, se cree que la proporción de HDL disminuyó con la adición de hesperidina.

Además, en respaldo del presente trabajo, Moeini et al⁴⁹ informaron que, cuando el estrés fue creado por estrés por calor (33 ± 3 °C), el nivel de colesterol total disminuyó en los grupos de ensayo donde se añadió cromo orgánico en comparación con el grupo de control, dependiendo del aumento de la dosis. Del mismo modo, en el presente estudio, la concentración de colesterol total en el grupo NHES3 disminuyó sin dependencia del estrés por calor. El grupo con la hesperidina adicional, que está bajo estrés por calor, tiene el nivel más bajo de colesterol. Se cree que la disminución de la concentración de colesterol total en el grupo HHES3 en comparación con el grupo de control normal y el grupo de control bajo estrés por calor ocurrió debido a la adición de hesperidina de 3 g/kg y la dosis.

El estrés oxidativo causado por el estrés por calor aumenta la producción de radicales libres, lo que conduce a la oxidación de la membrana celular, la peroxidación lipídica que conduce al daño hepatocelular, el aumento de los niveles de enzimas intracelulares, que incluyen la aspartato aminotransferasa (AST) y la lactato deshidrogenasa (LDH). Existe una diferencia estadísticamente significativa entre los grupos normales y de estrés por calor en términos de los niveles de enzimas ALP en suero sanguíneo (P<0.05). En el presente estudio, la concentración sérica sanguínea de la enzima fosfatasa alcalina (ALP, por sus siglas en inglés) en el grupo HC bajo estrés por calor aumentó debido al estrés por calor. Sin embargo, una disminución significativa observada tanto en el grupo NHES3 en los grupos termoneutrales como en el grupo HHES3, que es el grupo bajo estrés por calor, puede deberse a la suplementación con hesperidina. En general, se ha observado que las concentraciones de las enzimas ALT, AST, ALP y LDH cambian tanto en los grupos termoneutrales como en los de estrés por calor debido al aporte de hesperidina. Mehaisen et al⁵⁰ observaron un aumento similar en la concentración de enzimas ALT, AST en el grupo de control bajo estrés por calor debido a la adición de propóleo a la ración en estrés por calor. En el mismo estudio, se informó que los niveles de las enzimas ALT y AST disminuyeron con la adición de propóleo en los grupos de ensayo de manera similar a como lo hicieron en el presente estudio. Los resultados obtenidos en el presente estudio son consistentes con estudios previos^51,52. En el presente estudio se ha observado que el nivel de AST es ligeramente más alto en los grupos termoneutrales que en los grupos bajo estrés por calor. No obstante, los datos de AST obtenidos en el estudio de estrés por calor realizado por Abdelhady et al⁵³ han reportado una concentración menor que el presente estudio.

En la Figura 2 se observó que el nivel enzimático de LDH fue menor en los grupos bajo estrés por calor en comparación con los grupos termoneutrales, pero tanto los grupos NHES3 y HHES3 fueron menores que los grupos NC y HC. De manera similar al presente estudio, Al-Mashhadini et al⁵⁴ han informado que el uso de aceite de sésamo en animales expuestos a estrés por calor ha reducido la concentración de enzimas LDH en sangre en el grupo alimentado con aceite de sésamo adicional en comparación con el grupo de control a temperatura normal, que la concentración de la enzima LDH aumentó debido al efecto del estrés en el grupo de control bajo estrés por calor, y que se encontró que la concentración de enzimas LDH era menor en el grupo alimentado con aceite de sésamo adicional que en el grupo de testigo. Además, existen múltiples estudios que reportan que la concentración de LDH en sangre aumenta debido al estrés por calor en aves de corral expuestas a 41-42 °C de temperatura^55,56.

Figura 2 Nivel de la enzima lactato deshidrogenasa en condiciones termoneutrales y de estrés por calor 

En el presente estudio se ha observado que los niveles de proteína total tienen una concentración un poco más alta en condiciones termoneutrales que en estrés por calor (Cuadro 3). La adición de hesperidina a la ración en el grupo HHES3 aumentó el nivel de proteína. El nivel de proteína total aumentó en los grupos HC bajo estrés por calor, pero se ha observado una disminución en el grupo HHES3 con la hesperidina adicional. Un alto nivel de proteína total bajo estrés por calor se asocia con un aumento en la concentración de proteínas de choque térmico (Hsp70)^57,58.

La concentración de albúmina en el suero sanguíneo estuvo en una concentración similar en los grupos termoneutrales que en los grupos bajo estrés por calor. Como resultado, a excepción de una ligera disminución en el nivel de albúmina de la condición termoneutral al estrés por calor, se cree que la adición de hesperidina no tiene un efecto positivo sobre la concentración de albúmina en la sangre. Efecto de la vitamina E sobre el estrés por calor, Şahin⁵⁹ ha informado que el estrés por calor inhibió el total, existiendo una situación similar en términos de globulina. Se encontró un nivel más bajo de globulina bajo estrés por calor que a temperatura normal. Similar al presente estudio, en un trabajo que investigó la concentración de proteína y albúmina.

Entre los estudios recientes sobre el estrés por calor, Al-Mashhadani et al⁵⁴ determinaron el efecto del aceite de sésamo sobre el estrés por calor y encontraron que la concentración de albúmina en la sangre aumentó hacia el grupo bajo estrés por calor; sin embargo, el grupo con estrés por calor y aceite de sésamo ha presentado una disminución, como en el presente estudio. Conocida como chaperona molecular, Hsp70 es una proteína que se ha conservado a lo largo de la evolución y es producida por las células de todos los seres vivos en respuesta a estímulos de estrés. Los niveles de Hsp70 son bastante altos en los primeros momentos en que comienza el estrés celular. Hsp70 es vital en todas las etapas del metabolismo celular, incluyendo el crecimiento, diferenciación, división e incluso muerte celular. En particular, el estrés por calor y la cantidad de ERO que aumenta en consecuencia interrumpen las estructuras tridimensionales y la estabilidad de las proteínas en las células, lo que lleva a su desnaturalización. Los factores de estrés celular en el citosol complican el proceso de plegamiento de las proteínas. Por lo tanto, el control de calidad de las proteínas es necesario para que la célula mantenga su viabilidad. Hsp70 tiene funciones tales como el plegamiento correcto de cadenas de proteínas recién sintetizadas, translocación de proteínas entre membranas, inhibición de la agregación de proteínas y la detección de proteínas deterioradas para su degradación. Así, Hsp70 ha sido reconocido como un biomarcador importante para aumentar los niveles de expresión de Hsp70 para mantener la integridad celular en casos de aumento del estrés en la célula y para monitorear el estrés por calor y ERO que aumentan en consecuencia^17-19. En estudios previos, se ha informado que la quercetina y varios otros flavonoides inhiben la inducción de Hsp70 causada por el choque térmico a nivel celular a nivel de acumulación de ARNm⁶⁰. Budagova et al⁶¹ reportaron que la quercetina, uno de los flavonoides naturales de la respuesta celular in vitro al estrés inducido por el estrés por calor, inhibe completamente la síntesis y acumulación intracelular de proteína de choque térmico (Hsp70) en respuesta a la hipertermia. Kim et al⁶² han reportado en su estudio que la fisetina, un flavonoide dietético, puede inhibir la actividad de HSP, interactuar con la proliferación de células cancerosas e inducir la apoptosis. Xu et al⁶³ han informado en su estudio que la quercetina puede tener un papel citoprotector que puede actuar a través de una vía mitocondrial durante la exposición al estrés por calor. En el presente estudio hubo una disminución en los niveles de Hsp70 en el suero sanguíneo y tejidos renales, hepáticos y del pecho de codorniz, en el grupo HHES3 en comparación con el grupo HC en los grupos bajo estrés por calor. Sin embargo, el nivel de Hsp70 en los tejidos hepáticos, renales y del pecho en los grupos termoneutrales fue similar al del grupo NC. De acuerdo con estos resultados, se cree que la suplementación con hesperidina en casos de estrés por calor tiene un gran potencial como un aporte importante para reducir el aumento del estrés en los tejidos debido al aumento del calor, similar a estudios anteriores.

Conclusiones e implicaciones

Como resultado, la prevención y el tratamiento de enfermedades utilizando fitoquímicos, en particular flavonoides, son bien conocidos. Las frutas y verduras son fuentes naturales de flavonoides. Varios flavonoides que se encuentran en la naturaleza tienen sus propias propiedades físicas, químicas y fisiológicas. Estas sustancias se utilizan más ampliamente en los países en desarrollo. Como resultado del estudio, cuando la hesperidina, un flavonoide, se agregó al alimento, en comparación con el grupo HC, en el grupo HHES3 causó una mejora en las concentraciones de hemoglobina, pO₂, pH, HCO₃ y Cl en el caso de estrés por calor. Además, en el caso de estrés por calor, las concentraciones de glucosa, triglicéridos, HDL y colesterol total en sangre disminuyeron en el grupo HHES3 en comparación con el grupo HC. La concentración de enzimas ALP mostró una disminución significativa en el grupo HHES3 en comparación con el grupo HC bajo la condición de estrés por calor. El nivel de proteína Hsp70 aumentó en el suero sanguíneo y tejidos de riñón, hígado y del pecho en el grupo HC con estrés celular durante el estrés por calor; no obstante, la concentración de Hsp70 disminuyó significativamente en el grupo HHES3. Se cree que el uso de hesperidina, que es un suplemento agregado al alimento bajo estrés por calor, puede ofrecer una estrategia nutricional potencial para superar los efectos nocivos de los factores estresantes en la avicultura.